不同剂量碘-131对甲状腺癌术后患者抑癌基因表达、甲状腺激素及染色体畸变的影响

杨志森, 耿 丽, 田贵金, 郝娜娜, 柳树凯, 张秀梅

(1. 河北省邯郸市第一医院 综合外科, 河北 邯郸, 056000;2. 华北医疗健康集团邯矿总院 内科, 河北 邯郸, 056000;3. 河北省邯郸市中心医院 神经内一科, 河北 邯郸, 056000;4. 河北省邯郸市临漳县医院 普外科, 河北 邯郸, 056000;5. 河北省邯郸市第一医院 耳鼻喉科, 河北 邯郸, 056000)

甲状腺癌(TC)是最常见的甲状腺恶性肿瘤，约占全身恶性肿瘤的1%[1]。目前, TC多采用以手术治疗为主，辅以术后内分泌治疗、碘-131(131I)治疗的综合治疗[2]。研究[3]证实,131I所发射的β粒子及γ射线具有强电离辐射作用，可有效清除残余甲状腺组织。然而,131I治疗作为一种放射疗法，会对患者机体造成较大影响，131I剂量选择仍存在较大争议。研究[4]显示，TC术后行131I治疗会对患者机体造成放射性损伤，且会干扰基因表达。目前，关于不同剂量131I治疗对TC术后患者放射性损伤及基因表达情况影响的报道较少。本研究回顾性分析不同剂量131I治疗对TC患者术后抑癌基因表达、甲状腺激素及染色体畸变的影响，现将结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性分析2018年1月—2020年5月120例TC术后首次行131I治疗患者的临床资料。纳入标准: ① 经术后病理活检确诊者; ② 无颈部淋巴结转移或远处转移者; ③ 术后首次行131I治疗者; ④ 临床资料完整者; ⑤ 患者及其家属知情。排除标准: ① 合并严重心、肝、肾功能障碍者; ②131I治疗不耐受者; ③ 合并其他恶性肿瘤者; ④ 术后接受其他治疗者; ⑤ 临床资料不完整者; ⑥ 妊娠、哺乳期及1年内有生育计划者; ⑦ 不愿参与本研究者; ⑧ 预计生存期<12个月者。根据131I治疗剂量不同分为低剂量组48例、中剂量组40例、高剂量组32例。3组患者一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05), 见表1。

表1 3组患者一般资料比较

1.2 方法

所有患者术后均接受X线、胸部CT、甲状腺超声扫描以及血常规、肝肾功能、甲状腺激素及甲状腺吸碘率测定等检查。131I治疗前3～4周停用左甲状腺素，并严格执行禁碘饮食，确保血清促甲状腺激素≥30 mU/L。服用131I前3 d, 连续口服泼尼松(天津天药药业股份有限公司，国药准字H12020689)10 mg/次, 3次/d, 连用10 d; 5 d后递减为10 mg/次, 2次/d, 预防放射性炎症所致水肿。

低剂量组空腹一次性口服131I(成都中核高通同位素股份有限公司，国药准字H10983120, 规格3 700 MBq) 1.85～2.22 GBq; 中剂量组空腹一次性口服131I 2.59～2.96 GBq; 高剂量组空腹一次性口服131I 3.33～3.70 GBq。131I治疗后2 h口服维生素C片(湖南九典制药股份有限公司，国药准字H43021720, 规格50 mg) 200 mg/次, 5～6次/d, 连用7 d。嘱患者每天多喝水，并坚持清水漱口。清除术后残留的甲状腺组织(清甲)后3～5 d口服左甲状腺素(Merck KGaA Darmstadt, 批准文号H20140052, 规格50 μg/片×100片)，初始剂量为25 μg/d, 逐渐调整为2.1 μg/kg, 直至血清促甲状腺激素维持在参考范围下限值水平，并继续保持低碘饮食。

1.3 观察指标

抑癌基因表达: 采集所有患者术中切除的TC组织标本，先行病理学检查确定组织性质，然后用生理盐水冲洗，晾干后于液氮中冷冻保存。取待检组织标本，参照RNA提取试剂盒说明书提取总RNA, 并反转录为cDNA, 以cDNA为模板行PCR扩增，扩增基因包括抑癌基因CCNG2、PTEN, 根据扩增曲线对CCNG2、PTEN基因的mRNA水平行半定量分析。取待检组织标本，滴加RI-PA裂解液后混匀，获得蛋白样本，根据免疫印迹法行Western-blot检测，抗体孵育后显影获取目的蛋白条带图，根据蛋白灰度值对CCNG2、PTEN基因的蛋白水平行半定量分析。

甲状腺激素: 分别于131I治疗前、治疗后6个月抽取5 mL空腹外周血, 3 000转/min离心处理10 min, 分离血清, -80 ℃冷存待检。采用电化学发光法检测待测血清样本中的促甲状腺激素(TSH)、游离三碘甲腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)水平，检测采用罗氏Cobas e601型全自动电化学发光免疫分析仪及配套试剂盒。

