加速溶剂萃取GC-MS分析黄虎掌菌提取物

2021-11-18贾有春段新勇吕俊美蒋艳琼

广州化工 2021年21期

高伟，贾有春，段新勇，吕俊美，蒋艳琼

(云南润玉生物技术有限公司，云南玉溪 653100)

黄鳞多孔菌(Ellis’s Polypore)，俗称黄虎掌菌，系地花孔菌科真菌，学名大孢地花孔菌(Albatrellusellisii(Berk.)Pouzar(≡PolyporusellisiiBerk.))[1-3]，是中国100种名蘑之一[4]。目前对黄虎掌菌研究较少，仅见于对黄虎掌多糖提取及抗氧化活性研究[5]，对营养成分分析评价[6]等。文献报道地花菌类含有一些生物活性物质[7-9]，为进一步深入研究黄虎掌菌的活性成分，本实验尝试使用加速溶剂萃取仪提取黄虎掌菌中有机提取物，并利用气相色谱-质谱联用仪(GC-MS)进行分析，以便为黄虎掌菌的开发利用提供技术支持。

1 实验

1.1 材料与试剂

黄虎掌菌干品购于昆明市野生菌交易市场，经有关专家鉴定为黄虎掌菌。干燥样品经旋风磨粉碎后过40目筛备用。

甲醇、乙腈：色谱纯，美国fisher公司。

1.2 仪器

Agilent 7890B-5975C型气相色谱-质谱联用仪，美国Agilent公司；Buchi Speed Exactor E916型加速溶剂萃取仪，瑞士Buchi公司；Buchi Multivapor P-6型平行浓缩仪，瑞士Buchi公司。

1.3 样品处理

称取3 g样品粉末(精确至0.01 g)于小烧杯中，加入3 g无水硫酸钠、3 g石英砂，混合均匀后装入样品池，加入15 mL甲醇-乙腈(v/v=1:1)加压萃取。萃取温度：120 ℃；萃取压强：12 MPa；萃取时间：4 min，循环3次；氮气吹扫2 min。提取结束后将接收液在平行浓缩仪上浓缩，定容至2 m。

1.4 分析条件

色谱条件：色谱柱：Agilent DB-5MS毛细管色谱柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm)；载气：高纯氦；流速：1 mL/min；进样口温度：280 ℃；进样量：2 μL，分流比：15；程序升温：初温50 ℃，保持2 min；以5 ℃/min升至200 ℃，保持5 min；以5 ℃/min升至250 ℃，保持6 min。

质谱条件：EI源；扫描范围：35～450 Da；传输线温度：200 ℃；离子源温度：150 ℃。

2 结果与讨论

黄虎掌菌样品经加速溶剂萃取，萃取液经浓缩后，用气相色谱-质谱联用仪分析，总离子流色谱图见图1，成分较为复杂。利用NIST(2011版)和WILEY(8th版)谱库检索分析，结合自动质谱解卷积系统，最终鉴定出29种化学成分，结果如表1所示。29种成分中有5种酮、3种醇、2种醛、6种酯、9种酸、2种甾醇、2种其它类化合物。

图1 黄虎掌萃取物GC-MS分析的总离子流色谱图Fig.1 TIC chromatogram of Ellis’s Polypore exactive

根据文献[10-11]星鱼甾醇(stellasterol)是生物活性物质；奇果菌素(grifolin)是地花菌特有的生物活性物质，具有抗菌、抗氧化、抑制抗肿瘤细胞活性[12-15]；脂肪酸是要用真菌常见的化学成分，从多孔真菌分离的脂肪酸有豆蔻酸、棕榈酸、油酸、亚油酸、硬脂酸[16]等，本实验也检测出豆蔻酸、棕榈酸、亚油酸、硬脂酸及相应的酯类；检出的甘露醇与文献[7]一致。