52.5%抑快净水分散剂在番茄中的残留检测及消解动态研究

王晨晨，王文博，陈子雷，张艳，李慧冬，毛江胜

（山东省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所/山东省食品质量与安全检测技术重点实验室/农业农村部食品质量监督检验测试中心（济南），山东 济南250100）

抑快净（equation-pro）由美国杜邦公司开发生产，由霜脲氰（cymoxanil）和恶唑菌酮（famoxadone）混配而成，兼具内吸治疗和保护双重作用，是目前防治黄瓜、番茄等作物霜霉病、疫病的新型高效复合杀菌剂。恶唑菌酮能发挥持久的保护功能，在病菌发生初始阶段特别有效；它与极具内吸性和治疗性的杀菌剂霜脲氰混合，两者作用相互补充，大大增强了保护和治疗作用。

抑快净在番茄、黄瓜、葡萄等水果、蔬菜上具有广泛应用［1-4］。已有恶唑菌酮在柑橘、苹果中残留动态研究以及在恶唑菌酮液相中的光化学降解［5-9］等研究，但是抑快净作为一种复配药剂，霜脲氰和恶唑菌酮共同作用下的残留动态研究较少。因此，本试验进行了52.5%抑快净水分散粒剂在番茄中的残留分析及消解动态研究。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

高压液相色谱仪：Waters公司，Alliance2695泵，二极管阵列检测（PDA）；旋转蒸发器：德国Heidolph laborota 4000；离心机：北京医用离心机LD5-2A。

试剂：52.5%抑快净WG，杜邦（中国）有限责任公司；磷酸（优级纯）、磷酸二氢钾（优级纯）、无水硫酸钠（分析纯），国药集团化学试剂有限公司；甲醇（色谱纯），德国默克公司；乙腈（色谱纯），美国天地试剂公司；重蒸水；二氯甲烷（分析纯），北京化工集团有限公司。

1.2 消解动态及最终残留试验方法

参照《农药残留试验准则》［10］和《农药登记残留田间试验标准操作规程》［11］，于2018年分别在淄博市临淄区、滨州市无棣县、东营市河口区三地进行了52.5%抑快净水分散粒剂（22.5%恶唑菌酮+30%霜脲氰）在番茄上的残留田间试验。小区面积20 m2，重复3次，随机排列，设清水空白对照。

消解动态试验666.7m2施药量为60 g，对水50 kg，采用背负式喷雾器均匀喷洒叶面。分别于施药后1 h及1、3、5、7、10 d随机多点取样，每小区取1～2 kg番茄，对照取3～5 kg。将番茄可食部分用组织搅碎机搅碎，充分混匀，四分法保留500 g装瓶，于-20℃冰柜中保存备用。

最终残留试验666.7m2施药量分别为40 g、60 g，施药3次，间隔7 d。分别于最后一次施药后1、2、3、5、7 d采样，测定药剂的最终残留量。

1.3 检测方法及仪器条件

1.3.1 霜脲氰的检测分析 称取样品15.0 g于80 mL离心管，加入30 mL二氯甲烷匀浆破碎，然后10 000 r/min离心5 min，取上清液于旋转蒸发瓶中，残渣再加入二氯甲烷20 mL，重复提取，合并两次上清液，于40℃水浴中旋转蒸发二氯甲烷至干，加2 mL甲醇溶解，10 000 r/min离心，待HPLC分析。

色谱条件：symmetry C18色谱柱（4.0 mm×250 mm，4μm）；柱温：40℃；流动相：0.005 mol/L KH2PO4-乙腈（75∶25，V∶V，pH=2.65）；流速：1.0 mL/min；等度洗脱；进样体积：10μL；检测波长：254 nm；保留时间：13.8 min。

1.3.2 恶唑菌酮的检测分析 称取样品20 g于离心管，加入甲醇35 mL，超声提取15 min，离心20 min，倾出上清液于圆底烧瓶中；残渣再加入甲醇15 mL重复提取，合并两次滤液，于40℃水浴中旋转蒸发甲醇，浓缩液待净化。

分别用5 mL甲醇、5 mL甲醇-磷酸缓冲液（30∶70，V∶V，pH=3）预淋洗C18固相萃取小柱，将番茄样品浓缩液及3 mL甲醇-磷酸缓冲液（30∶70，V∶V，pH=3）冲洗圆底烧瓶的溶液移入小柱中，再用2 mL甲醇-磷酸缓冲液（50∶50，V∶V，pH=3）淋洗小柱，弃去淋出液。最后加入4 mL甲醇-磷酸缓冲液（85∶15，V∶V，pH=3），收集淋出液。

