2018-2019年上饶市串联质谱筛查新生儿遗传代谢病情况分析

杨 莹，苏小梅，潘淑娟

1.上饶市妇幼保健院产前诊断中心，江西上饶 334000;2.上饶市立医院检验科，江西上饶 334000

新生儿疾病筛查是指医疗保健机构在新生儿群体中，用快速、简便、敏感的检验方法，对一些危及儿童生命、危害儿童生长发育、导致儿童智能障碍的一些先天性、遗传性疾病进行群体检查[1]，以便对疾病尽早做出诊断，并进行有效治疗，从而保障儿童正常体格发育及智力发育。遗传代谢病主要因基因突变导致蛋白功能异常而引起的一系列代谢改变，导致受累代谢途径受阻，产物减少，底物蓄积，以及旁路代谢产物增加，从而导致代谢紊乱，影响多组织器官功能引发一系列的临床症状[2]。串联质谱(MS/MS)技术在新生儿遗传代谢病筛查中能在早期发现出生缺陷患儿，并及时予以有效治疗[3]。

2017年上饶市妇幼保健院引进了MS/MS筛查，在原有新生儿传统3项遗传代谢病的基础上开展MS/MS检测，极大地扩大了筛查的病种并提高了新生儿疾病筛查的效率。质谱分析技术因其高通量、高特异性、超敏性成为代谢病诊断的常规检验技术，作为新生儿筛查遗传代谢性疾病的有效手段被广泛应用[4]。

本研究对上饶市妇幼保健院新生儿筛查中心的15 207例新生儿进行了MS/MS遗传代谢病筛查，对阳性患儿的筛查结果进行分析，并对其临床诊断及治疗进行追踪和记录，探讨上饶市新生儿遗传代谢病的筛查状况。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2018年10月至2019年8月于上饶市妇幼保健院新生儿筛查中心进行MS/MS遗传代谢病筛查的新生儿15 207例。

1.2仪器与试剂 美国生物应用系统公司生产的API-3200MD型串联质谱仪，美国 PE公司生产的96孔过滤板(滤膜孔径0.45 μm)、96孔聚丙烯板；纯度为高效液相色谱级的乙酰氯、甲醇、正丁醇、乙腈等，纯度为99.99%的氮气。

1.3方法

1.3.1样品处理 采用API-3200MD型串联质谱仪对分娩的活产新生儿干血滤纸片标本进行分析检测。分布在干血滤纸片待测血斑处打孔，置于96孔聚丙烯板中，添加含同位素内标的工作液，覆板，45 ℃ 650～750 r/min振荡45 min，将反应后标本转移到V型底微孔板后覆盖装载到自动进样器中，使用适当的内标准品浓度值及采集方法，启动应用软件(Analyst MD Software)并创建工作列表进行MS/MS分析。

1.3.2定量分析 采用美国应用生物系统公司软件ChemoView1.2 版本进行换算分析，根据记录不同质荷比的离子质量谱，通过将待测样品峰面积与内标峰面积之比来获得定量结果。通过线性回归计算出所测样品各项指标的浓度。根据结果分析初筛阳性情况，明确MS/MS筛查的初筛阳性率及确诊阳性率，统计通过MS/MS筛查的新生儿遗传代谢病在上饶地区的总体发病率。

1.3.3可疑阳性的处理 由专业医生根据临床表现结合标本检测值进行分析。对初筛可疑阳性患儿进行原血液标本复查及召回复查，进一步加做尿液气相色谱分析及其他相关实验室检查。

1.4统计学处理 采用Excel电子表格统计数据，计数资料以例数或率表示。统计结果采用描述性分析。

2 结 果

2.1新生儿遗传代谢病筛查情况 15 207例新生儿中初筛可疑阳性360例，召回330例，未召回30例。初筛阳性率2.37%，召回复查后阳性29例，召回阳性率为8.79%，筛查阳性率为1.9‰，确诊了4例阳性患儿。阳性预测值为 1.2%。确诊病例为短链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症1例，中链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症1例，瓜氨酸血症Ⅱ型1例，原发性肉碱缺乏症1例。确诊阳性与临床最终诊断相比准确率为100%。筛查情况见表1。

表1 新生儿MS/MS筛查情况(n=15 207)

2.2遗传代谢病患儿的MS/MS筛查情况 本研究确诊的4例患儿中，短链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症患儿C4、C4/C2、C4/C3升高，中链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症患儿C6、C8、C10、C10∶1等多肉碱升高，瓜氨酸血症Ⅱ型患儿瓜氨酸、瓜氨酸/精氨酸升高，原发性肉碱缺乏症患儿C0降低。MS/MS筛查结果见表2。

