血清miR-21、IGFBP-3水平与妊娠期肝内胆汁淤积症患者不良妊娠结局的相关性

范海博

[关键词] 妊娠期肝内胆汁淤积症;血清微小RNA-21;胰岛素样生长因子结合蛋白-3;不良妊娠结局;相关性

[中图分类号] R714          [文献标识码] B          [文章编号] 1673-9701（2021）17-0120-04

Correlation between serum miR-21 and IGFBP-3 levels and adverse pregnancy outcomes in patients with intrahepatic cholestasis of pregnancy

FAN Haibo

Department of Laboratory Medicine， Jiamusi Maternal and Child Health Hospital in Heilongjiang Province， Jiamusi 154002， China

[Abstract] Objective To explore the correlation between serum levels of microRNA-21 （mir-21）， insulin-like growth factor binding protein-3 （IGFBP-3） and adverse pregnancy outcomes of patients with intrahepatic cholestasis of pregnancy （ICP）. Methods A total of 87 patients with ICP who gave birth in our hospital from February 2018 to February 2020 were selected. The pregnancy outcomes of selected parturient were recorded. Low birth weight and premature rupture of membranes were taken as adverse pregnancy outcomes in the adverse pregnancy outcome group （n=51）， and the rest of normal pregnant women were taken into the normal pregnancy outcome group （n=36）. The levels of miR-21 and IGFBP-3 were detected in all parturient. The relationship between serum miR-21， IGFBP-3 levels and adverse pregnancy outcomes of patients with ICP was analyzed. Results The level of miR-21 was higher and the level of IGFBP-3 BP-3 was lower in the adverse pregnancy outcome group than those in the normal pregnancy outcome group （P<0.05）. Logistics regression analyses showed that the regression equation was Y=-0.348-5.368X1+12.865X2， which suggested that the increase of serum miR-21 level and the decrease of IGFBP-3 level were the influencing factors leading to adverse pregnancy outcome （OR>1， P<0.05）. Receiver operating characteristic curve （ROC） was plotted， and the results showed that the area under the curve （AUC） of the combination of serum miR-21 and IGFBP-3 to predict the adverse pregnancy outcome of patients with ICP was 0.976， which had certain predictive value and obtained the best predictive value. Conclusion Serum levels of miR-21 and IGFBP-3 in patients with ICP are closely related to adverse pregnancy outcomes， which can provide timely and effective preventive measures for these patients.

[Key words] Intrahepatic cholestasis of pregnancy; Serum microRNA-21; Insulin-like growth factor binding protein-3; Adverse pregnancy outcome; Correlation

妊娠期肝內胆汁淤积症主要以皮肤瘙痒和胆汁酸升高为主要特征，是造成围生儿死亡的重要影响因素，且对孕产妇健康造成不良威胁[1]。随着现代医疗的迅猛发展，抗胆汁淤积类、皮质激素类药物已被广泛应用于该疾病的治疗中，可有效控制疾病发展，但临床应用中发现，仍有部分孕产妇存在诸多不良妊娠结局，威胁母婴安全，因此，早期明确疾病发展情况，可为临床及时实施有效的预防措施提供依据。相关研究表明，血清微小RNA-21（MicroRNAs-21，miR-21）、胰岛素样生长因子结合蛋白-3（Insulin-like growth factor binding protein-3，IGFBP-3）是该疾病的敏感指标，其中miR-21属于一种微小RNA，参与多种疾病的发生与发展;IGFBP-3主要是由肝脏合成与分泌，其含量在该疾病中变化较为明显[2]。鉴于此，本研究将选取2018年2月至2020年2月在我院进行分娩的87例妊娠期肝内胆汁淤积症患者，旨在探讨miR-21、IGFBP-3水平与妊娠期肝内胆汁淤积症患者不良妊娠结局的相关性，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018年2月至2020年2月在我院进行分娩的87例妊娠期肝内胆汁淤积症患者，统计入选产妇妊娠结局，将新生儿低体重、胎膜早破等情况作为不良妊娠结局，共计51例，将其设为不良妊娠结局组（n=51），其余正常妊娠产妇将其设为正常妊娠结局组（n=36）。不良妊娠结局组年龄23～36岁，平均（29.24±4.07）岁;孕龄34～42周，平均（38.20±1.54）周;正常妊娠结局组年龄22～37岁，平均（29.30±4.11）岁;孕龄33～41周，平均（38.19±1.51）周。两组年龄、孕龄等一般资料比较，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

