藤茶保肝片的制备工艺研究*

张 政，邓月婷，△，卢 英，仲万春，贾继禧，王小芳，张 智

1 甘肃省中药固体分散制剂重点实验室,甘肃 兰州730102；2 甘肃陇神戎发药业股份有限公司

藤茶保肝片是以藤茶、茯苓、绿豆、高良姜为原料加工制成的对化学性肝损伤有辅助治疗功能的保健食品。藤茶为显齿蛇葡萄（Ampelopsis grossedentata）的嫩叶，藤茶的使用已有三千多年的历史。我国最早在《诗经》中称之为古刹钩藤，唐朝陆羽在《茶经》里将其归为藤茶，于是藤茶的命名沿用至今。其药性味甘淡、功效清热解毒，主治黄疸型肝炎、风热感冒、咽喉肿痛等。显齿蛇葡萄叶在2013 年被中华人民共和国卫生部批准为新食品原料。现代药理学实验表明藤茶有保肝护肝作用［1-3］。藤茶中水溶性糖含量约为10%；氨基酸含量约为5%；多酚类化合物含量约为20%；黄酮类化合物含量在40% 左右，其中二氢杨梅树皮素含量可达38.5%［4-5］；二氢杨梅素对四氯化碳致大鼠肝纤维化有明显保护作用［6］，并且具有预防和治疗酒精性肝损伤的功效［7］，以及防醉、解酒作用［8-10］；茯苓是药食两用的药材，茯苓的化学成分主要为多糖、三萜、脂肪酸、甾醇、酶等；茯苓多糖具有抗肿瘤、保肝、利尿、抗衰老、抗炎、降血脂、增强免疫、催眠等作用；茯苓三萜具有抗肿瘤、保肝、抗衰老、增强免疫等作用［11］；绿豆的成分主要有蛋白质、脂肪、碳水化合物、粗纤维、钙、磷、铁、胡萝卜素、维生素等，具有清热解毒，消暑除烦，止渴健胃，利水消肿等作用，还具有降血脂、降胆固醇、抗过敏、抗菌、抗肿瘤、增强食欲、保肝护肾等药理作用［12-13］；高良姜主要含黄酮类、挥发油和二芳基庚烷类化合物，高良姜有较强的抗溃疡、抗腹泻、利胆、镇痛、抗炎、抗缺氧、抗凝、抗血栓等作用［14-17］。本产品配方中藤茶清胃热、利酒湿，为君药。茯苓、绿豆淡渗利湿，使酒湿之邪从小便出，茯苓健脾，同时促进脾胃运化，绿豆甘凉压热，可解酒毒，故为臣药；高良姜性辛热，少用起到反佐功效，同时起止呕作用，故为佐药。全方配伍，清热利湿，渗湿健脾，解毒止呕，共奏解酒保肝之效。同时，中药片剂是一种常见剂型，便于储存、运输、携带和服用。本研究以藤茶、茯苓、绿豆、高良姜为原料，制成对化学性肝损伤有辅助治疗作用的保健食品。

1 材料

1.1 药物与试剂藤茶（贵州江口梵净山云峰野生植物开发有限公司）；茯苓、高良姜（亳州发扬中药材有限责任公司）；玉米淀粉（西安国维淀粉有限责任公司）；交联羧甲基纤维素钠（安徽山河药用辅料股份有限公司）；花旗松素对照品（中国食品检定研究院，批号：111816-201102）；无水乙醇（分析纯，天津市大茂化学试剂厂）。

1.2 仪器与设备MS205DU型电子天平（METTLER TOLRDO）；JA2603B 型电子天平（上海精科天美科学仪器有限公司）；TU-1901 型紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限公司）；HWS26 型恒温水浴锅（上海一恒科学仪器有限公司）；DGG-9240B型电热恒温鼓风干燥箱（上海森信实验仪器有限公司）；DNT-03-00 型多功能提取浓缩机组（浙江温兄机械阀业有限公司）；FBWS3 型实验室多功能沸腾制粒机（浙江迦南科技股份有限公司）；ZP35B型旋转式压片机（上海天祺药机械有限公司）；YPD-3000 型片剂硬度仪（上海黄海药检仪器有限公司）；ZB-1E 型智能崩解仪（天津市天大天发科技有限公司）；FT-2000AE 型脆碎度检查仪（天津市天大天发科技有限公司）。

1.3 方法

1.3.1 提取工艺 将藤茶与茯苓、绿豆、高良姜分别采用正交水提方法优选提取工艺参数。

1.3.1.1 藤茶提取工艺 采用正交试验设计，对提取时间、提取次数及料液比三因素进行考察，各取3个水平进行试验设计，以出膏得率、二氢黄酮（以二氢槲皮素计）含量为指标进行工艺优选。L9（34）正交表见表1。

表1 藤茶提取因素水平

1.3.1.2 茯苓、高良姜、绿豆提取工艺 采用正交试验设计，对提取时间、料液比和提取次数三因素进行考察，各取3 个水平进行试验，以出膏得率为指标进行工艺优选，L9（34）正交表见表2。

