辅料砂仁、陈皮对熟地黄炮制前后化学成分的影响研究

陈青垚，王小平，雷 星，高亚珍，徐 杰，王梁凤，王 芳*，杨 明*

1.江西中医药大学 现代中药制剂教育部重点实验室，江西 南昌 330004

2.漳州卫生职业学院，福建 漳州 363000

熟地黄Rehmanniae Radix Praeparata（RRP）为玄参科地黄属植物地黄Rehmannia glutinosaLibosch.的炮制加工品。地黄Rehmanniae Radix（RR）炮制成熟地黄，其性味由甘、寒转为甘、微温，功能与主治由清热凉血、养阴生津转为补血滋阴、益精填髓[1]。《药品化义》：“因肝苦急，用甘缓之，兼主温胆，能益心血，更补肾水。凡内伤不足，苦志劳神，忧患伤血，纵欲耗精，调经胎产，皆宜用此”。因熟地黄味厚，质黏腻，而易碍胃助湿，《顾松园医镜·本草必用》：“熟者性滞，若痰多气郁之人，能窒碍胸膈”，现代研究亦表明，熟地黄易引起滋腻碍胃现象[2]。砂仁陈皮制地黄是江西建昌帮特色炮制品种，经砂仁Amomi Fructus（AF）、陈皮Citri Reticulatae Pericarpium（CRP）、黄酒制后，取砂仁、陈皮辛温香窜之气，疏地黄之滞，纠熟地滋腻碍脾之弊[3]。目前，辅料砂仁、陈皮对地黄内含化学成分的具体影响尚无研究报道。熟地黄主要的药理作用是调节免疫、影响血液系统功能，其药效活性物质主要包括环烯醚萜类、苯乙醇苷类及糖类等成分[4]。本实验采用HPLC法建立砂仁陈皮制熟地黄及不同缺辅料熟地黄炮制品图谱，运用化学模式识别手段分析不同炮制品之间的差异情况，并对其炮制前后主要药效活性物质环烯醚萜类、苯乙醇苷类及糖类成分进行含量测定，以期明确辅料砂仁、陈皮对熟地黄内含化学成分的具体影响，为阐明砂仁陈皮制熟地黄的炮制机制提供依据。

1 材料

LC-20ADXR型高效液相色谱仪、ELSD-LT II低温型蒸发光散射检测器，日本岛津公司；XSE205DR梅特勒电子天平，德国Mettler-Toledo公司；D24UV纯水超纯水一体化机，默克密理博公司；ZKF040型真空干燥箱，上海实验仪器厂有限公司。

生地黄（产地河南，批号191115）、砂仁（产地云南，批号180627）、陈皮（产地浙江，批号200801-2），均购自安徽益生源中药饮片科技有限公司，经江西中医药大学葛菲教授鉴定，分别为玄参科地黄属植物地黄Rehmannia glutinosa(Gaetn.) Libosch.ex Fisch.et Mey.的干燥块根、姜科豆蔻属植物阳春砂Amomum villosumLour.的干燥成熟果实、芸香科柑橘属植物橘Citrus reticulataBlanco的干燥成熟果皮。

对照品梓醇（批号MUST-14122411）、益母草苷（批号MUST-20052601）、地黄苷D（批号MUST-20101311）、5-羟甲基糠醛（批号MUST-20051202）、毛蕊花糖苷（批号MUST-13122711）、异类叶升麻苷（批号MUST-20103104）、橙皮苷（批号MUST-20031701）、蔗糖（批号MUST-13122601），葡萄糖（批号MUST-18032905）、D-果糖（批号MUST-13072803）、毛蕊花糖（批号MUST-20112705）购自成都曼思特生物科技有限公司；对照品水苏糖（批号PS020341）购自成都普思生物科技有限公司；对照品蜜二糖（批号505A023）购自北京索莱宝科技有限公司；对照品棉子糖（批号TA0423CA14）、甘露三糖（批号L29M6Y1）购自上海月旭科技有限公司；以上对照品质量分数均≥98%；乙腈为色谱级，美国Thermo Fisher Scientific公司；所用试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 地黄炮制品的制备

