早期喉癌患者血清膜联蛋白A2、环氧合酶-2及色素框同源物7检测及意义

郭武辉，袁 倩

(1.榆林市第二医院医学检验科，陕西 榆林 719000;2.榆林市中医医院耳鼻喉科，陕西 榆林 719000)

喉癌发病率占全部头颈部肿瘤的7.9%～35.0%，且以鳞状细胞癌多见，患者多为中老年人[1-2]。喉癌分原发性和继发性两种。原发性喉癌指原发部位在喉部的肿瘤，以鳞状细胞癌最为常见。继发性喉癌指来自其他部位的恶性肿瘤转移至喉部，较为少见。喉癌症状主要为声嘶、呼吸困难、咳嗽、吞咽困难、颈部淋巴结转移等。早期发现，早期诊疗对于减轻喉癌的危害非常重要，一方面可提高患者术后生存率，另外有可能尽量保留喉的发音功能，减少术后并发症。喉癌的发生发展涉及到一个复杂、多阶段、多步骤、多基因共同参与的过程[3]。膜联蛋白A2(Annexin A2,ANXA2)为膜联蛋白超家族中的一员，环氧合酶-2(Cyclooxygenase-2,COX-2)为前列腺素合成过程中的重要限速酶，色素框同源物7(Chromobox homolog 7,CBX7)为多梳基因家族蛋白家族蛋白中的一员[4-5]。本研究旨在探讨血清ANXA2、COX-2、CBX7在早期喉癌中的检测意义及相互关系，以为早期喉癌寻找更多的血清学标志物，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2018年1月至2020年12月喉癌患者64例，TNM分期为T1N0M0～T2N0M0，均为初诊患者，入组前未接受过任何相关治疗，其中男38例，女26例，年龄41～81岁，平均(66.19±8.24)岁。同时选择同期71例喉良性病变患者及50例健康体检者作为对照，喉良性病变患者均未接受过任何相关治疗。喉良性病变患者中男39例，女32例，年龄44～80岁，平均(66.35±9.35)岁。健康体检者中男27例，女23例，年龄40～76岁，平均年龄(64.05±8.21)岁。三组年龄、性别等一般资料比较差异无统计学意义(均P>0.05)。

1.2 检测方法 所有受检者于次日早晨采集外周静脉血4 ml，采血后将血液标本置于离心机，设置转速5000 r/min，离心20 min，取上层血清，储存于-80 ℃冰箱待检。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清ANXA2、COX-2和CBX7水平，试剂盒购自上海酶联生物科技有限公司(货号ml036221)，严格按照操作说明进行检测。

1.3 观察指标 观察三组血清ANXA2、COX-2、CBX7水平；喉癌手术患者术前术后ANXA2、COX-2、CBX7水平；喉癌组患者血清ANXA2、COX-2、CBX7相关性分析；ANXA2、COX-2、CBX7在喉癌中的诊断评价(灵敏度、特异度)。

2 结 果

2.1 三组血清ANXA2、COX-2、CBX7水平比较 喉癌组、喉良性病变组、健康组之间的血清ANXA2、COX-2、CBX7水平比较差异均有统计学意义(均P<0.05)，其中喉癌组血清ANXA2、COX-2水平明显高于喉良性病变组与健康组(P<0.05)，而血清CBX7水平明显低于喉良性病变组与健康组(P<0.05)；喉良性病变组血清ANXA2水平明显高于健康组(P<0.05)，而血清COX-2、CBX7水平与健康组比较无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 三组血清ANXA2、COX-2、CBX7水平比较

2.2 喉癌患者术前术后血清ANXA2、COX-2、CBX7水平比较 与术前相比，喉癌患者术后ANXA2、COX-2水平均降低，CBX7升高，差异均具有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 喉癌患者术前术后血清ANXA2、COX-2、CBX7水平比较

2.3 喉癌患者血清ANXA2、COX-2、CBX7相关性分析 经过Pearson相关性分析显示，血清ANXA2与CBX7水平在喉癌组中呈负相关(r=-0.583,P<0.05)，血清COX-2与CBX7水平在喉癌组中呈负相关(r=-0.609,P<0.05)，血清ANXA2与COX-2水平无相关性(P>0.05)，见表3。

