维吾尔药青香茅质量控制研究

赵荣梅，徐鸿，马方圆，艾买提江·阿衣甫别克，于新兰，张军，2

1.新疆维吾尔自治区药品检验研究院，中药（维药）质量控制重点实验室，新疆 乌鲁木齐 830054；2.国家药典委员会，北京 100061

维吾尔医常用药青香茅为禾本科香茅属鲁沙香茅组青香茅Cymbopogon caesius（Ness）Stapf.的干燥茎叶[1-2]，其性质二级干热，味辛[3]，具开通脉络阻滞、熟化黏稠体液、祛寒通经等功效，主要用于机体瘫痪、痴呆健忘、肝肿、寒性疼痛、腹水经闭等[4]。现行质量标准收载于《中华人民共和国卫生部药品标准·维吾尔药分册》[2]，其名称为香茅，来源为青香茅及其同属数种植物的干燥茎叶。在新疆地产特色民族药复方木尼孜其颗粒、降糖孜亚比提片、舒肢巴亚待都司片[2]等成药处方中，青香茅为主要臣药。其质量标准内容仅有性状、性质、功能与主治等项目，不能有效控制药材质量。同属植物柠檬草Cymbopogon citratus，别称香茅，为禾本科香茅属柠檬草组植物，常与青香茅混用。因此，青香茅药材质量标准的提升对传统民族医药的规范用药具有必要性。

本研究采用水蒸气蒸馏法测定青香茅挥发油含量，通过气相色谱-质谱法（GC-MS）确定挥发性成分，以胡椒酮为指标成分建立含量测定方法，并增订其显微、薄层色谱鉴别及水分、浸出物检查，为进一步提高青香茅质量标准提供依据。

1 仪器与试药

HM525 NX冷冻切片机，美国赛默飞世尔科技公司；BX-51型生物显微照相系统，日本OLYMPUS；TLC Visualizer型薄层色谱成像系统，瑞士CAMAG；KUDOS SK7210LHC型超声波清洗器，上海科导超声仪器有限公司；AUTOMATIC TLC SAMPLER 4全自动点样仪，瑞士CAMAG；Trace 1310型单四极杆气相色谱-质谱联用仪，美国赛默飞世尔科技公司；7890A型气相色谱仪，美国安捷伦科技有限公司；MS204S型电子天平，瑞士梅特勒-托利多；XT-1000A型高速多功能粉碎机，浙江永康市红太阳机电有限公司；Agilent DB-5型色谱柱（30 m，0.32 mm，0.25 μm）。

14批青香茅药材购自新疆不同地区维吾尔药材市场和维吾尔医院，分别为巴基斯坦进口（批号20160608、20151227、20160827、20170402、20160501、20170906）和新疆地产（批号20170804-1、20170610、20200301、20200402、20190509、20200201、20200130、20170804-2），均由新疆维吾尔自治区药品检验研究院苏来曼·哈力克主任药师鉴定，为禾本科香茅属植物青香茅Cymbopogon caesius（Ness）Stapf.的干燥茎叶。胡椒酮对照品（Panphy，批号FP019801，含量95.5%），水杨酸甲酯对照品（中国食品药品检定研究院，批号110707-201413，含量99.7%），咖啡酸对照品（中国食品药品检定研究院，批号110885-201703）；青香茅对照药材（实验室自制，批号20200519）。硅胶G薄层板（烟台市化学工业研究所，批号20200430；Merck KCaA，批号HX56235353）。甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 显微鉴别

2.1.1 横切面显微特征

分别取药材叶片和茎，置于冷冻切片机，切片，将样品薄片置载玻片上，加水合氯醛溶液透化后，在显微镜下观察，拍照记录。叶片横切：上表皮细胞由1列小长圆形细胞组成，横向排列；上下表皮之间为大型的薄壁细胞，下表皮有大型盾状维管束；木质部呈“V”形，木质部与韧皮部之间有2～3个空腔；非腺毛较多，尤以凹陷处为最。茎横切：外表皮细胞3～5列，类圆形，横向排列整齐；中皮层类圆形，数列，靠近中皮层有大量散在的外韧型维管束；皮层由大小不一的基本组织细胞组成。见图1。

