阳江地区产前血清学筛查高风险孕妇的羊水细胞染色体核型分析的研究

曾昭珊 曾瑞华 张伟羡

广东省阳江市妇幼保健院产前诊断中心，广东阳江 529500

染色体病是严重的遗传病，是最常见的新生儿出生缺陷，也是导致婴幼儿死亡的主要原因，临床主要表现为多发畸形、发育迟缓、智力低下等。染色体病以21-三体综合征最常见，此病目前无有效的治疗手段，只能通过产前筛查及产前诊断技术提前发现异常，及时终止妊娠避免新生儿出生缺陷[1]。羊水细胞染色体核型分析检查是数目异常染色体病产前诊断的标准方法[2]。本研究拟对阳江地区孕早中期产前血清学筛查高风险孕妇进行羊水细胞染色体核型检测，分析本地区血清学筛查高风险孕妇的羊水染色体核型特征及本地区胎儿常见染色体病的发病率，为制订胎儿常见染色体病的临床筛查与诊断及选择性终止妊娠等干预方案提供科学依据，以减少本地区染色体病患儿的出生率。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2018年4月至2021年1月阳江市妇幼保健院（我院）收治的血清学阳性孕妇730例行染色体核型检测。纳入标准：孕妇年龄l8～50岁，孕龄18～24周；血清学结果为阳性；告知孕妇及家属羊水细胞染色体分析的意义及风险，孕妇及家属自愿参与且签署知情同意书。排除标准：已确诊的染色体异常；羊水细胞培养两次不成功；非自愿参与者。

1.2 方法

1.2.1 羊水穿刺 在无菌条件下，由临床医生经B超定位后行羊膜腔穿刺，先抽取羊水2 ml弃去，再抽取羊水20 ml左右，分装于两个15 ml无菌离心管（江苏晟康医疗用品有限公司，15 ml，批号：170120）中，2000 r/min，离心 10 min，弃上清液。

1.2.2 细胞培养 向两个离心管中分别加入4 ml培养液（美国 gibco，批号：2254035；以色列 BI，批号：2032113），吹打混匀后将细胞悬液分别接种于50 ml细胞培养瓶（丹麦NUNC，批号：00821601）中，置入37℃、5%CO2的培养箱[赛默飞世尔科技（中国）有限公司，型号：371，编号：NT0131]中培养5 d后换液，再培养2 d。

1.2.3 细胞收获 在倒置显微镜（重庆光电仪器有限公司，型号：XDSA-1B+Z2+lkaros，编号：JY0016）下观察细胞克隆数量及生长情况，克隆数量多且较大连成片时，加入秋水仙素[碧艾（上海）生物科技有限公司，REF：01-194-1BCS，LOT：2032113，批号：20200509，规格：100 ml]至浓度为 0.25 μg/ml，置于培养箱中继续培养3～4 h后收获细胞。

1.2.4 烤片及显带 75℃烤片1 h，胰酶分带后用Gi-emsa染色，进行核型分析。根据染色体的长度、着丝点位置、臂比、随体的有无等特征，并借助染色体显带技术对染色体进行分析、比较、排序和编号。形成检测报告。

1.3 观察指标

记录羊水细胞培养成功率、培养时间，分析异常染色体核型结果，包括数目与结构异常、高危指征染色体异常。

2 结果

2.1 培养结果

羊水细胞一次性培养成功724例（99.18%），两次培养成功729例（99.86%），失败1例。羊水细胞最短培养时间为6 d，最长为15 d，收获时间长短与个体差异相关。最终获得可分析有效染色体核型729例。

2.2 异常染色体核型结果

2.2.1 数目与结构异常情况 729例染色体核型中，发现异常核型98例（13.44%），其中数目异常50例（6.86%），结构异常25例（3.43%），倒位19例（2.61%），嵌合体4例（0.55%）。见表1。

表1 98例异常核型数目与结构异常情况

2.2.2 高危指征染色体异常情况 产前诊断血清学异常染色体检出率从高到低分别为夫（妇）染色体异常、超声异常、高龄妊娠、不良孕产史与唐氏筛查高风险。见表2。

表2 高危指征染色体异常情况（n）

3 讨论

染色体病是由于各种原因引起的染色体数目和（或）结构异常。由于染色体上基因众多，加上基因的多效性，因此染色体病常涉及多个器官、系统的形态和功能，临床表现多种多样，是一大类严重的遗传病。染色体畸变严重者在胚胎早期死亡并自然流产，少数染色体畸变者能存活至出生，但常造成机体多发畸形、智力低下、生长发育迟缓和多系统功能障碍[3]。染色体病无有效治疗方法，因此通过染色体病的遗传咨询和产前诊断预防染色体病尤为重要。

染色体病严重致愚、致残、致死，对社会及家庭造成沉重负担，又因目前缺乏有效治疗手段，唯一有效的途径是通过产前筛查、产前诊断等手段发现染色体异常并选择性终止妊娠。目前，产前诊断技术主要包括有创和无创性产前诊断[4]，前者主要包括经腹羊膜腔穿刺羊水染色体诊断、绒毛取样、脐血染色体诊断、胚胎活检，后者包括血清学筛查、影像学诊断等。随着产前诊断技术的不断进展和完善，因羊水细胞培养染色体核型分析能明确诊断、准确率高（高达99%）、操作简便及并发症几率低，现已占产前诊断病例的1/4～1/2[5]，成为染色体异常发现最经典的方法之一，在国内产前诊断机构已经常规开展。本研究结果显示，羊水细胞一次性培养成功724例（99.18%），两次培养成功729例（99.86%）；羊水细胞最短培养时间为6 d，最长为15 d。与王艺潼等[6]报道培养时间基本一致，考虑培养成功率及培养时间与个体差异相关。729例染色体核型中，发现异常核型98例（13.44%），与当前报道基本一致[7-9]，而其中数目异常50例（6.86%），结构异常25例（3.43%），倒位19例（2.61%），嵌合体4例（0.55%）的结果与郑安舜等[10]报道的结果大致相仿。罗立等[11]报道的产前诊断指征中异常染色体检出率从高到低依次为夫（妇）染色体异常、超声异常、不良孕产史、高龄妊娠、唐氏筛查高风险，与本次结果高龄妊娠检出率高于不良孕产史结果存在一定差异，考虑与本次研究样本量及血清学阳性纳入对象有关，还需要进一步深入研究探讨。

介入性产前诊断技术目前在阳江地区尚属空白，对于染色体病中21-三体综合征的筛查和诊断仅依靠血清学筛查、影像学诊断等手段，而两者均存在假阳性、诊断滞后的缺点[12-14]，因而许多血清学筛查阳性孕妇必须转诊到省级医院进行产前诊断，部分孕妇依从性差，导致每年均有Down综合征患儿出生，严重影响阳江地区出生缺陷防控工作的开展[15-16]。本研究结果发现，羊水细胞染色体核型分析能够准确发现胎儿染色体异常，可在阳江地区进行应用与推广，对提升阳江地区出生人口素质意义重大。

综上所述，阳江地区产前血清学筛查高风险孕妇的羊水细胞染色体核型异常率较高，羊水细胞染色体核型分析可准确发现胎儿染色体异常，为临床治疗及终止妊娠提供科学依据。