清胰利胆方对重症急性胰腺炎大鼠炎症因子、肠黏膜屏障功能和肺泡巨噬细胞凋亡的影响

傅 超 赵贤宝 马 云 季倩青 陈 亮

义乌市中心医院 浙江 义乌 322000

本文旨在探讨清胰利胆方对重症急性胰腺炎（SAP）大鼠炎症因子、肠黏膜屏障功能和肺泡巨噬细胞凋亡的影响。

1 材料

1.1 实验动物：由广东省医学实验动物中心提供的60只SPF级健康SD大鼠，体重220±20g，适应性饲养1周，自由饮食饮水，控制饲养温度22～25℃，控制饲养湿度50%～60%，自然昼夜交替。许可证号：SCXK（粤）2008-0002。

1.2 药物：清胰利胆方，组成包括金银花、柴胡、牡丹皮各6g，大黄、赤芍、姜黄、牡蛎、醋延胡索各3g。药材由我院中药房提供，均经中药房鉴定合格。药材经冷水浸泡120min，水煎，浓缩成含生药1g/ml的浓缩药液。

2 方法

2.1 分组：将60只大鼠均分为四组，每组15只，分别编号对照组、模型组、低剂量组、高剂量组。

2.2 模型制备：将模型组、低剂量组、高剂量组三组大鼠均禁食12h，并平卧固定于手术台上。行戊巴比妥钠腹腔注射麻醉；予上腹部正中部位作切口，暴露胰腺头部，辨认十二指肠乳头；使用留置针于十二指肠乳头旁进行穿刺，胰胆管沿乳头方向探入且推入1.5cm，采用微血管镊加管固定，且以微血管镊夹闭胆总管。推注3.5%牛黄脱氧胆酸钠0.1ml/100g，推注速度为0.1ml/min，观察大鼠胰腺情况。若胰腺出现坏死、点状出血、皂化斑形成及种植等改变则为造模成功。

2.3 给药方法：等剂量生理盐水对对照组、模型组进行灌胃，清胰利胆方1ml/kg对低剂量组进行灌胃，清胰利胆方4ml/kg对高剂量组进行灌胃。

2.4 标本采集和检测方法：分述如下。

2.4.1 标本采集：①血清标本采集：给药24h后，抽取大鼠眼眶血，放置于离心机上进行分离，取上层血清，并放置于-70℃环境下储存待测；②胰腺组织采集：大鼠于给药24h后，称取体重，断颈处死后取胰腺组织，计算胰腺重量指数；③肺泡巨噬细胞采集：大鼠于给药24h后，处死大鼠，摘取左肺，分离肺泡巨噬细胞。

2.4.2 病理形态学：取胰腺组织切片5μm，常规HE染色观察胰腺组织形态学。取水肿、坏死、炎症、出血各个评分之和为胰腺病理评分。

2.4.3 炎症因子水平检测：取上述适量血清，以ELISA法进行白介素-6（IL-6）、白介素-8（IL-8）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平的检测。

2.4.4 肠黏膜屏障功能指标的检测：取上述适量血清，以ELISA双抗体夹心法进行D-乳酸、二胺氧化酶（DAO）水平的检测。

2.4.5 肺泡巨噬细胞凋亡测定：取上述肺泡巨噬细胞，根据Annexin V FITC/PI凋亡检测试剂盒说明书标准测定细胞凋亡率。

3 统计学方法

4 结果

4.1 四组胰腺病理损伤评分比较：四组间胰腺病理损伤评分比较，差异均有统计学意义（P＜0.05），且除对照组外，各组间呈剂量依赖性。见表1。

表1 四组胰腺病理损伤评分比较（±s，分)

表1 四组胰腺病理损伤评分比较（±s，分)