参照《建昌帮中药炮制技术》[5]，分别制备砂仁陈皮制熟地黄、砂仁陈皮制熟地黄（缺陈皮）、砂仁陈皮制熟地黄（缺砂仁）、砂仁陈皮制熟地黄（缺砂仁、陈皮）炮制品各10份，粉碎过三号筛，备用。

2.2 地黄样品特征图谱的建立

2.2.1 参照峰选择及混合对照品溶液配制 异类叶升麻苷是生、熟地黄中的主要有效成分之一，鉴于该色谱峰峰面积较稳定，故选择异类叶升麻苷作为参照峰；精密称取5-羟甲基糠醛、毛蕊花糖苷、异类叶升麻苷、橙皮苷对照品适量，加甲醇溶解制成质量浓度分别为5-羟甲基糠醛724.50 μg/mL、毛蕊花糖苷12.66 μg/mL、异类叶升麻苷18.43 μg/mL、橙皮苷29.46 μg/mL的混合对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备 分别精密称取不同熟地黄炮制品粉末2 g置于圆底烧瓶，精密量取50 mL甲醇，称定质量，加热1 h，冷却，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，离心，取上清液，蒸干，用甲醇定容至2 mL量瓶，临用前用0.45 μm的微孔滤膜滤过，即得[6]。

2.2.3 色谱条件 色谱柱为Inert Sustain C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液，梯度洗脱：0～15 min，3%～4%乙腈；15～45 min，4%～12%乙腈；45～60 min，12%～15%乙腈；60～80 min，15%～16%乙腈；80～120 min，16%～28%乙腈；进样量20 μL；柱温40 ℃；体积流量1 mL/min；检测波长283 nm。

2.2.4 精密度试验 精密称取砂仁陈皮制熟地黄粉末（S31），依“2.2.2”项方法制备供试品溶液，在“2.2.3”项色谱条件下连续进样6次，以参考峰的保留时间和峰面积为参照，计算共有峰的相对保留时间、相对峰面积RSD均小于1.4%，表明仪器精密度良好。

2.2.5 稳定性试验 精密称取砂仁陈皮制熟地黄粉末（S31），分别于制备后0、2、4、8、12、24 h，按“2.2.3”项色谱条件进样，以参考峰的保留时间和峰面积为参照，计算共有峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于1.9%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

2.2.6 重复性试验 精密称取同一份砂仁陈皮制熟地黄粉末（S31），按“2.2.2”项方法平行制备6个供试品溶液，在“2.2.3”项色谱条件下进样分析，以参考峰的保留时间和峰面积为参照，计算共有峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于1.7%，表明色谱条件重复性良好。

2.2.7 地黄样品测定 取5种地黄样品各10份，在“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.2.3”项下色谱条件进样，图谱结果见图1，并采用《中药指纹图谱相似度评价评价系统》（2012版）对所记录的图谱进行分析，分别各自生成了5种地黄样品对照图谱，识别了生地黄24个共有峰，砂仁陈皮制熟地黄23个共有峰、砂仁陈皮制熟地黄（缺陈皮）19个共有峰、砂仁陈皮制熟地黄（缺砂仁）22个共有峰、砂仁陈皮制熟地黄（缺砂仁、陈皮）24个共有峰，并且通过与混合对照品图谱（图2）比对指认其中的4个，分别是异类升麻苷、毛蕊花糖苷、异类叶升麻苷、橙皮苷，其保留时间分别为14.083、82.577、91.189、95.760 min。

图1 地黄样品图谱结果Fig.1 Atlas results of RR samples

图2 地黄不同炮制品对照图谱和混合对照品图谱Fig.2 Comparative atlas of different RR processed and mixed reference substances

2.3 化学模式识别分析

2.3.1 系统聚类分析（hierarchical clustering analysis，HCA） 以“2.2.7”项下50个地黄样品全谱峰面积为变量，采用SPSS 21.0分析软件，以组间平均数联接法及Pearson相关性分析方法进行系统聚类分析，结果见图3。结果显示，50个地黄样品可自然聚为3大类，生地黄为第1类（S41～S50），砂仁陈皮制熟地黄为第2类（S31～S40），砂仁陈皮制熟地黄（缺砂仁、陈皮）、砂仁陈皮制熟地黄（缺陈皮）、砂仁陈皮制熟地黄（缺砂仁）聚为第3类（S1～S30）。

