转录因子EZH2和RUNX3在骨巨细胞瘤中的表达及与复发的关系研究

李铁军，文华军，郑铁钢，张 朋，张正孟，王继孟

(中国人民解放军陆军第八十一集团军医院骨科，河北 张家口 075000)

骨巨细胞瘤由破骨细胞异常增殖、分化引起，是一种罕见良性肿瘤，但可能发展为向肺部转移的恶性肿瘤，局部侵袭及复发率较高[1]。骨巨细胞瘤早期缺乏典型性临床特征，随着患者病情发展，可表现为溶骨性骨破坏，或发生病理性骨折，临床治疗难度增大，临床首选治疗方法为手术刮除术，但术后局部复发率较高，约为10%～30%，对患者的生活质量造成严重影响[2]。zeste基因增强子同源物2(enhancer of zeste homolog 2，EZH2)是一种研究广泛的转录阻遏因子，具有高度保守性，可以通过核小体、染色体的修正及与其他转录因子相互影响起到调控转录的作用，EZH2在细胞核中呈现高表达往往导致抑癌基因表达沉默或降低，导致肿瘤持续恶化[3]。人类RUNT相关转录因子3(runt-related transcription factor 3，RUNX3)是RUNT家族的重要一员，是一种新型人类肿瘤抑制基因，与T细胞分化、背根神经节的发育及多种肿瘤密切相关，RUNX3启动子区域高频甲基化及半合子表达缺失时，RUNX3表达受到抑制，促进肿瘤的发生、发展[4]。转录因子EZH2和RUNX3与骨巨细胞瘤的关系尚不十分清楚，本研究就此展开。

1 资料与方法

1.1一般资料:选取本院2013年10月至2018年1月收治的53例骨巨细胞瘤患者为研究对象，患者均接受手术治疗，术中收集患者瘤组织以及瘤旁组织(距瘤组织>3cm)，年龄23～57岁，平均(38.25±10.11)岁，年龄≤40岁有37例，年龄>40岁有16例；其中男性33例，女性20例；肿瘤直径1～6cm，平均(3.56±0.73)cm，肿瘤直径≤3cm有9例，肿瘤直径>3cm有44例；根据影像学检查对肿瘤进行Campanacci分级[5]，其中Ⅰ级13例，Ⅱ级25例，Ⅲ级15例；根据病理学检查进行分级，Ⅰ级21例，Ⅱ级15例，Ⅲ级17例；根据是否存在组织浸润分为，是31例，否22例。纳入标准：①经病理学确诊为骨巨细胞瘤；②初次接受手术治疗者；③近3个月未进行放、化疗及药物治疗。排除标准：①合并其他恶性肿瘤者；②合并自身免疫系统疾病者；③因局部复发等原因入院治疗者；④临床资料不完整者。本研究经医院伦理委员会批准，所有研究对象均签署知情同意书。

1.2方 法

1.2.1EZH2、RUNX3表达检测:标本均为石蜡包埋，4μm厚度连续切片，采用免疫组织化学法检测瘤组织及瘤旁组织中EZH2和RUNX3表达，试剂盒均采购自武汉博士德生物工程有限公司。染色结果由两位有经验的病理科医生采用双盲法阅片，EZH2、RUNX3主要分布于细胞核内，镜下出现棕黄色颗粒的细胞即为阳性细胞，将标本置于高倍视野下(×200)，每张切片随机选取10个视野，每个视野内计数100个肿瘤细胞，根据细胞阳性率及染色程度的乘积计分。细胞阳性率计分标准：阳性率<5%计为0分，5%≤阳性率<25%计为1分，25%≤阳性率<50%计为2分，50%≤阳性率<75%计为3分；；阳性率≥75%计为4分。细胞染色程度计分标准：无色计为0分，淡黄色计为1分，黄色或棕黄色计为2分，棕褐色计为3分。细胞阳性率计分与染色程度计分的乘积为总分，总分<3分为阴性表达，总分≥3分为阳性表达[6]。

1.2.2随访:以术后第1天作为随访起点，采用电话或门诊方式进行随访，为期36个月，术后12个月内每三个月进行一次随访，术后24～36个月每六个月随访一次，以骨巨细胞瘤患者出现复发为终点事件，出现终点事件或随访期满则为随访终点(无失访)，随访期内出现复发者为复发组，否则为未复发组。