注：与对照组比较，*P＜0.05；与模型组比较，#P＜0.05；与低剂量组比较，△P＜0.05。

胰腺病理损伤评分0.18±0.04 6.87±0.73*3.19±0.38*#1.08±0.27*#△分组对照组模型组低剂量组高剂量组例数15 15 15 15

4.2 四组炎症因子水平比较：四组间血清IL-6、IL-8、TNF-α水平比较，差异均有统计学意义（P＜0.05），且除对照组外，各组间呈剂量依赖性。见表2。

表2 四组炎症因子水平的比较（±s，pg/ml）

表2 四组炎症因子水平的比较（±s，pg/ml）

注：与对照组比较，*P＜0.05；与模型组比较，#P＜0.05；与低剂量组比较，△P＜0.05。

TNF-α 58.92±12.12 235.42±37.21*142.32±28.38*#83.21±20.43*#△组别对照组模型组低剂量组高剂量组例数15 15 15 15 IL-6 137.82±25.42 387.91±47.28*269.42±37.41*#162.32±21.89*#△IL-8 10.37±2.12 45.32±6.56*27.81±4.89*#15.46±3.31*#△

4.3 四组肠黏膜屏障功能指标比较：四组间血清D-乳酸、DAO水平比较，差异均有统计学意义（P＜0.05），且除对照组外，各组间呈剂量依赖性。见表3。

表3 四组肠黏膜屏障功能指标的比较（±s，μg/L）

表3 四组肠黏膜屏障功能指标的比较（±s，μg/L）

注：与对照组比较，*P＜0.05；与模型组比较，#P＜0.05；与低剂量组比较，△P＜0.05。

DAO 106.42±10.29 212.34±19.84*165.28±15.45*#132.27±13.12*#△分组对照组模型组低剂量组高剂量组例数15 15 15 15 D-乳酸116.23±15.45 272.12±29.18*208.32±23.27*#132.14±13.45*#△

4.4 四组肺泡巨噬细胞凋亡率比较：四组间肺泡巨噬细胞凋亡率比较，差异均有统计学意义（P＜0.05），且除对照组外，各组间呈剂量依赖性。见表4。

表4 四组肺泡巨噬细胞凋亡率的比较（±s，%)

表4 四组肺泡巨噬细胞凋亡率的比较（±s，%)

注：与对照组比较，*P＜0.05；与模型组比较，#P＜0.05；与低剂量组比较，△P＜0.05。

肺泡巨噬细胞凋亡率17.82±3.24 3.25±0.76*6.98±2.14*#13.97±3.87*#△分组对照组模型组低剂量组高剂量组例数15 15 15 15

5 讨论

SAP的发病机制较为复杂，目前认为胰酶活性、微循环障碍等多种因素参与该病的发生与发展。当胰酶内消化酶被异常活化时可发生SAP，消化酶的活化引起大量炎性细胞因子分泌，从而导致胰腺组织出现细胞死亡、水肿、血管损伤和炎症反应等。因此，采取及时有效的治疗SAP方法尤为重要。

中医学认为，SAP可归属于“腹痛”“脾心痛”“胰瘅”等范畴，《黄帝内经》提出，SAP发病时“痛如以锥针刺其心”特点；汉代张仲景《金匮要略》曰：“病者腹满……痛者为实，可下之。”《三因极一病证方论》曰：“脾心痛者，如针锥刺其心腹，蕴蕴然气满。”饮食不节、食肥甘厚味，外邪侵袭，感受湿热，情志不畅等均是SAP的诱发因素，致湿热蕴结于中焦，使气滞血瘀，进一步发展为热毒炽盛，瘀热内阻，故治疗应以清热解毒、活血化瘀、通腑泻热等为法。清胰利胆颗粒作为一种中药制剂，组成主要包括柴胡、大黄、姜黄、牡蛎、延胡索、赤芍、金银花、牡丹皮。该方中大黄为君，泻热通腑；柴胡为臣，疏肝行气；姜黄活血行气、通经止痛，牡蛎平肝固涩、散结止痛，延胡索活血行气止痛，赤芍活血祛瘀、清热凉血，金银花、牡丹皮清热解毒，均为使药。诸药联用，共奏行气活血、通经止痛、清热解毒、泻热通腑之效。

综上所述，清胰利胆方可减轻SAP大鼠炎症反应，改善大鼠肠黏膜屏障功能，及促进肺泡巨噬细胞凋亡，进而发挥保护胰腺组织的作用。