表2 茯苓、高良姜、绿豆提取因素水平

1.3.2 藤茶片制备工艺

1.3.2.1 制粒 将两种提取液混合后浓缩干燥并粉碎成细粉。采用沸腾制粒机将浸膏粉与不同辅料制粒：进风温度70～90℃，物料温度40～60℃，进风风量60～100 m3/h，黏合剂流速5～10 r/min，雾化压力0.15 Mpa，以颗粒合格率、休止角、堆密度为考察指标，确定填充剂。见表3。

表3 浸膏粉与不同辅料配比

1.3.2.2 黏合剂的确定 将浸膏粉∶填充剂∶崩解剂按1∶0.2∶0.025 充分混匀，选择不同黏合剂，采用沸腾制粒机制粒后压片，以硬度、脆碎度、崩解时限为指标，确定合适的黏合剂。

1.3.3 压片 按优选工艺，以淀粉为填充剂，交联羧甲基纤维素纳为崩解剂，4% 淀粉浆为黏合剂，硬脂酸镁为润滑剂，按浸膏粉∶填充剂∶崩解剂=1∶0.2∶0.025 的比例充分混匀，用一步制粒机制粒后压片。

1.3.4 出膏得率测定 将提取液过滤并定容至500 mL，从中精密量取10 mL 提取液至恒重的蒸发皿中，水浴浓缩至干，然后放入烘箱中于105℃干燥至恒重后称重。

出膏得率（%）=干膏重/药材重量×100%

1.3.5 二氢黄酮含量测定［16］

1.3.5.1 标准曲线的制备 精密称取花旗松素（二氢槲皮素）对照品10.17 mg，置50 mL 容量瓶中，加70%乙醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得二氢槲皮素对照品溶液。精密吸取0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4 mL 二氢槲皮素对照品溶液，分别置25 mL具塞比色管中，各加70%乙醇稀释至2 mL，加pH 6.6 的枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲液4 mL，混匀，再加2%四氢硼钠甲醇溶液3 mL，摇匀，放置20 min，再加浓盐酸3 mL，在50℃水浴上加热15 min，取出后放冷，加70% 乙醇至刻度，摇匀，放置30 min，以相应试剂作为空白，于紫外可见分光光度计290 nm 的波长处测定吸光度，以吸收度（Y）为纵坐标，浓度（X）为横坐标线性回归，得回归方程：Y=0.0618X-0.0036（R²=0.9994），二氢槲皮素在1.609～11.265 μg/mL 范围内与吸光度成良好的线性关系。

1.3.5.2 样品处理 将正交试验提取的样品摇匀后，分别取1 mL置25 mL容量瓶中，加水定容，摇匀为供试品溶液，待测。

1.3.5.3 样品测定 精密量取供试品溶液1 mL，置25 mL 具塞比色管中，用70% 乙醇稀释至2 mL，加pH 6.6 的枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲液4 mL，混匀，再加2% 四氢硼钠甲醇溶液3 mL，摇匀，放置20 min，再加浓盐酸3 mL，在50℃水浴上加热15 min，取出后放冷，加70 %乙醇至刻度，摇匀，放置30 min，同时精密量取1 mL 70% 乙醇溶液，同上操作，作为空白。紫外可见分光光度计290 nm波长处测定吸光度，根据公式计算样品中二氢黄酮含量。

式中：X为样品中二氢黄酮含量（g/100g）；C为由标准曲线求得被测液中二氢黄酮浓度（μg/mL）；M为样品质量（g）。

1.3.6 颗粒合格率测定 颗粒合格率是制粒、干燥、整粒后所得的合格颗粒比率：

颗粒成型率（%）=所得合格颗粒重量/所用药粉与辅料重量×100%

1.3.7 颗粒休止角测定 采用固定漏斗法：将3只漏斗串联并固定于水平放置的坐标纸上约3 cm高度处，将制得的颗粒沿漏斗倒入第一只漏斗中，直到最下面漏斗形成的药粉圆锥体尖端接触到漏斗口为止，这时颗粒形成一圆锥体堆，通过坐标纸测出圆锥底部的半径R，并测定其堆高H，根据tgα=H/R，计算得颗粒休止角α。

1.3.8 颗粒压缩松密度及振实密度测定

1.3.8.1 松密度测定 精密称取约30 g 颗粒通过短颈漏斗，缓慢沿漏斗壁倒入100 mL量筒中，使量筒中粉末表面铺平，不得振荡，读出其体积（V1），松密度=m/V1。

1.3.8.2 振实密度测定 将上述装有颗粒的量筒，由2 cm 高度自坠落台面上，反复操作100 次，量体积V0，继续上述操作30 次，量体积V2，当V0与V2相差小于2 mL 时，记录振实后的体积（V2），则振实密度=m/V2。

