高效液相色谱测定乳液和化妆水中芍药苷和葛根素的含量

2021-11-05胡小荣王艺泽楼芝英周国光

上海师范大学学报·自然科学版 2021年5期

胡小荣，王艺泽，楼芝英，胡岗，周国光

（上海师范大学化学与材料学院，上海200234）

0 引言

近年来，中草药提取物作为原料应用于化妆品已成为化妆品研发新热点之一.其中芍药苷提取于毛茛科植物芍药根，具有扩张血管、镇痛镇静、抗炎抗溃疡、解热解痉、利尿等作用［1-2］，常用于化妆品，可治疗粉刺，并能延缓机体组织的衰老.葛根素是中药葛根中分离的具有扩冠作用的异黄酮类衍生物［3］，存在于豆科植物葛及野葛的根中，加入至化妆品中，能显著抑制酪胺酶的催化活性，中断黑色素氧化过程［4］，抑制黑色素的发生和形成，从而防止黄褐斑、日晒斑等色素沉积.目前报道的芍药苷和葛根素检测方法常见的有红外色谱法［5］、毛细管电泳法［6］、高效液相色谱法［7］、液质联用法［8］等，但同时对芍药苷和葛根素作检测方法报道的不多.

本文作者通过甲醇提取、高效液相色谱（HPLC）分离、二极管阵列检测器（DAD）检测、外标法定量，建立了一种对乳液和化妆水中的芍药苷和葛根素同时检测的快速、高效、准确的方法，为化妆品产品质量监督提供技术支持.

1 实验部分

1.1 主要仪器和试剂

HPLC仪：Agilent 1260型，配DAD，美国安捷伦公司；超声波清洗器：KH-500DE型，昆山和创超声仪器有限公司；涡旋仪：NP-30S型，常州恩培仪器制造有限公司；电子天平：FB224型，感量0.000 1 g，上海舜宇恒平仪器有限公司.

甲醇、乙腈：购自安谱实验技术有限公司，色谱纯；氯化钠、磷酸、乙醇：购自安谱实验技术有限公司，分析纯；芍药苷、葛根素均为标准品，质量分数不低于99.4%，购自上海诗丹德标准技术服务有限公司；一次性滤膜：0.45µm；实验用水为超纯水，实验室自制；化妆水和乳液样品由上海相宜本草化妆品有限公司提供.

1.2 标准溶液的配制

准确称取0.01 g芍药苷和葛根素标准品，置于10 mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解，定容刻度，配成1 mg·mL-1的单标溶液.再取这2种中草药单标溶液各1 mL，加入甲醇定容至10 mL，配成0.1 mg·mL-1的混标溶液.-18℃保存，一周内使用.

1.3 色谱条件

色谱柱：Zorbax SB-C18柱（250 mm×4.6 mm，5µm i.d.）；检测波长：芍药苷取232 nm，葛根素取250 nm；流动相：质量分数为0.1%磷酸水溶液与纯乙腈的体积比V（0.1%磷酸水溶液）∶V（乙腈）=85∶15；流速：1 mL·min-1；色谱柱柱温：40℃；进样量：10µL；外标法定量.

1.4 样品前处理

准确称取1.000 g化妆品样品（化妆水和乳液）于50 mL具塞离心管中，加入一定量的标准溶液，其中乳液另加1 g氯化钠破乳.加入10 mL甲醇，震荡，摇匀，室温超声30 min（280 W，40 kHz），取出放冷，加甲醇至刻度，摇匀，过0.45µm滤膜，待测.

加标样品的制备和定量：分别在1.000 g样品中添加500µL和80µL的0.1 mg·mL-1的混标溶液，进行上述方法处理，制成50µg·g-1和8µg·g-1加标样，分别用经过0.1 mg·mL-1的混标溶液稀释至5µg·mL-1和0.8µg·mL-1的混标进行外标法定量.

2 结果与讨论

2.1 提取条件优化

目前芍药苷和葛根素常用的提取溶剂为甲醇、乙醇、甲醇水溶液和乙醇水溶液［9-11］.通过对加标样目标物的检测发现，甲醇具有最佳的回收率.尝试回流提取、索氏提取和超声提取，分别测试不同提取时间下的目标物回收率，发现回流提取溶剂用量多，回流提取和索氏提取耗时长，至少需要60 min以上，超声提取30 min即可达到较好的回收率，明显优于回流提取和索氏提取.考察了不同温度和时间的提取，优化后，最终确定最佳提取方式为甲醇溶解，室温超声30 min［12］.

2.2 色谱条件的优化

由紫外扫描可知芍药苷在232 nm以及葛根素在250 nm处都有强吸收峰.参考相关文献［13-15］尝试了甲醇-水、乙腈-水、乙腈-0.1%磷酸水溶液等流动体系，发现各组分在流动相甲醇-水体系不能获得很好的分离，在乙腈-水体系分离效果有所改善，但峰形拖尾严重，乙腈-0.1%磷酸水溶液体系分离效果好，且峰形对称.根据加标样各组分分离效果，确定在1～7 min检测波长取232 nm，7～28 min检测波长取250 nm，取V（0.1%磷酸水溶液）∶V（乙腈）=85∶15，等梯度洗脱，如图1～3所示.

图1 芍药苷和葛根素混合标准溶液色谱图

图2 乳液加标样色谱图

图3 化妆水加标样色谱图

2.3 线性范围和检出限

以0.1 mg·mL-1的混标用甲醇稀释成质量浓度为0.2，0.5，0.8，1.0，3.0，5.0和10.0µg·mL-1的系列混合标准溶液，进行HPLC测定.以峰面积y对质量浓度x做标准曲线（图4），线性关系及方法检出限见表1，结果表明：两种草药在0.2～10.0µg·mL-1具有良好的线性关系，可以满足定量分析.在空白化妆品中添加一定量的混合标准溶液，用1.4节方法处理，获得芍药苷和葛根素在化妆水及乳液中的检出下限分别为8 mg·kg-1和2 mg·kg-1.

表1 线性关系及检出限

图4 混合标准溶液标准曲线

2.4 加标回收率和精密度

取上海相宜本草化妆品有限公司提供的化妆水和乳液为样品，样品空白色谱图见图5和图6，分别加入一定量的混标溶液，制成添加量为8 mg·kg-1和50 mg·kg-1的4种加标样，每个样品平行测定6次，进行回收率试验，结果见表2和表3.数据表明，2种样品各添加2种中草药加标量的回收率在90.6%～106.5%之间，相对标准偏差（RSD）在1.53%～2.37%之间，能够满足同时检测2种中草药的技术要求，检测结果可靠.