益原素配方茶对黄嘌呤氧化酶活性的影响

杨 锐，邹小林，符宗林，罗 赛，官兴丽

（云南省普洱茶发酵工程研究中心，昆明 650217）

尿酸是生物体内细胞代谢和食物中嘌呤代谢的最终产物，机体内尿酸水平长期升高会形成高尿酸血症。高尿酸血症是继高血压、高血脂和高血糖后又一影响人体健康的重要风险因子，近几年高尿酸血症的发病率在全世界范围内逐年增加，尤其是在美国和中国地区，研究显示5%～12%的高尿酸血症会发展成为痛风［1］。

痛风的治疗药物主要分为抑制尿酸生成、促进尿酸排泄和抗炎等［2］，毒副作用较明显，因此具有降尿酸功效的日常食品和药食两用食品逐渐成为目前研究的热点［3］。黄嘌呤氧化酶是尿酸生成的关键，其催化反应动力学是当前研究的重点，通过抑制其对黄嘌呤和次黄嘌呤的催化转化，进而降低尿酸水平，对高尿酸血症和痛风防治具有重要意义［4］。为此，笔者对益原素普洱茶与不同药食同源食材复配的4 个样品的黄嘌呤氧化酶活性抑制强弱进行了检测，结果显示4 个组方样品都具有较强的体外黄嘌呤氧化酶活性抑制效果，与碱性水相比有显著差异。将具有降尿酸作用的普洱茶与药食同源食材进行复配，是天然来源植物性成分在降尿酸功能性食品开发中的一个良好应用，可为高尿酸和痛风防治的天然降尿酸功能性食品开发提供参考。

1 材料和方法

1.1 试剂

益原素与不同药食同源食材复配样提取物S1-S4（复配组方见表1）（云南大益微生物技术有限公司）、市售某碱性水（pH 9.3±0.6）、黄嘌呤氧化酶（XOD）和次黄嘌呤（HXA）（上海源叶生物科技有限公司），其他试剂为分析纯。

表1 益原素普洱茶与不同药食同源食材复配组方

1.2 仪器

756 紫外可见分光光度计（上海菁华科技仪器有限公司）、微孔板恒温振荡器（杭州奥盛仪器有限公司）、超声波清洗器（北京市六一仪器厂）、电子天平（赛多利斯科学仪器北京有限公司）。

1.3 实验方法

1.3.1 试剂配制

磷酸盐缓冲溶液（PBS）配制，取磷酸二氢钾、十二水合磷酸氢二钠，用超纯水超声溶解，配制成100 mM（pH 7.5）的磷酸盐缓冲溶液；黄嘌呤氧化酶（XOD）溶液配制，用预冷的PBS 溶解，配制成2 U/ml 的酶工作液，分装保存于-20 ℃；底物次黄嘌呤（HXA）溶液配制，底物用PBS 超声溶解，配制成1 mM 的底物溶液；待测样品溶液配制，样品用1% DMSO 的PBS 溶解待用。

1.3.2 测定方法

尿酸在293 nm 波长处有特征吸收峰，通过测定293 nm 处尿酸的紫外吸光度值反映尿酸含量的变化，进而测定样品对XOD 酶活性的影响。依据参考文献［5-6］修改方法后检测，依次将PBS 和1 mg/mL 的样品溶液1.45 mL、2 U/mL 的XOD 溶液150 mL 加入24 孔板，37 ℃孵育3 min，加入1 mM的底物溶液启动反应，37 ℃反应5 min 后，将反应体系转入比色皿中，测定293 nm 波长处的吸光度值A293。样品XOD 抑制率计算公式如下：

Ac：对照组，加入底物和XOD；Ab：空白组，加入底物和PBS；As：样品组，加入底物、XOD 和样品；Asb：样品空白组，加入底物和样品。

1.3.3 统计分析

酶活性抑制率以平均值±标准差（平均值±SD）表示，所有数据应用Prism Graphpad 6.0 软件进行计算。

2 结果与分析

复配得到4 个组方样品，检测其对黄嘌呤氧化酶活性的影响，结果如表2、图1 所示，4 个组方样品均能有效地抑制黄嘌呤氧化酶的活性，且显著强于碱性水，表明4 个组方样品都具有抑制尿酸生成的作用。其中，组方2 样品的抑制作用最强，组方3 样品次之，组方4 样品的抑制效果最弱，这可能与不同组方食材其内含成分不同有关。

表2 各组方样品对黄嘌呤氧化酶活性的抑制率 %

4 个组方的主要成分是益原素，益原素是云南大益微生物技术有限公司通过菌方组合发酵而成的一款普洱熟茶，富含多种对人体有益的活性成分，如茶褐素、茶多酚、puerins，具有抗氧化、抗癌、降血糖、降血脂、改善代谢综合征等多种生理活性。而益原素普洱熟茶富含的黄酮类、黄烷醇类、酚酸类、生物碱类等物质，在体外能有效抑制黄嘌呤氧化酶的活性［7］。此外，动物水平研究表明，普洱茶除降低酶活性外还能抑制肾尿酸相关转运蛋白的表达，减少尿酸盐的重吸收，显著降低机体尿酸水平［8-10］。

组方2 中复配了菊苣，其中含有的菊苣酸、绿原酸等在体外和体内皆有较好降尿酸的作用［11］，此外还具有利尿作用能促进尿酸的排泄［12］；桑叶、栀子、葛根等食材中含有大量酚酸类、黄酮类、生物碱等化学成分［13-15］，能有效抑制黄嘌呤氧化酶的活性［7］。另外3 个组方中复配的食材，如蒲公英和玉米须，除能抑制尿酸的生成还能促进尿酸排泄［16-17］。将益原素普洱熟茶与具有降尿酸功效的药食同源食材进行复配，经提取浓缩后组方样品中的活性成分含量增加，富含黄酮类、酚酸类等能抑制黄嘌呤氧化酶活性的物质，还有生物碱和菊苣酸等物质具有利尿作用能促进尿酸的排泄。复配得到的组方样品，作为具有更强降尿酸作用且能调节多种身体机能的功能性食品，通过日常食用可起到安全且有效的抗“高尿酸”的效果。

3 小结

随着人们生活水平的提高和生活方式的改变，“高尿酸”发病率逐年升高，开发高效、安全的天然降尿酸活性产品现已成为国内外学者研究的热点。益原素普洱茶与不同药食同源食材复配得到的4 个组方样品都具有显著的黄嘌呤氧化酶活性抑制效果，复配样品兼具口感风味和功能效果，是天然来源植物性成分在降尿酸功能性食品开发中的一个良好应用，可为高尿酸和痛风防治的天然降尿酸功能性食品开发提供参考。