1.2 纳入及排除标准

纳入标准：①符合《妇产科学》[3]中妊娠期肝内胆汁淤积症诊断标准;②单胎妊娠;③均知晓本研究内容，且与本院签署相关知晓同意书。排除标准：①胎位异常、头盆不称、宫颈机能不全等者;②精神状态异常，无法正常沟通交流者。

1.3 方法

1.3.1 仪器   赛默飞世尔科技公司提供的B960型号的PCR扩增仪、RT-PCR检测仪器;济南鑫贝西生物科技有限公司提供的超净工作台;广东佛衡仪器有限公司提供的信号为DT5-4自动脱盖离心机;杭州瑞诚仪器有限公司提供旋涡振荡器等。上述仪器均可正常使用。

1.3.2  试剂  北京百奥莱博科技有限公司提供的离心柱型提取分离试剂盒;合肥博美生物科技有限公司提供的RNA酶抑制剂;上海哈灵生物科技有限公司提供的PCR检测试剂盒;北京欧普特科技有限公司提供的PBS洗涤液。本研究所使用的试剂均在保质期范围内，使用时按照操作说明严格进行。

1.3.3 检测方法  分别收集两组患者产前清晨空腹静脉血3 mL，以3500 r/min速度离心10 min后，取上层血清，并将其置于-20℃环境中保存、待检，采用实时荧光定量PCR检测法检测血清微小RNA-21水平，具体方式如下：PCR以let-7amiRNA作为内参基因，应用聚合酶链式反应技术（PCR）扩增基因组RNA，首先取400 μL的血清，在其中加入同体积的裂解液，充分混合后，使RNA蛋白复合物充分分离，完成后，加入miR-21、let-7amiRNA颈环作为引物进行RNA逆转录，加入引物后，先将其置于恒温箱中，首先将温度设置为42℃环境下逆转录30 min，在将温度分别升高至55℃、72℃、95℃环境下进行反复扩增，随着温度的的变化进行荧光信号采集，并计算miR-21水平。采用酶联免疫吸附检测法测定IGFBP-3水平，具体方式如下：取患者血清置于酶标板加上盖，反应120 min后，甩去酶标板内液体，采用吸水纸轻拍几下，加入生物素抗人IGFBP-3抗体工作液，反应60 min后，37℃反应60 min，采用PBS洗涤液洗涤3次后，甩去多余的液体后，加入0.1 mL的显色液，避光反应30 min后，依据样品的显色情况，计算IGFBP-3水平。

1.4统计学方法

采用SPSS 18.0统计学软件进行数据处理，计数资料以[n（%）]表示，组间比较采用χ2检验;全部计量资料均经Shapiro-Wilk正态性检验，符合正态分布的计量资料以（x±s）表示，采用t检验;采用Logistics回归分析检验血清miR-21、IGFBP-3水平与妊娠期肝内胆汁淤积症患者不良妊娠结局的相关性;绘制受试者工作曲线（ROC）得到曲线下面积（AUC），检验血清miR-21、IGFBP-3水平对妊娠期肝内胆汁淤积症患者不良妊娠结局的预测价值：AUC值>0.9表示预测性能较高，0.71～0.90表示有一定的预测性，0.5～0.7表示预测性能较差;P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者血清miR-21、IGFBP-3水平比较

不良妊娠结局组miR-21水平较正常妊娠结局组高，IGFBP-3水平较正常妊娠结局组低，差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。

2.2 Logistics回归分析结果

将妊娠期肝内胆汁淤积症患者妊娠结局情况的作为因变量（1=不良妊娠结局，0=正常妊娠结局），将血清miR-21、IGFBP-3水平作为协变量（均为连续变量），进行Logistics回归分析，得到回归方程：Y=-0.348-5.368X1+12.865X2，结果显示血清miR-21水平升高、IGFBP-3水平降低是导致不良妊娠结局的影响因素（OR>1，P<0.05）。见表2。

