葫芦茶水提物镇咳祛痰平喘作用的实验研究*

苏金妹，卢秋玉，唐爱存

1广西国际壮医医院明秀分院，广西 南宁530001；2广西壮族自治区人民医院药学部；3广西中医药大学第一附属医院药学部

葫芦茶为豆科植物葫芦茶Tadehagi triquetrum（L.）Ohashi的枝叶，别名葫芦叶、牛虫草、咸鱼草等，是壮族常用药材，主要分布在广西、江西、广东、海南等地。葫芦茶味苦涩、凉，具有清热解毒，利湿退黄，消积杀虫之功。临床主要用于治疗中暑烦渴、感冒发热、咽喉肿痛、肺痈、黄疸肝炎、肾炎、肠炎、风湿关节痛、钩虫病、小儿疳积等［1］。前期研究表明葫芦茶具有明显的保肝抗炎作用［2-3］。目前未查到葫芦茶水提物在镇咳、平喘、化痰方面的药理研究，而在临床应用中葫芦茶用于治疗痰热咳嗽、痰黄稠、咽喉不利、哮喘等［4-5］。因此，对葫芦茶水提物进行镇咳祛痰药效学研究很有意义。

1 材料与方法

1.1 实验动物昆明种小鼠，SPF级，雌雄各半，体质量（20±2）g；Wistar大鼠，SPF级，雌雄各半，体质量180～220 g；豚鼠，SPF级，雌雄各半，体质量200～250 g。均购自广西医科大学实验动物中心，实验动物生产许可证号：SCXK（桂）2009-0002，实验动物使用许可证号：SYXK（桂）2009-0004。饲养环境：在具有负压及过滤空气装置的动物房饲养，室温20～25℃，相对湿度60%～70%，光照为12 h小时明暗交替，清洁喂养，自由饮食。

1.2 药物与试剂葫芦茶（广西万宝堂药业有限公司），经广西中医药大学第一附属医院黄敏主任药师鉴定为豆科植物葫芦茶；氨水（广东光华化学厂有限公司，批号：20170306）；枸橼酸（中国医药集团上海化学试剂公司，批号：20180516）；苯酚红（上海试剂三厂，批号：990609）；磷酸组胺（中国科学院上海生物化学研究所，批号：990826）；氯化乙酰胆碱（上海试剂三厂，批号：991026）；磷酸可待因（青海制药厂，批号：20170802）；氯化铵（西安化学试剂厂，批号：20181008）；氨茶碱（山西临汾云鹏药业有限公司，批号：20170206）。

1.3 实验仪器WH-2000型超声波雾化器（广东粤华医疗器械厂有限公司）；722S型可见分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）；毛细管（内径0.8 mm，长度5 cm）。

1.4 实验方法

1.4.1 试验药物制备 将葫芦茶粉碎成粗粉，取干燥适量粗粉，加适量水浸泡30 min，按1∶10料液比加水，煎煮60 min，趁热抽滤，收集滤液，滤渣加适量水煎煮45 min，合并两次所得滤液并进行减压浓缩，得到浓缩物后，再分别配成所需的相应浓度。

1.4.2 小鼠氨水引咳实验 根据文献［6-8］取昆明种小鼠50只，随机分成模型组，磷酸可待因组（0.05 g/kg），葫芦茶水提物低剂量（100 mg/kg）、中剂量（200 mg/kg）、高剂量（400 mg/kg）组，每组10只。各组给予对应药物连续灌胃给药3天，第3天给药40 min，将小鼠放置密闭玻璃罩内，用超声雾化器喷入氨水5 s激发小鼠咳嗽，以小鼠同时出现腹肌收缩、缩胸、张嘴（咳声有无均可）为咳嗽标准，记录引咳潜伏期和2 min内小鼠咳嗽次数。

