复合酚对沙门氏菌的杀菌效果研究

洪体玉，韦 莹，苏 华，陈 浩，盘宝进，陈立军

（南宁海关技术中心 530021）

近年来，国内外对实验动物要求越来越多，科研对实验动物质量要求也越来越高。规模化养殖，是解决实验动物短缺的有效途径。但是规模化养殖密度高，动物个体之间接触密切，容易导致某些致病性微生物在实验动物个体之间传播，对实验动物的健康质量产生了很大影响。

沙门氏菌是一群寄生于人和动物肠道内的革兰氏阴性杆菌，广泛存在自然界中，是一种常见的食源性疾病的病原菌[1]。大部分的沙门氏菌对人和动物有致病性。在实验动物规模化养殖过程中，沙门氏菌不仅能引起试验动物的感染，还能在环境中传播病原体，对实验动物的质量产生很大的负面影响。因此，实验动物规模化养殖，对环境提出了较高的要求。养殖场所日常消毒管理，是保障实验动物健康的重要环节。为了解不同消毒剂对沙门氏菌的杀灭效果，做好养殖场所有效的消毒工作，本次研究以沙门氏菌为对象，观察复合酚对其杀灭效果。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌种：沙门氏菌，从实验动物粪便检测分离所得。

1.1.2 消毒剂：复合酚。

1.1.3 试剂：胰蛋白胨大豆琼脂培养基（TSA）、胰蛋白胨大豆琼脂培养基（TSB）、吐温-80、卵磷脂、磷酸盐缓冲液（PBS）。

1.1.4 仪器：生物安全柜（HR1200-ⅡA2-E）、高压蒸汽灭菌器（GR60DP）、恒温培养箱(MIR-254)、低温恒温槽（DC-0506）、博世冰箱（BCD-25）、超低温冰箱（DW-HL398S）。

1.2 试验方法

1.2.1 菌悬液的制备：将活化的沙门氏菌接种到TSB培养基上，按照《消毒技术规范》（卫生部2002版）2.1.1有关规定制备菌悬液，采用10倍稀释法，将灭菌PBS稀释菌悬液，使其浓度在1×107～1×108cfu/mL。

1.2.2 中和剂鉴定试验：根据文献报道，采用30g/L卵磷脂+3%的吐温80作为中和剂[2]。选择适宜浓度的复合酚溶液，用沙门氏菌为受试菌进行中和试验。中和试验分为6组，第1组：消毒剂 + 菌悬液，验证消毒剂对试验菌杀灭效果。第2组：消毒剂+菌悬液+中和剂 ，观察残留消毒剂被中和后受到清毒剂作用后的目标菌是否能恢复生长。第3组：中和剂+菌悬液，观察中和剂是否抑菌。第4组：（消毒剂+中和剂）+菌液，观察中和产物，或未被完全中和的残留消毒剂对试验菌的生长繁殖是否有影响。第5组：稀释液+菌悬液，作为菌数对照。第6组：稀释液+中和剂+培养基，作为阴性对照。用TSA倾注法培养。

1.2.3 定量杀灭试验

不同浓度消毒剂对沙门氏菌杀灭效果的影响。用PBS将消毒剂按照使用说明配制成不同浓度：1∶300、1∶300、1∶500、1∶800。取无菌试管加入0.5mL菌悬液，不同浓度消毒液4.5mL，混匀作用至预定时间，分别吸取0.5mL菌悬液加入4.5mL中和剂中，混匀后作用10min后分别吸取1mL样液接种平皿，37℃培养48h，进行菌落计数，计算不同条件的杀菌率。每组实验重复三次。

2 实验结果与分析

2.1 中和剂的筛选

表中结果为3次试验平均值，25℃，作用5min；第3、4、5组间误差率为6.0%。

从表1试验结果可知，试验所选择的中和剂符合试验要求。

表1 中和剂鉴定试验结果

2.2 悬液定量杀灭试验结果

稀释倍数 温度/℃ 作用时间/min 平均杀灭率/%98.35 10 99.50 25 5 100 10 100 5 100 4 5 1∶500 1∶800

从表2的结果可知，复合酚稀释度在≥1∶300时，在4℃、25℃和37℃条件下分别作用5min和10min，其对沙门氏菌的杀灭率均为100%。在稀释度为1∶500时，在4℃条件下，分别作用5min和10min，复合酚溶液对沙门氏菌均不能完全杀灭。

表2 不同条件下对沙门氏菌的杀灭率

3 讨论

复合酚是一种以酚、醋酸和十二烷基苯磺酸为主要成分的消毒剂，其杀菌原理是苯酚为原浆毒，使细菌蛋白质凝固变性而呈现杀菌作用[3]。复合酚能杀灭多种细菌和病毒，主要用于养殖场的环境消毒，如笼舍、墙壁、地面和排泄物等。复合酚稀释度在大于1∶300时，其在4℃、25℃和37℃条件下分别作用5min和10min，对沙门氏菌的杀灭率达到100%。建议疫病期消毒、常规消毒和消毒池消毒分别按1∶200、1∶300和1∶300稀释度进行配制。