1.3统计学方法:采用SPSS22.0统计学软件处理数据。计数资料以率(%)表示，采用卡方检验；采用Spearman进行相关性分析。P<0.05，为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1瘤旁组织和瘤组织EZH2、RUNX3阳性表达率比较:与瘤旁组织相比，瘤组织中EZH2阳性表达率较高(P<0.05)，RUNX3阳性表达率较低(P<0.05)，见表1。免疫组织化学染色结果显示，瘤组织EZH2、RUNX3主要分布于细胞核内，镜下出现棕黄色颗粒的细胞为阳性细胞，如图1所示。

表1 瘤旁组织和瘤组织EZH2 RUNX3阳性表达率比较n(%)

2.2瘤组织EZH2、RUNX3表达与临床病理特征的关系:瘤组织EZH2、RUNX3表达与年龄、性别无关(P>0.05)，与肿瘤直径、影像学分级、病理学分级、组织浸润程度均有关(P<0.05)，见表2。

表2 瘤组织EZH2 RUNX3表达与临床病理特征关系n(%)

图1 瘤组织EZH2、RUNX3表达情况(免疫组织化学染色，200×)

2.3瘤组织EZH2、RUNX3表达相关性分析:骨巨细胞瘤瘤组织中EZH2、RUNX3表达呈负相关(r=-0.544，P<0.05)，见表3。

表3 瘤组织EZH2 RUNX3表达相关性分析

2.4EZH2、RUNX3表达与骨巨细胞瘤患者随访期内复发关系分析:与未复发组相比，复发组EZH2阳性表达率较高(P<0.05)，RUNX3阳性表达率较低(P<0.05)，见表4。

表4 未复发组和复发组EZH2 RUNX3阳性表达率比较n(%)

3 讨 论

EZH2是多梳蛋白家族的核心成员，定位于人染色体7q35～7q36区间上，是重要的核转录调控因子。EZH2可沉默基因表达及靶基因特定区域的组蛋白甲基化，导致靶基因转录失活，与食管癌的发展相关[7]。叶贝华等[8]研究发现，EZH2过表达与鼻咽癌远处转移及患者预后不良有关。本研究发现，与瘤旁组织相比，骨巨细胞瘤瘤组织EZH2阳性表达率较高，且与肿瘤直径、影像学分级、病理学分级、组织浸润程度及预后复发状况相关。提示EZH2可能参与骨巨细胞瘤的发生及病情发展，或可成为反映患者临床病情严重程度及预后评估的生物学指标，原因可能是高表达的EZH2对肿瘤抑制基因具有抑制作用，从而促进肿瘤的增殖、侵袭及转移等。

RUNX3是一种抑癌基因，定位于人染色体1p36.1区域，能够调控宫颈癌细胞的生长、迁移和侵袭[9]。孙建莉等[10]研究发现，胃癌组织中RUNX3阳性表达率较癌旁组织低，且与病理分期、浸润程度及淋巴结转移有关，在胃癌的发生、发展中扮演重要角色。乔莉等[11]研究认为，RUNX3基因与骨肉瘤存在必然的联系，其中RUNX3启动子甲基化不仅可抑制抑癌基因功能，同时其与骨肉瘤肿瘤血管也存在信号通路的调节关系，可作为治疗骨肉瘤的新靶向药物。本研究中，骨巨细胞瘤瘤组织RUNX3阳性表达率较瘤旁组织低，与患者肿瘤直径、影像学分级、病理学分级、组织浸润程度均有关。提示RUNX3可能与骨巨细胞瘤的发生及病情有关，RUNX3呈现低表达应可能与其启动子富含的胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤基序过度甲基化有关[12]。同时本研究发现，与未复发组相比，复发组RUNX3阳性表达率较低，提示RUNX3可能用于患者预后状况的评估。

Lian等[13]研究发现，喉癌患者中EZH2过表达，RUNX3表达缺失，EZH2可通过调节RUNX3的表达促进喉癌细胞增殖。本研究Spearman相关分析结果显示，骨巨细胞瘤瘤组织中EZH2、RUNX3表达呈负相关，原因可能是EZH2与RUNX3的启动子结合，通过催化H3组蛋白第27位赖氨酸三甲基化达到抑制基因表达的作用，使RUNX3低表达或缺失，从而调控肿瘤细胞的增殖、分化，表现为EZH2对RUNX3的表达存在抑制作用，促进肿瘤细胞增殖[14]。

综上所述，骨巨细胞瘤瘤组织中EZH2为高表达，RUNX3为低表达，均与患者肿瘤直径、影像学分级、病理学分级、组织浸润程度相关，两者呈负相关，可能成为骨巨细胞瘤的分子标志物，对病情及预后评估提供参考依据。本研究也存在一定的局限性，未对EZH2、RUNX3作用机制进行深入研究，在以后的工作中将围绕此重点展开。