1.4.3 豚鼠枸橼酸引咳实验 根据文献［6-8］采用豚鼠枸橼酸引咳法，将17.5%的枸橼酸溶液盛于超声雾化器雾化室的雾化杯内，向钟罩内恒速喷入枸橼酸溶液雾化气1 min，记录5 min内的咳嗽次数。以豚鼠咳嗽声音响亮，听到咳嗽声音计1次咳嗽，咳嗽次数少于10次的弃除，将预选合格的50只豚鼠随机分成模型组，磷酸可待因组（0.05 g/kg），葫芦茶水提物低剂量（100 mg/kg）、中剂量（200 mg/kg）、高剂量（400 mg/kg）组，每组10只。各组给予对应药物连续灌胃给药3天，第3天给药1 h后，将豚鼠扣于钟罩内，按预选的条件，向钟罩内恒速喷入枸橼酸溶液雾化气1 min，观察豚鼠自喷雾开始至出现咳嗽的潜伏期及喷雾停止后5 min内的咳嗽次数。

1.4.4 小鼠酚红祛痰实验 根据文献［6-8］取昆明种小鼠50只，雌雄各半，随机分成模型组，氯化铵组（1.0 g/kg），葫芦茶水提物低剂量（100 mg/kg）、中剂量（200 mg/kg）、高剂量（400 mg/kg）组，每组10只。第3天给药30 min后，腹腔注射5%的酚红溶液0.01 mL/g体质量，30 min后，脱颈处死小鼠，剥离气管周围组织，剪下自甲状软骨下至气管分支处的一段气管，放入装有2 mL生理盐水的试管中，振荡30 min，将冲洗液放入另一试管，加入0.1 mL的NaOH（1 mol/L），用722s型分光光度计，波长546 nm测OD值，根据酚红标准曲线，将光密度值换算成酚红含量。

1.4.5 大鼠毛细管祛痰实验 根据文献［6-8］取Wistar大鼠40只，随机分成模型组，氯化铵组（1.0 g/kg），葫芦茶水提物低剂量（100 mg/kg）、中剂量（200 mg/kg）、高剂量（400 mg/kg）组，每组8只。连续灌胃给药3天，第3天给药前禁食不禁水12 h，给药后1 h，乌拉坦腹腔注射麻醉后，仰位固定。剪开颈正中部皮肤，分离出气管。在甲状软骨下缘正中的软骨环之间用尖锐的注射针头扎一小孔，然后插入玻璃毛细管一根，使毛细管刚好接触气管底部表面，借以吸取气管后部之痰液。当毛细管内痰液充满时，立即另换一根。以毛细管吸取痰液长度作为评价药物的祛痰效果。记录给药后2 h内的痰液分泌量。

1.4.6 豚鼠组胺引喘实验 根据文献［6-8］取健康豚鼠，雌雄兼用。将豚鼠放置密闭玻璃罩内，用超声雾化器以400 mm Hg的恒压喷入2%氯化乙酰胆和0.1%磷酸组胺的等量混合液，每只豚鼠恒压恒速喷雾15 s，测定其引喘潜伏期，引喘潜伏期小于150 s为合格。将50只豚鼠随机分成模型组，氨茶碱组（0.1 g/kg），葫芦茶水提物低剂量（100 mg/kg）、中剂量（200 mg/kg）、高剂量（400 mg/kg）组，每组10只。连续灌胃给药3天，第3天给药1 h后，将豚鼠放置密闭玻璃罩内，按上述方法进行喷雾，测定其引喘潜伏期。

1.5统计学方法应用SPSS 19.0软件进行统计学处理，计量资料采用±s表示，采用t检验，多组均数比较采用方差分析，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 对浓氨水致小鼠咳嗽反应的影响与模型组比较，葫芦茶水提物中、高剂量组能延长氨水引起小鼠咳嗽反应的潜伏期，同时减少咳嗽次数，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 各组浓氨水致小鼠咳嗽反应比较（±s）