色谱条件：Novapak苯基柱（3.9 mm×150 mm，4μm）；柱温：40℃；流动相：0.01 mol/L磷酸二氢钾（pH=3）-乙腈（50∶50，V∶V）；流速：1.0 mL/min；等度洗脱；进样体积：10μL；检测波长：228 nm；保留时间：8.5 min。

1.4 计量方法

在被测物的线性范围内，用外标法定量。

2 结果与分析

2.1 线性关系及方法的检出限、准确度和精密度

图1、图2显示，霜脲氰的保留时间为13.5 min，恶唑菌酮的保留时间为8.5 min，峰形对称，出峰良好。

精确称取霜脲氰和恶唑菌酮标准品（精确至0.1 mg），分别以乙腈溶解定容至10 mL，配成1 000μg/mL标准储备液待用。进样时分别用相应的流动相将霜脲氰和恶唑菌酮1 000μg/mL标准储备液稀释，以配制的标准溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线（图1、图2）。霜脲氰的回归方程为：Y=14299.46X+1871.79，r=0.9998，在5～100μg/mL范围内溶液浓度与峰面积线性关系良好。恶唑菌酮的回归方程为Y=1.15×104X+5.15×103，r=0.9997。霜脲氰在番茄中的最低检出浓度为0.01 mg/kg，最小检出量为2 ng。在空白番茄中加入0.01、0.05、1.0 mg/kg霜脲氰标样，回收率在79.5%～92.8%之间，相对标准偏差为3.68%～7.36%（图3）。恶唑菌酮在番茄最低检出浓度为0.02 mg/kg，最小检出量为2 ng。在空白番茄中添加恶唑菌酮0.01、0.05、2.0 mg/kg标样，测得的回收率在82.4%～103.9%之间，相对标准偏差为2.96%～6.25%（图4）。

图1 霜脲氰液相色谱图（左）及标准曲线（右）

图2 恶唑菌酮液相色谱图（左）及标准曲线（右）

图3 霜脲氰番茄空白样品（左）及添加回收图谱（右）

图4 恶唑菌酮番茄空白样品（左）及添加回收图谱（右）

2.2 抑快净在番茄中的消解动态

由表1可见，霜脲氰和恶唑菌酮在番茄中的消解均符合一级动力学特征。在淄博市、滨州市、东营市三地的降解试验中，霜脲氰在番茄中的半衰期分别为1.0、1.8、4.0 d，恶唑菌酮在番茄中的半衰期分别为1.4、2.0、1.4 d。表明在施抑快净2～4 d后，霜脲氰和恶唑菌酮在番茄中的消解率已近50%，并且恶唑菌酮的降解速率快于霜脲氰。

表1 抑快净在番茄中的消解动力学参数

2.3 抑快净在番茄中的最终残留

52.5 %抑快净水分散粒剂666.7m2施药量为40 g时，霜脲氰在施药后3～5 d浓度范围为0.13～0.17 mg/kg，药后7 d未检出；恶唑菌酮在施药后3～5 d浓度范围为0.05～0.1 mg/kg，药后7 d未检出。施药量为60 g时，霜脲氰在施药后3～5 d浓度范围为0.17～0.28 mg/kg，药后7 d未检出；恶唑菌酮在施药后3～5 d浓度范围为0.11～0.14 mg/kg，药后7 d未检出。我国规定霜脲氰、恶唑菌酮在番茄中最高残留量分别为1、2 mg/kg［12］，本试验收获期番茄中霜脲氰、恶唑菌酮均低于最高残留限量。

3 结论

本研究建立了番茄中抑快净的高效液相色谱检测方法，该方法灵敏度高、线性关系良好，检出限、回收率、准确度等各项技术指标均符合农药残留检测的基本要求，可用于抑快净的残留检测分析。抑快净中的两种有效成分霜脲氰和恶唑菌酮在番茄中的消解均符合一级动力学特征，并且恶唑菌酮的降解速率快于霜脲氰，两者在番茄中的最终残留均符合要求。建议52.5%抑快净WG在番茄上666.7m2施药量为45 g，施药3次，间隔7 d，最后一次施药距采收期14 d。