表2 确诊的4例遗传代谢病患儿情况

2.34例阳性患儿基因诊断结果及随访情况 经过饮食、药物、酶替代治疗等方法及处理，4例患儿预后良好。4例阳性患儿具体基因诊断结果及随访情况见表3。

表3 4例患儿基因诊断结果及随访情况

续表3 4例患儿基因诊断结果及随访情况

3 讨 论

临床研究表明，遗传代谢病是因遗传因素导致机体正常代谢途径受阻，如氨基酸代谢病可致各种类氨基酸的异常，脂肪酸氧化代谢病可致血液中酰基肉碱指标异常，大量代谢产物在体内聚集或者发生必需代谢物缺乏可导致机体各组织器官发生不同程度受累并出现临床症状[5]。

短链酰基辅酶 A 脱氢酶缺乏症、中链酰基辅酶 A 脱氢酶缺乏症、瓜氨酸血症Ⅱ型及原发性肉碱缺乏症均为常染色体隐性遗传疾病。本研究中，基因诊断检测到短链酰基辅酶 A 脱氢酶缺乏症患儿发生ACAD8基因的纯合突变，可导致异丁酰辅酶A脱氢酶缺乏造成机体无法正常代谢缬氨酸；中链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症患儿ACADM基因外显子9存在c.715C>T(pArg239Cys)杂合错义突变，导致中链脂肪酸β氧化受阻导致代谢异常；瓜氨酸血症Ⅱ型患儿SLC25A13_ex9c.852_855delTATG(p.M285fs)基因有一纯合移码错义突变；原发性肉碱缺乏症患儿检测到SLC22A5基因的2个致病突变，分别为c.338G>A(pCys113Tyr)及c.1472C>G(pSer491Cys),已有相关文献报道该位点的致病性[6-7]。

短链酰基辅酶 A 脱氢酶缺乏症患儿主要表现在神经系统方面，发育迟缓是最常见的表现。MS/MS技术能够在无症状的情况下筛查出短链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症,因此其发病率较以前明显增加[8]。中链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症患儿中链脂肪酸β氧化受阻导致代谢异常，长期营养不良及感染性疾病为发病的常见诱因。早期发病患儿常表现为嗜睡、呕吐、急性发病时有典型低血糖症状。MS/MS技术可检测出无症状的中链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症新生儿血浆中升高的酰基肉碱，尤其是C8升高明显，为本病的特征。瓜氨酸血症Ⅱ型患儿为瓜氨酸血症Ⅱ型(成人发病型)/希特林缺乏症，临床表现为反复黄疸，肝功能受损，无明显呕吐、抽搐。原发性肉碱缺乏症患儿可表现为急性能量代谢障碍、心肌病及肝脏损害。近年研究显示，遗传代谢性病临床表现多样，可影响患儿全身各组织器官的生长发育[9]。既往由于检测方法的限制，一些遗传代谢病患儿不能得到及时确诊。MS/MS技术能够检测干血滤纸片中多种化合物的浓度，通过干血滤纸片一次检测，在短时间内检测出几十种遗传代谢疾病，为临床快速诊断提供技术支持，推动了遗传代谢病的筛查、诊断和治疗。MS/MS技术的应用能够对遗传代谢病进行早期筛查、早期诊断，可对阳性患儿及早干预，并且预后较好，特异性强，敏感度高，但其阳性预测值低，且筛查效率需要进一步提高[10]。

本研究结果显示，上饶市2018年10月至2019年8月筛查量为15 207例，确诊阳性4例，新生儿遗传代谢病的患病率为1/3 802。据统计，台湾地区新生儿遗传代谢病的发病率为1/6 219，上海新华医院筛查的发病率1/3 650，浙江省筛查的发病率1/5 626，国外同类报道的发病率为1/5 000～1/2 000[11]。可见上饶市发病率与上海地区相近，比浙江及台湾地区略高。虽然筛查率有了明显提升，但与本市实际分娩量相比，仍有很大部分新生儿未进行MS/MS筛查。另外，仍有部分召回阳性病例未能做进一步检测，部分遗传代谢病为急性发作，而间歇期筛查结果可能基本正常，或可导致漏诊[12]。

遗传代谢病虽然发病率低，但是危害极大，若不及时诊治，病死率及致残率极高。目前，随着MS/MS技术的广泛应用，临床上对遗传代谢病的筛查和诊断更加便捷，但对于有些疾病应结合相关生化测定、尿有机酸分析、酶学检查及分子生物学等技术做进一步诊断[13]。

综上所述，MS/MS技术在新生儿遗传性代谢病的筛查及早期诊断中具有重要的应用价值，对优生优育，提高人口素质具有积极意义。