表1 各组浓氨水致小鼠咳嗽反应比较（±s）

注：与模型组比较，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01；-表示无数值

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2.2 对枸橼酸致豚鼠咳嗽反应的影响与模型组比较，葫芦茶水提物各剂量组能延长枸橼酸引起豚鼠咳嗽反应的潜伏期，同时减少咳嗽次数，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 各组枸橼酸致豚鼠咳嗽反应比较（±s）

表2 各组枸橼酸致豚鼠咳嗽反应比较（±s）

注：与模型组比较，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01；-表示无数值

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2.3 对小鼠酚红祛痰作用的影响与模型组比较，葫芦茶水提物各剂量组能增加小鼠的酚红排泄量，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表3。

表3 各组小鼠气管段酚红排泄量比较（±s）

表3 各组小鼠气管段酚红排泄量比较（±s）

注：与模型组比较，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01；-表示无数值

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2.4 对大鼠毛细管祛痰作用的影响葫芦茶水提物各剂量组均可显著增加大鼠的排痰量，与模型组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表4。

表4 各组大鼠排痰量比较（±s）

表4 各组大鼠排痰量比较（±s）

注：与模型组比较，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01；-表示无数值

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2.5对豚鼠组胺引喘作用的影响葫芦茶水提物各剂量组对组胺诱发的豚鼠哮喘均有明显的抑制作用，可显著延长豚鼠引喘潜伏期，与模型组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表5。

表5 各组组胺致豚鼠哮喘反应比较（±s）

表5 各组组胺致豚鼠哮喘反应比较（±s）

注：与模型组比较，*表示P＜00.05，**表示P＜00.01；-表示无数值

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3 讨论

咳嗽、咳痰、气喘是呼吸系统疾病的常见症状，严重影响患者的生活质量［9］。中医药是中国古代科学的瑰宝，在治疗呼吸系统疾病方面具有独特的理论和疗效。

本实验研究的关键是建立合适的动物模型。咳嗽动物模型常用的诱咳方法为机械刺激法和化学诱导法，由于机械刺激强度不能控制，故常选用化学诱导法。研究表明，常用的化学诱导物质有氨水、枸橼酸、丙烯醛、二氧化硫等，由于二氧化硫引咳的个体差异较大，而丙烯醛引咳不稳定，因此本实验采用氨水、枸橼酸诱导建立咳嗽模型，常用的实验动物有小鼠、豚鼠和大鼠，小鼠和豚鼠化学诱导刺激敏感性好，个体差异小，可靠性高，而大鼠个体差异较大，可靠性不高，因此本实验选择小鼠、豚鼠作为咳嗽动物模型。研究结果表明，葫芦茶水提物能显著减少小鼠因氨水所致的咳嗽次数及豚鼠因枸橼酸所致的咳嗽次数，同时能延长咳嗽潜伏期。

痰是一种病理产物，当呼吸道发生炎症病变时，呼吸道液体的成分就会发生改变，形成痰液［10］。祛痰药的作用原理为增加呼吸道分泌液，使痰液变稀，降低痰液黏度，使痰液易于咳出，本实验采用小鼠酚红祛痰法和大鼠毛细管祛痰法观察其祛痰作用，结果显示葫芦茶水提物能增加小鼠气管酚红排泌量及增加大鼠毛细管的排痰量，利于附着气管黏膜的浓痰变稀从气管壁脱落，起到祛痰作用。哮喘是由嗜酸性粒细胞、肥大细胞、T淋巴细胞等细胞组分参与的慢性气道炎症性疾病，这种慢性炎症导致气道高反应性的产生，通常出现广泛多变的可逆性气流受限，并引起反复发作的喘息、气急、胸闷或咳嗽等症状，严重者出现呼吸抑制或窒息，危及生命［11］。本实验采用组胺引喘法，结果表明葫芦茶水提物能延长组胺致豚鼠哮喘发作的潜伏期，提示葫芦茶可对抗组胺、乙酰胆碱等引起的支气管收缩。

综上所述，葫芦茶具有显著的镇咳祛痰平喘作用，本实验为临床应用葫芦茶提供了实验依据和理论基础，但是其相关的药理作用机制有待进一步研究。