小麦籽粒中呕吐毒素分布规律的研究

王 睿 沈跃丽 高 艳 陶维春

（淮安市粮油质量监测所，江苏淮安 223001）

脱氧雪腐镰刀菌烯醇（Deoxynivalenol，DON），简称呕吐毒素（Vomitoxin，VT），分子式为 C15H20O6，分子量296.3，属单端孢霉稀族化合物，具较强的热抗力和有耐压性、耐酸性、耐储藏性，主要污染小麦、大麦、燕麦、玉米等粮谷类[1-2]。小麦自杨花期开始，如遇上温暖、持续的阴雨天气，会导致毒素污染严重[3]。DON 虽然是目前已经发现的单端孢霉烯族毒性最弱的，但它对谷物的污染率最高，赤霉病大面积暴发时危害更重[3]。

DON 及其衍生物具有相当强的遗传和细胞毒性，对人、家畜的健康造成巨大的威胁。人中毒表现症状主要是头晕、呕吐、腹泻、中枢神经系统紊乱等，还可能会导致贫血、克山病等疾病发生，同时DON还具有致癌、致畸、致突等毒性[4-5]。GB 2761—2017《食品安全国家标准 食品中真菌毒素限量》规定谷物及制品、食品中DON 的含量不得超过1000 μg/kg。

1 材料与方法

1.1 样品采集

样品为农户正常种植、长势良好、扬花期按要求进行赤霉病防治，但在收割前1 周左右出现连续阴雨，导致赤霉病发作的小麦，共53 份。

1.2 仪器与设备

3310 型保水磨，波通公司；Y16 型磨粉机，土耳其YUCEBAS 公司；PL602-L 型电子天平，梅特勒公司；SHA-C 型恒温振荡器，金坛新航仪器厂；TDZ5-WS型离心机，湖南湘仪实验室仪器开发有限公司；LRH-70F 型生化培养箱，上海一恒科学仪器有限公司；MK3 型酶标仪，赛默飞世尔仪器有限公司。

1.3 试剂与材料

去离子水，符合GB/T 6682—2008 分析实验室用水规格和试验方法的一级水标准；DON 酶联免疫测试盒，江苏省苏微微生物研究有限公司，批号H030212A。

1.4 检测方法

1.4.1 分样

按GB/T 5491—1985《粮食、油料检验 扦样、分样法》的规定执行。

1.4.2 小麦制粉

取小麦1 kg 以上，清理杂质、混匀，其中500 g用Y16 型磨粉机制粉，得到面粉和麸皮；其余小麦用保水磨粉碎成全通40 目试验筛的样品。

1.4.3 样品前处理及检测

按GB 5009.111—2016《食品安全国家标准 食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其乙酰化衍生物的测定》酶联免疫吸附筛查法以及江苏省苏微微生物研究有限公司提供的说明书进行提取检测。

1.4.3.1 样品的前处理

称取5 g 样品置于50 mL 离心管中，加入25 mL去离子水，振荡15 min，然后用离心机选择4000 r/min离心5 min。吸上清液500μL 到2 mL 离心管中，再加入500 μL 试剂盒中呕吐毒素样品稀释液，混匀。

1.4.3.2 酶标仪检测

将试剂及微孔板放置室温30min 以上，取出微孔板，每孔加入250 μL 左右洗涤液，放置40 s，甩干，分别加入标准溶液和待测样液50 μL，再加入酶标物和抗试剂分别50 μL，轻轻震荡，25 ℃避光反应30 min。甩掉反应液，加入洗涤液洗涤5 次，每次间隔40 s，拍干，每孔分别加入底物液和显色液各50 μL，25 ℃避光 15 min，加入终止液 50 μL，酶标仪于450 nm 读取数值。

2 结果与讨论

按照1.4.2 的制粉方法，获得小麦3 种不同组分：小麦籽粒全粉、面粉和麸皮，小麦出粉率控制在60%～70%，平均出粉率为64.7%；采用1.4.3 的前处理方法和酶标仪检测方法检测出DON 含量，按照小麦籽粒全粉DON 含量的结果分成三组，第一组为≤1000 μg/kg，第二组为 1000～2000 μg/kg，第三组为＞2000 μg/kg，结果见表1—表3。

由表1—表3 可知，小麦制粉后，面粉DON 含量低于小麦籽粒，麸皮DON 含量高于小麦籽粒。说明DON 在小麦籽粒中皮层含量高，胚乳含量低。

表1 第一组小麦籽粒及不同组分DON 含量情况

表3 第三组小麦籽粒及不同组分DON 含量情况

由表1 可知，小麦籽粒DON 含量低于1000μg/kg时，面粉DON 含量为小麦籽粒的38.3%～89.1%，平均值为66.6 %；麸皮DON 含量为小麦籽粒的101.3%～257.0%，平均值为143.7%。

由表2可知，小麦籽粒DON含量1000～2000μg/kg时，面粉DON 含量为小麦籽粒的54.2%～89.7%，平均值为67.6%，麸皮中DON 含量为小麦籽粒的113.0%～183.0%，平均值为142.9%。

表2 第二组小麦籽粒及不同组分DON 含量情况

由表3 可知，小麦籽粒DON 含量高于2000μg/kg时，面粉DON 含量为小麦籽粒的65.4%～78.9%，平均值为72.7 %；麸皮DON 含量为小麦籽粒的129.1%～144.3%，平均值为139.0%。

由表1—表3 可知，随着小麦籽粒DON 含量的增加，制取的面粉DON 含量占比升高，麸皮DON 含量占比降低，说明小麦受DON 污染程度越重，小麦胚乳被DON 侵犯程度越高，小麦胚乳DON 含量增加更快。

53 份样品小麦籽粒和其加工后面粉DON 含量的关系如图1 所示，回归方程为：

图1 小麦籽粒和面粉的DON 含量关系

53 份样品小麦籽粒和和其加工后麸皮DON 含量的关系如图2 所示，回归方程为：

图2 小麦籽粒DON 含量和麸皮DON 含量的关系

由图1—图2 及两组回归方程分析可知，小麦籽粒的DON 含量越高，制得的面粉DON 含量和麸皮DON 含量也随之呈幂函数升高。

3 结论

通过对53 份小麦样品籽粒、面粉、麸皮的DON含量检测，发现小麦制粉后，面粉DON 含量比小麦籽粒DON 含量低，占小麦籽粒38.3%～89.7%，平均值为67.7%，麸皮DON 含量比小麦籽粒DON 含量高，占小麦籽粒101.3 %～257.0 %，平均值为142.9%。说明DON 在小麦籽粒中分布不是均衡的，皮层含量高，胚乳含量低。小麦籽粒和面粉DON 含量的关系回归方程为：y=0.3725x1.0835，R2=0.9084。

根据小麦DON 含量分组研究的结果显示：DON含量低于1000 μg/kg 小麦籽粒22 个样品，其DON含量面粉占小麦籽粒平均为66.6%，麸皮占小麦籽粒平均为 143.7%；DON 含量 1000～2000 μg/kg 小麦籽粒26 个样品，其DON 含量面粉占小麦籽粒平均为67.6%，麸皮占小麦籽粒平均为142.9%；DON含量高于2000 μg/kg 小麦籽粒5 个样品，其DON含量面粉占小麦籽粒平均为72.7%，麸皮占小麦籽粒平均为139.0%。说明小麦随DON 污染程度的增加，胚乳受DON 污染程度增加更大。