表3 喉癌患者血清ANXA2、COX-2、CBX7相关性分析

2.4 ANXA2、COX-2、CBX7在喉癌诊断中的评价 三种指标单独检测其中CBX7灵敏度最高为46.88%，特异度最高的为COX-2为96.88%，两两联合检测灵敏度和特异度均高于单独指标检测，差异具有统计学意义(均P<0.05)；三指标联合灵敏度为90.63%，均高于ANXA2联合CBX7、COX-2联合CBX7的灵敏度，特异度为89.06%，低于ANXA2联合CBX7、COX-2联合CBX7的特异度，差异均具有统计学意义(均P<0.05)。见表4。

表4 ANXA2、COX-2、CBX7在喉癌诊断中的评价[例(%)]

3 讨 论

目前喉癌的发病机制尚不完全清楚，其中一些癌基因与抑癌基因的表达被认为与喉癌的发生密切相关[6]。细胞骨架改变对细胞的癌变、黏附及癌细胞转移起着关键作用[7]。ANXA2是一个钙离子依赖的磷脂结合蛋白家族的成员之一，在调控细胞骨架网络、细胞的信号传导、细胞的增殖分化等方面发挥重要作用[8-9]。此外，ANXA2也是一种具有纤溶酶原活化系统调节作用的蛋白质，可通过作用于纤溶酶原活化系统促进肿瘤血管生成、细胞外基质降解及一些生长因子的分泌与释放[10]。近年国内外研究表明，ANXA2在多种肿瘤中的表达上调。动物实验表明，下调ANXA2基因的表达可明显抑制胃癌移植瘤的生长[11]。目前有关ANXA2与喉癌关系的研究较少，王向锋等[12]研究表明，ANXA2在喉癌组织中的高表达率明显高于在癌旁组织与正常组织中的表达，且与临床分期有关。本研究结果显示，喉癌患者血清ANXA2水平明显高于喉良性病变患者及健康者，提示ANXA2与喉癌的发生有关，检测血清ANXA2水平可能对早期喉癌的诊断有所帮助。

COX是催化花生四烯酸合成前列腺素家族的关键酶，包括COX-1与COX-2两种亚型，其中COX-2是一种诱导型酶，在正常组织中的表达极微，而在炎症、肿瘤等刺激下可迅速诱导高表达，是快速反应基因[13-14]。COX-2高表达可增强细胞的黏附能力，并促进细胞的增值、转录，抑制凋亡，因而对肿瘤细胞的增殖、浸润、转移有着重要意义[15]。COX-2在多种肿瘤中呈高度表达，高表达会增加肿瘤的耐药性，特异性COX-2抑制剂有效抑制肿瘤细胞的增值、侵袭及转移[16]。本研究结果显示，喉癌患者血清COX-2水平明显高于喉良性病变患者与健康者，提示COX-2参与了喉癌的发生，也有望成为喉癌的标志物。

CBX7是一种色素框蛋白，属于多梳基因家族蛋白家族。研究表明，多梳基因家族蛋白在调节胚胎发育、细胞周期及细胞凋亡、DNA损伤应答及修复等过程中具有重要作用，对干细胞分化、肿瘤的发生及转移有重要影响[17]。CBX7与多种肿瘤的发生发展有关，且独立于其他成员发挥作用。CBX7的功能复杂，既具有抑癌基因功能，又具有癌基因功能，研究表明，其在肺癌、胰腺癌、膀胱癌等肿瘤中具有抑癌特性，而在胃癌、淋巴瘤等肿瘤中又具有致癌特性[18-19]。目前有关CBX7在喉癌中所扮演的角色尚存在争议，张行等[20]研究表明，CBX7在喉癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织，提示CBX7高表达促进了喉癌的形成。而本研究结果显示，喉癌患者血清CBX7表达阳性率明显低于喉良性病变患者与健康者，提示CBX7在喉癌中具有抑癌特性，其表达下调可能与喉癌的发生有关。

相关性分析显示，血清ANXA2与COX-2水平在喉癌、喉良性病变及健康者中均无相关性，而血清ANXA2与CBX7水平在喉癌组中呈负相关(r=-0.583)，血清COX-2与CBX7水平在喉癌组中呈负相关，并且三种指标联合检测灵敏度均高于单独、两两联合检测灵敏度，提示ANXA2、COX-2表达激活与CBX7表达失活的共同作用导致了喉癌的发生，血清ANXA2、COX-2、CBX7可作为早期喉癌潜在的生物学检测指标。还须大样本进一步研究。