图1 青香茅药材横切面显微特征

2.1.2 粉末显微特征

药材粉末呈黄绿色至黄棕色，取药材细粉适量，置载玻片上，加水合氯醛溶液透化后，置显微镜下观察，拍照记录。可见表皮细胞类长方形，垂周壁波状弯曲，气孔较多，平轴式；纤维细长，多成束，壁厚，有时可见棕色分泌管；非腺毛多见；薄壁细胞较大，含棕色物质；石细胞成群或单个散在，类长方形或类圆形，壁厚；螺纹导管多。见图2。

图2 青香茅药材粉末显微特征（×400）

2.2 薄层色谱鉴别

取药材粉末5 g，加甲醇50 mL，超声（功率350 W，频率53 kHz）处理30 min，滤液蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取青香茅对照药材5 g，同法制成对照药材溶液。另取咖啡酸对照品适量，加甲醇制成每1 mL含0.4 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中华人民共和国药典》2020年版四部通则0502）试验，吸取供试品溶液和对照药材溶液各5 μL、对照品溶液3 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-甲酸-乙酸乙酯（5∶1∶3）为展开剂展开，取出，晾干，置紫外灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。见图3。

图3 青香茅药材薄层色谱图

2.3 水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物及挥发油含量测定

按《中华人民共和国药典》2020年版四部通则0832水分测定法甲苯法、2302灰分测定法、2201醇溶性浸出物测定法（以稀乙醇为溶剂）、2204挥发油测定法甲法分别测定14批样品水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物和挥发油含量。每批样品平行测定2次，取平均值。结果水分含量为5.00%～6.50%，平均值为5.78%；总灰分含量为6.73%～12.68%，平均值为9.03%；酸不溶性灰分含量为4.45%～9.67%，平均值为6.47%；浸出物含量为5.22%～12.99%，平均值为10.36%；挥发油含量为1.21%～2.65%，平均值为1.80%。见表1。

表1 青香茅药材水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物和挥发油含量测定结果（%，n＝2）

2.4 挥发性成分分析

2.4.1 气相色谱-质谱条件

色谱条件：以5%二苯基-95%二甲基硅氧烷为固定相的毛细管柱，程序升温（起始温度60 ℃，保持3 min，以8 ℃/min升温至230 ℃，保持4 min，再以10 ℃/min升温至280 ℃，保持4 min），进样口温度250 ℃。

质谱条件：采用正离子模式，传输线温度250 ℃，离子源温度280 ℃，全扫描范围20～650 amu。

2.4.2 溶液制备

取药材粉末（过3号筛）1 g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入甲醇30 mL，摇匀，称定质量，超声（功率350 W，频率53 kHz）处理30 min，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，过滤，精密量取续滤液1 mL，置10 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，用微孔滤膜（0.22 µm）过滤，取续滤液，作为供试品溶液。

精密称取胡椒酮对照品适量，加甲醇溶解并稀释成每1 mL含胡椒酮0.05 mg的溶液，作为对照品溶液。

2.4.3 样品测定

精密量取供试品溶液1 µL注入气相色谱-质谱联用仪，采集数据。通过GC-MS计算机谱库检索，并结合相似度指数，共鉴定出8个主要化合物，均为萜类化合物。单萜型有2-甲基异丙醇（2-methylisobomel，C1）和胡椒酮（piperitone，C2），愈创木醇型有hedycaryol（C3）和5-guaien-11-ol（C5），倍半萜类有α-桉叶醇（α-eudesmol，C4）、β-桉叶醇（β-eudesmol，C6）、(+)-maaliol（C7）和1b,5,5,6a-tetramethyl-octahydro-6H-indeno[1,2-b]oxiren-6-one（C8）。

由供试品总离子流图（见图4）可见，胡椒酮为最大特征峰。精密量取对照品溶液1 µL，进样检测，结果见图5。经比对，胡椒酮可作为定量成分。

图4 青香茅药材供试品溶液总离子流色谱图

图5 胡椒酮质谱图

2.5 胡椒酮含量测定

2.5.1 色谱条件

以苯基（5%）甲基聚硅氧烷毛细管柱为固定相，程序升温（初始温度60 ℃，保持3 min，以10 ℃/min升温至110 ℃，再以3 ℃/min升温至150 ℃，再以20 ℃/min升温至280 ℃，保持4 min），进样口温度250 ℃，检测器温度250 ℃，进样量1 μL，分流比10∶1。理论塔板数按胡椒酮峰计算应不低于5 000。