图3 系统聚类分析图Fig.3 System cluster analysis diagram

2.3.2 主成分分析（principal component analysis，PCA） 运用SIMCA 14.1软件，以50个地黄样品（S1～S50）图谱的峰面积值作为变量，观察炮制品的聚集情况，见图4。PCA得分图结果与上述聚类分析结果相一致，表明不同炮制品在主成分空间的分布上有特定区域，进一步确定炮制品可明显归为3类。

图4 地黄不同炮制品PCA得分图Fig.4 PCA score maps of different processed products of RR

2.3.3 差异成分分析 为了进一步筛选引起砂仁陈皮制熟地黄炮制品质量特征差异的标志性成分，利用SIMCA 14.1软件对50个地黄样品（S1～S50）图谱的原始数据进行正交偏最小二乘-判别分析（orthogonal least squares-discriminant analysis，OPLS-DA），考虑到数据较多，以变量VIP＞1.4作为筛选标准，结果见图5。结果显示，有15个成分符合筛选条件，即这些成分是造成不同地黄炮制品质量差异的主要标志性物质，其中12、94、97号峰分别为5-羟甲基糠醛、异类叶升麻苷、橙皮苷。

图5 50个地黄样品全谱峰OPLS-DA模型VIP图Fig.5 VIP diagram of full-peak OPLS-DA model of 50 samples of RR

2.4 非糖类成分含量测定

2.4.1 非糖类成分对照品溶液的制备 取梓醇、益母草苷、地黄苷D、5-羟甲基糠醛、毛蕊花糖苷、橙皮苷、异类叶升麻苷适量，精密称定，加甲醇溶解制成质量浓度分别为梓醇0.297 mg/mL、益母草苷0.219 mg/mL、地黄苷D 0.161 mg/mL、5-羟甲基糠醛0.046 mg/mL、毛蕊花糖苷0.077 5 mg/mL、橙皮苷0.071 mg/mL、异类叶升麻苷0.044 mg/mL的混合对照品溶液。

2.4.2 供试品溶液的制备 取炮制品粉末0.5 g置于带塞锥形瓶中，精密量取50 mL甲醇，称定质量，置室温下冷浸12 h后超声1.5 h（功率250 W，频率40 kHz），冷却至室温，称定质量，用甲醇补足减失的质量，滤过，取续滤液25 mL，蒸干，残渣用15%甲醇溶解，定容至5 mL量瓶中，用0.45 μm微孔滤膜滤过，即得[7]。

2.4.3 色谱条件 色谱柱为Inert Sustain C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为乙腈-水，梯度洗脱：0～20 min，3%乙腈；20～40 min，3%～20%乙腈；40～60 min，20%～23%乙腈；进样量10 μL；柱温40 ℃；体积流量1 mL/min；梓醇、益母草苷、地黄苷D检测波长203 nm，5-羟甲基糠醛、毛蕊花糖苷、橙皮苷检测波长285 nm，异类叶升麻苷检测波长334 nm。

2.4.4 线性关系考察 依次量取“2.4.1”项下混合对照品溶液0.1、0.5、1.0、2.5、5.0 mL于5 mL量瓶内，加甲醇稀释至刻度，摇匀。按“2.4.3”项下色谱条件进样，记录峰面积，以进样质量浓度为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y）绘制标准曲线，进行线性回归，得到梓醇、益母草苷、地黄苷D、5-羟甲基糠醛、毛蕊花糖苷、橙皮苷、异类叶升麻苷的回归方程及其线性范围分别为梓醇Y＝13 582X＋340 912，r＝0.999 3，线性范围5.94～297.20 μg/mL；地黄苷DY＝2619X＋46 826，r＝0.999 7，线性范围4.40～220.00 μg/mL；益母草苷Y＝2156X－456.65，r＝0.999 0，线性范围3.22～161.00 μg/mL；5-羟基甲糠醛Y＝196 591X－168 236，r＝0.999 9，线性范围0.92～46.00 μg/mL；毛蕊花糖苷Y＝796 324X－2 856.2，r＝0.999 9，线性范围1.56～78.00 μg/mL；橙皮苷Y＝1 418 395X－7 438.1，r＝0.999 8，线性范围1.42～71.00 μg/mL；异类叶升麻苷Y＝582 792X＋1 289.8，r＝0.999 9，线性范围0.88～44.00 μg/mL。