2.3 血清miR-21、IGFBP-3水平预测妊娠期肝内胆汁淤积症患者不良妊娠结局发生的价值

绘制ROC曲线结果显示，血清miR-21、IGFBP-3水平联合预测妊妊娠期肝内胆汁淤积症患者发生不良妊娠结局的AUC为0.976，具有一定的预测价值，可获得最佳预测价值。见表3。ROC曲线见封三图7。

3 讨论

妊娠期肝内胆汁淤积症为临床妇产科常见的病症，主要指孕产妇在妊娠期内出现胆汁酸显著升高的现象，为妊娠期中、晚期特有的并发症，具有较高的发病率，临床主要以皮肤瘙痒、失眠、恶心等为主要表现，如不及时治疗，可导致低体重儿、新生儿窒息、胎膜早破等不良妊娠结局，对孕产妇及围生儿健康安全造成严重威胁[4-6]。目前临床治疗该疾病多采用药物控制的方式，可有效改善患者各项临床体征，但应用中发现，仍有部分患者效果不佳，最终导致胎儿出现宫内窘迫、羊水粪染、新生儿窒息等严重不良妊娠结局，威胁母亲安全。因此，临床需尽早明确导致妊娠期肝内胆汁淤积症患者不良妊娠结局发生的相关原因，并积极予以对症预防及治疗措施，以改善妊娠结局。

本研究结果显示，不良妊娠结局组miR-21水平较正常妊娠结局组高，IGFBP-3水平较正常妊娠结局组低，差异有统计学意义（P<0.05）;将不良妊娠结局的妊娠期肝内胆汁淤积症患者作为因变量，将血清miR-21、IGFBP-3水平作为协变量，进行Logistics回归分析，得到回归方程：Y=-0.348-5.368X1+12.865X2，提示血清miR-21水平升高、IGFBP-3水平降低是导致不良妊娠结局的影响因素（OR>1，P<0.05）;繪制ROC曲线结果显示，血清miR-21、IGFBP-3水平联合预测妊妊娠期肝内胆汁淤积症患者发生不良妊娠结局的AUC为0.976，具有一定的预测价值，可获得最佳预测价值。分析原因在于，miR-21属于一种微小RNA，参与多种疾病的发生与发展，且参与妊娠期肝内胆汁淤积症疾病发生与发展的全过程，具有高度保守性，可对人类1/3的蛋白基因合成与表达进行调控，其存在于该疾病患者机体内，参与疾病发展，可对患者胆囊内下游靶基因发挥生物学作用，促进内部细胞增殖、分化及凋亡的全过程，并在血浆中形成结合度较高的蛋白，随着孕龄的增加而升高，从而加重疾病发展，可对胎儿心率造成不良影响，影响母婴安全[7-9]。IGFBP-3主要是由肝脏合成与分泌，其含量在妊娠期肝内胆汁淤积症患者中变化较为明显，为妊娠晚期产妇机体内IGF-1的主要结合蛋白，IGFBP-3含量降低，可导致IGF-1结合的结合率显著降低，减少IGF-1的生物利用度，从而提升胎儿与孕产妇并发症的发生率[10-13]。同时，IGFBP-3可影响胆汁酸的合成与分泌，并影响维生素K的吸收，导致不良妊娠结局的发生，临床应重点予以关注[14-16]。但本研究中所纳入的样本量较少，故研究结果存在一定局限性，为进一步证实该结果，临床仍需大样本量研究进一步随访证实结果真实性。

综上所述，妊娠期肝内胆汁淤积症患者血清miR-21、IGFBP-3水平与不良妊娠结局密切相关，临床可加强对血清miR-21、IGFBP-3水平的检测，为临床实施合理的预防与治疗方案提供理论基础，有利于提升患者预后质量，降低不良妊娠结局发生率。

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（收稿日期：2020-09-23）