染色体畸变: 分别于131I治疗前、治疗后7 d、治疗后3个月、治疗后6个月采集空腹外周血淋巴细胞，肝素抗凝并置入培养基中, 37 ℃下培养48 h, 细胞收集前6 h滴加秋水仙素，制片，低倍镜下观察到每个视野中分布2～5个分裂相，高倍镜下观察到染色体分布均匀即可。每份标本观察1 000个中期分裂相，记录总畸变率和双着丝粒体及着丝粒环率。

1.4 统计学方法

2 结 果

2.1 3组患者抑癌基因表达比较

与低剂量组比较，中剂量组、高剂量组CCNG2、PTEN基因的mRNA、蛋白表达量均升高，差异有统计学意义(P<0.05), 但中剂量组与高剂量组差异无统计学意义(P>0.05), 见表2。

表2 3组患者抑癌基因表达比较

2.2 3组患者甲状腺激素水平变化比较

治疗前, 3组TSH、FT3、FT4水平比较，差异均无统计学意义(P>0.05); 治疗后, 3组TSH、FT3、FT4水平均较治疗前降低，且高剂量组最低，低剂量组最高，差异均有统计学意义(P<0.05), 见表3。

表3 3组患者甲状腺激素水平变化比较

2.3 3组患者染色体畸变情况比较

治疗前, 3组染色体总畸变率、双着丝粒体及着丝粒环率差异无统计学意义(P>0.05); 治疗后7 d, 3组染色体总畸变率、双着丝粒体及着丝粒环率均高于治疗前，差异有统计学意义(P<0.05); 治疗后3、6个月, 3组染色体总畸变率、双着丝粒体及着丝粒环率与治疗前比较，差异无统计学意义(P>0.05); 3组间比较差异亦无统计学意义(P>0.05)。见表4。

表4 3组患者染色体畸变情况比较 %

3 讨 论

TC是一类常见的内分泌系统恶性肿瘤，其中分化型TC(甲状腺乳头状癌和甲状腺滤泡癌)约占90%[5]。分化型TC具有分化程度高、隐匿灶多、转移灶摄碘能力强等特点，临床中多采用手术联合131I和甲状腺激素的方案治疗。手术切除原发病灶后,131I治疗可清除残留甲状腺组织，降低术后复发风险[6-7]。

胡永全等[8]研究表明,131I进入人体后可被正常甲状腺组织和TC组织摄取，从而使131I中的β粒子及γ射线发挥杀伤TC细胞的作用。既往研究[9]表明, TC患者术后行131I治疗的有效率可达90%以上，且131I剂量越大，杀伤癌细胞效果越明显。但131I剂量过大将导致周围腺体不同程度的损伤。因此, TC患者术后行131I治疗的剂量选择是临床讨论的热点[10]。

TC发生、进展过程中，癌细胞中的多种基因表达出现异常[11]。131I杀伤癌细胞主要依靠抑制促癌基因表达及促进抑癌基因表达实现。CCNG2、PTEN基因均与TC发生有关，二者所编码蛋白是调节细胞周期的重要因子。CCNG2可与透明带抗原(PPZA)结合成复合物抑制细胞周期进程，而PTEN可激活P13K/Akt信号通路，促使细胞周期停滞于G1期[12-13]。本研究应用3种不同剂量131I治疗TC术后患者，结果表明，中剂量组、高剂量组患者CCNG2、PTEN基因的mRNA及蛋白表达水平均高于低剂量组患者，提示不同剂量131I均可促进TC术后患者CCNG2、PTEN基因表达，中、高剂量131I效果相当且均较低剂量131I强。此外，经131I治疗6个月后, 3组患者的TSH、FT3、FT4水平均较治疗前降低，且131I剂量越高, TSH、FT3、FT4水平越低，说明不同剂量131I均具备清甲作用，且高剂量131I作用更为显著。

外周血淋巴细胞的染色体畸变率是评估机体放射性损伤的指标之一，其中又以双着丝粒体及着丝粒环率最为敏感[14]。本研究结果显示, 3组患者治疗前的染色体总畸变率、双着丝粒体及着丝粒环率均处在正常范围内;131I治疗后7 d, 3组患者的染色体总畸变率、双着丝粒体及着丝粒环率均升高，表明短期内(7 d)131I治疗会对机体造成点放射损伤，但131I治疗后3、6个月, 3组患者染色体总畸变率、双着丝粒体及着丝粒环率均恢复至正常范围，表明碘放射损伤致使染色体总畸变率、双着丝粒体及着丝粒环率升高是可逆的，且增大131I剂量并不会使患者染色体畸变率升高，分析原因可能是机体受131I治疗产生的染色体损伤有阈值以及本研究纳入样本较少。本研究认为，虽然TC患者术后接受不同剂量131I治疗未见染色体畸变率明显升高，但仍有必要定期检测染色体畸变情况，以对机体受辐射损伤程度进行评估。

综上所述，高剂量131I治疗TC术后患者可促进其抑癌基因表达，降低甲状腺激素水平，不会增高染色体畸变率，在患者耐受情况下可作为131I治疗的理想剂量。本研究局限在于样本量较少，仅比较了短期内抑癌基因表达、甲状腺激素水平及染色体畸变率变化，同时未评估不同剂量下的治疗反应，仍需大样本、长时间随访研究予以验证。