颗粒压缩度=（振实密度-松密度）/振实密度×100%

1.3.9 硬度测定 根据《中华人民共和国药典（2015 年版）》中的标准。取样品20 片，每片放入硬度仪中分别测量其硬度，计算平均值。

1.3.10 脆碎度测定 根据《中华人民共和国药典（2015 年版）》标准。取样品若干片，使其总重约为6.5 g，用吹风机吹去片剂脱落的粉末，精密称重，置圆筒中，转动100 次，取出吹去的粉末，精密称重，计算减失重量与样品原重量的比值。

1.3.11 崩解时限测定 根据《中华人民共和国药典（2015 年版）》标准，取藤茶保肝片剂6 片，将其分别置于洁净吊篮玻璃管中，每管各放1 片。将装有供试品的吊篮浸入温度为（37±1）℃的水中，启动崩解仪进行检查，直至样品完全崩解。记录每片样品崩解时间，计算平均值。

1.3.12 重量差异 取供试品20 片，精密称定总重量，求得平均片重后，再分别精密称定每片的重量，每片重量与平均片重进行比较。

2 结果

2.1 藤茶提取结果从出膏得率结果分析，各因素条件影响大小依次为提取次数＞提取时间＞料液比，从二氢黄酮含量结果分析各因素条件影响大小依次为提取次数＞料液比＞提取时间。A因素出膏得率和二氢黄酮含量各水平之间比较差异较小，为提高提取效率，节约生产成本，确定A因素试验水平为A1；B因素中出膏得率和二氢黄酮含量各水平比较差异较小，因此确定B因素试验水平为B1；C因素的出膏得率和二氢黄酮含量均为K3值最大，并且C因素对试验结果有显著影响，因此确定试验水平为C3。最后确定藤茶最终提取工艺为A1B1C3，即提取时间为0.5 h，料液比为1∶8，提取次数为3次。见表4—5。

表4 藤茶提取正交试验结果

2.2 茯苓、高良姜、绿豆提取结果最佳提取条件为A3B3C3，A 因素和B 因素对本试验结果影响不显著，但K1与K2之间差异较大，而K2与K3之间的差异不大；从生产周期、生产成本等多个实际因素综合考虑，确定提取时间和料液比的试验水平为A2、B2；C因素对出膏得率的K3值最大；提示C因素对试验结果有显著影响，因此确定试验水平为C3。最后确定3 味药材的最终提取工艺为A2B2C3，即提取时间1.0 h，料液比1∶6，提取次数3次。见表6—7。

表6 茯苓、高良姜、绿豆提取正交试验结果

2.3 制粒、压片成型试验颗粒指标测定结果，见表8。

表8 颗粒指标测定结果

表5 藤茶提取方差分析

表7 茯苓、高良姜、绿豆提取方差分析

从以上结果可以看出，用淀粉为辅料成型率较高，休止角最小，颗粒流动性最好，压缩度高，说明压片时的填充量大。综合可行性、成本考虑最终选择淀粉作为填充剂。

4% 淀粉浆为黏合剂的硬度、脆碎度虽不如其他黏合剂好，但在合格范围内，因其崩解时间短，故选择4%淀粉浆为黏合剂。见表9。

表9 不同黏合剂对素片硬度、脆碎度、崩解时限的影响

2.4 验证试验按照正交试验优选工艺进行3批验证试验，验证试验结果与正交试验结果基本一致，证明优选工艺合理、可行。所制得颗粒外形圆整，流动性好，大小均匀，松实适宜，压片后，素片表面光滑，色泽均匀一致，硬度好，平均脆碎度0.532%，符合产品技术要求，成型工艺可行。见表10。

表10 验证试验结果

3 讨论

将4 味药材一起提取，发现过滤过程中随温度降低部分物质析出，检测提取液中二氢黄酮含量较文献报道低，查阅文献发现，藤茶中主要黄酮类化合物为二氢杨梅素，其含量在幼叶中达40%［17］，二氢杨梅素在23℃水中溶解度为0.1876 g/100 mL，100℃中的溶解度为1.5050 g/100 mL［18］。提取时可利用二氢杨梅素在不同温度水中溶解度的差异，将藤茶与茯苓、绿豆、高良姜分开提取，解决了提取液中二氢黄酮含量低的问题。

保健食品一般为口服制剂，常见的如口服液、胶囊、颗粒、片、软胶囊、颗粒、粉等［19］。本产品初期设计剂型为咀嚼片，因藤茶有特殊苦味，添加不同矫味剂后口味仍较差，后选择口服素片，其优点如下：1）片剂携带、服用、运输和贮存方便；2）剂量准确，片剂内药物含量差异较小；3）质量稳定，片剂为干燥固体，光线、空气、水分等对其影响较小；4）机械化生产产量大，成本低，易达到卫生标准。

本研究通过正交设计优化试验得到藤茶保肝片的最优提取工艺，通过单因素试验确定了成型工艺配方，在该工艺下进行中试生产的藤茶保肝片各项指标均符合产品技术要求。后续将中试产品送至有资质的检测单位进行安全性和保健功能评价，取得报告后向国家市场监督管理总局进行申报。