2.5.5 重复性试验

精密称取同一批药材粉末样品6份，按“2.5.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.5.1”项下色谱条件测定，计算胡椒酮平均含量为0.75%，RSD＝1.8%。

2.5.6 稳定性试验

取同一份供试品溶液，室温放置0、1、3、6、10、

2.5.2 溶液制备

取水杨酸甲酯对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含5 mg的溶液，即得内标溶液。取胡椒酮对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含1.2 mg的溶液，精密量取2 mL，置10 mL容量瓶中，精密加入内标溶液1 mL，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。取药材粉末（过3号筛）1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇30 mL，称定质量，超声（功率350 W，频率53 kHz）处理30 min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，过滤，精密量取续滤液8 mL，置10 mL容量瓶中，加入内标溶液1 mL，用甲醇稀释并定容至刻度，摇匀，即得供试品溶液。

2.5.3 线性关系考察

精密量取胡椒酮对照品溶液（1.178 8 mg/mL）0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0 mL，分别置于10 mL量瓶中，加入内标溶液1 mL，用甲醇稀释定容并摇匀，配制成系列浓度对照品溶液。按“2.5.1”项下色谱条件测定，以胡椒酮对照品浓度（µg/mL）为横坐标，胡椒酮与内标峰面积的比值为纵坐标，绘制标准曲线，得到方程Y＝3.057 7X－0.036 1（r＝0.999 9），胡椒酮浓度在58.94～943.04 μg/mL范围内呈良好的线性关系。

2.5.4 检出限与定量限

以信噪比（S/N）为3∶1和10∶1为基准，胡椒酮的检出限为5.89 μg，定量限为17.68 μg。12 h，按“2.5.1”项下色谱条件测定，计算胡椒酮的平均含量为0.70%，RSD＝0.69%，表明供试品溶液在12 h内稳定性良好。

2.5.7 加样回收率试验

精密称取同一批药材粉末（过3号筛）0.5 g，置锥形瓶中，共6份，分别精密加入胡椒酮对照品溶液（3.086 6 mg/mL）1.0 mL，按“2.5.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.5.1”项下色谱条件测定，结果胡椒酮平均回收率为94.7%，RSD＝1.0%，见表2。

表2 胡椒酮加样回收率试验结果

2.5.8 样品测定

取14批青香茅药材，按“2.5.2”项下方法制备供试品溶液，每批样品平行处理2份，按“2.5.1”项下色谱条件测定，每份测定2次，结果见图6、表3。

表3 14批青香茅药材中胡椒酮含量测定结果（%，n＝2）

图6 青香茅药材含量测定GC图

3 讨论

香茅属植物中含绿原酸、咖啡酸等酚酸类成分[5]，异荭草素、荭草素等黄酮类成分[6]，β-谷甾醇等三萜类成分，以及柠檬醛、香叶醛、香茅醛、香叶醇、月桂烯、紫苏烯、丁香酚、乙酸香叶酯等挥发性化学成分[7-13]。经反复试验，将咖啡酸作为薄层色谱鉴别的目标成分，斑点清晰，重现性好。试验中发现，咖啡酸对照品溶液放置12 h后，出现2个荧光斑点，故应临用现制。考察薄层色谱鉴别样品处理方法时，分别采用甲醇、乙醇、乙酸乙酯为溶剂，超声处理30 min和水浴回流4 h提取进行测定，结果以甲醇超声处理30 min制备的供试品溶液咖啡酸含量最高。考察含量测定样品处理方法时，分别采用不同浓度甲醇、乙醇为溶剂，料液比分别为1∶10、1∶20、1∶30，超声处理20、30、40 min提取进行测定，结果以甲醇为溶剂、料液比为1∶30、超声处理30 min制备的供试品溶液胡椒酮含量最高。考察浸出物提取方法时，分别选取水和不同浓度乙醇溶液，采用冷浸法和热浸法，对药材浸出物进行考察，与试验操作简便、快速等特性相结合，选定溶剂和提取方法，结果以稀乙醇为溶剂采用热浸法提取后浸出物含量最高。

柠檬草药材（别称香茅）的化学成分和药理活性研究已有报道[7，14-15]。杨颖等[16]对青香茅药材的糖苷类成分进行含量测定，但挥发性化学成分研究甚少。本试验通过GC-MS确定青香茅药材的主要挥发性特征成分有8个，选取指标性成分胡椒酮，建立了含量测定方法，可进一步完善青香茅药材的质量标准。