胶体金快速检测技术在中兽药散剂中违法添加化学药物检测的应用

赵兴鑫，田 梅，何立宁，苏 青，张云霄、杨晓霞

（1.石家庄市畜产品和兽药饲料质量检测中心 050000；2.石家庄市农业综合行政执法支队 050000；3. 石家庄市藁城区畜产品质量监测站 050000；4. 行唐县畜产品质量监测站 050000）

随着我国养殖业的发展，抗生素残留和耐药问题也凸显出来。中药是我国的瑰宝，守护了华夏儿女几千年，具有无残留、副作用低等优点。减少抗生素残留、耐药以及副作用问题，中药是最佳的解决办法。但在农业农村部关于兽药产品质量的通报中，时常发现有关于中兽药散剂中非法添加化学药物的不合格通报，给禽畜养殖业带来了巨大的安全隐患和经济损失。

目前中兽药散剂中非法添加化学药物检测常用的方法主要有显微镜检查法、薄层色谱法、高效液相色谱法、液相色谱串联质谱法等，这些方法虽然技术相对成熟，但操作较为复杂，需要专业性很强的技术人员。胶体金免疫层析法是近来年用于快速检测及诊断的新技术，适用于现场快速筛查，具有操作简单、省时省力、结果直观等优点，更适用于基层检测快速检测工作。

本实验采用胶体金免疫层析法对健胃散、白头翁散和银翘解散三种常见的中兽药散剂进行研究，通过对不同浓度的磺胺类和氟喹诺酮类抗生素药物的测定，证明该方法的可行性，为相关快速检测方法的建立提供参考。

1 仪器和材料

胶体金检测读数仪（深圳市绿诗源生物技术有限公司），磺胺类、氟喹诺酮类胶体金快速检测卡（深圳市绿诗源生物技术有限公司），漩涡混合仪（IKA），离心机（Sigma）。实验用样本提取液（深圳市绿诗源生物技术有限公司），磺胺类混合对照品（磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺甲恶唑混合对照品100μg/mL）、氟喹诺酮类混合对照品（氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星混合对照品100μg/mL）。

2 方法

取样品1±0.01g，放入50mL离心管中，加入20mL样本提取液，漩涡混合2min，室温下4000r/min离心5min。取上清液200μL加入微孔条中，反复抽吸5次使样品混匀，插入胶体金免疫层析检测卡，计时5min后，直接目测结果。

3 结果与分析

3.1 基质干扰考察

胶体金免疫层析法对样本的处理是有一定要求的，由于免疫反应是一种生物反应，最终滴加入检测卡孔中的液体pH要在一定范围内，一般在5～8之间，否则容易出现假阳性或无效的情况；而中兽药散剂本身物质成分复杂，又具有较深的颜色，易造成干扰。所以在预实验时针对样本提取液（一定浓度的缓冲体系）和稀释倍数做了大量的研究，最终确定了该方法。可以通过图片清晰地看到健胃散、白头翁散、银翘解散在基质状态下试纸条显示明显的阴性，偶有淡黄色背景，但不影响结果判断。

3.2 加标实验

健胃散、白头翁散、银翘解毒散，分别称取1g，至50mL离心管，取磺胺类混合标准品1～100mL的容量瓶中，用甲醇稀释至定量得到浓度为1μg/mL的对照品溶液，取稀释后的对照品溶液80μL加入已称好样品的离心管中心，相当于中药散剂中磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺甲恶唑的含量均为80ng，磺胺类总含量为400ng，同时做阴性对照实验，按“2”方法处理后，待测液的磺胺类添加物的浓度为20ppb，插入磺胺类胶体金免疫层析检测卡进行检测，分别记录结果，详见图1，各个加标样品检测结果均为阳性，表明方法准确性良好。

图1 健胃散、白头翁散、银翘解毒散的阴阳性检测（磺胺类）

健胃散、白头翁散、银翘解毒散，分别称取1g，至50mL离心管，取氟喹诺酮类混合标准品1～100mL的容量瓶中，用甲醇稀释至定量得到浓度为1μg/mL的对照品溶液，取稀释后的对照品溶液20μL加入已称好样品的离心管中心，相当于中药散剂中氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星的含量均为20ng，氟喹诺酮类总含量为80ng，同时做阴性对照实验，按“2”方法处理后，待测液的氟喹诺酮类添加物的浓度为4ppb，插入氟喹诺酮类胶体金免疫层析检测卡进行检测，分别记录结果，详见图2，各个加标样品检测结果均为阳性，表明方法准确性良好。

图2 健胃散、白头翁散、银翘解毒散的阴阳性检测（氟喹诺酮类）

4 讨论

根据实验结果来看，健胃散、白头翁散、银翘解散三种中兽药散剂在本实验方法下检测未出现假阳性或无效的情况，说明该方法的提取溶剂和稀释倍数适合，减少了色素及其他杂质的影响。同时，在加入的药物对照品的样品中，均有检出，呈现明显的阳性结果，且检测限均达到痕量级别，更进一步确保检测结果的准确性。

此方法的优势十分明显，各检测项目的灵敏度可以与其他检测手段媲美，可以对大量样本的多个靶标物质进行提前检测，初步确定违法行为。胶体金免疫层析法主要优势在于操作简单、省时省力，相对于传统方法来说，仪器设备要求较少，检测费用较低，结果直观，适合基层使用，该方法推广应用空间广阔。

中兽药散剂品类众多，成分复杂，且在种植及炮制时有差异，而胶体金免疫技术易受样本基质干扰，例如样品本身色素较多、ph值过低或过高、相似结构的杂质成分等因素，易出现假阳性或无效情况。为解决此类问题，需要调配合适的提取溶剂和调整合适的稀释倍数来降低基质干扰。本文只针对三种中兽药散剂和八种化学药物进行研究，对于其他中兽药散剂的非法添加化药的检测，需进一步实验研究。