2.4.5 精密度试验 取“2.4.1”项下对照品溶液，按“2.4.3”项下色谱条件连续进样6次，记录峰面积，计算梓醇、益母草苷、地黄苷D、5-羟甲基糠醛、毛蕊花糖苷、橙皮苷、异类叶升麻苷峰面积的RSD分别为0.41%、0.81%、0.76%、0.61%、0.86%、1.01%、0.79%，表明仪器精密度良好。

2.4.6 稳定性试验 精密称取砂仁陈皮制熟地黄粉末（S31），按“2.3.2”项方法制备供试品溶液，分别于室温下放置0、2、4、8、12、24 h，按“2.4.3”项下色谱条件进样，记录峰面积，计算益母草苷、地黄苷D、5-羟甲基糠醛、毛蕊花糖苷、橙皮苷、异类叶升麻苷峰面积RSD分别为1.66%、1.31%、0.67%、1.73%、2.00%、0.75%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.4.7 重复性试验 精密称取同一份砂仁陈皮制熟地黄粉末（S31）6份，按“2.4.2”项下平行制备供试品溶液，依“2.4.3”项色谱条件下进样，测定峰面积，计算益母草苷、地黄苷D、5-羟甲基糠醛、毛蕊花糖苷、橙皮苷、异类叶升麻苷平均质量分数分别为6.179、1.079、3.982、0.265、2.896、1.617 mg/g，RSD分别为1.21%、0.86%、0.89%、1.36%、1.20%、0.99%，表明色谱条件重复性良好。

2.4.8 加样回收率试验 精密称取已测定含量的砂仁陈皮制熟地黄粉末（S31）6份，分别加入“2.4.1”项下对照品溶液2.5 mL，按“2.4.2”项下制备供试品溶液，依“2.4.3”项色谱条件进样，测定各成分含量，计算梓醇、益母草苷、地黄苷D、5-羟甲基糠醛、毛蕊花糖苷、橙皮苷、异类叶升麻苷的平均加样回收率分别98.9%、99.4%、98.3%、99.7%、98.5%、99.9%、101.6%，RSD分别为0.91%、1.21%、0.86%、0.97%、1.04%、1.15%、0.99%。

2.4.9 样品含量测定结果 按“2.4.2”项方法制备供试品溶液，平行制备3份，依“2.4.3”项下色谱条件测定，结果见图6，记录各炮制品中测定成分的峰面积，含量计算结果见表1。

表1 地黄不同炮制品中非糖类成分的质量分数 ( , n = 3)Table 1 Mass fraction of non-sugar components in different processed products of RR ( , n = 3)

表1 地黄不同炮制品中非糖类成分的质量分数 ( , n = 3)Table 1 Mass fraction of non-sugar components in different processed products of RR ( , n = 3)

“-”表明响应值小无法积分，下表同“-” indicates that the response value is too small to integrate, same as following table

样品 质量分数/(mg·g-1)梓醇 地黄苷D 益母草苷 5-羟甲基糠醛 毛蕊花糖苷 橙皮苷 异类叶升麻苷生地黄 5.251±0.019 3.146±0.015 2.820±0.011 0.027±0.001 0.278±0.002 0 0.064±0.002砂仁陈皮制熟地黄（缺砂仁、陈皮） - 1.289±0.009 0.312±0.005 0.754±0.008 0.088±0.001 0 0.315±0.006砂仁陈皮制熟地黄（缺陈皮） - 1.109±0.008 0.213±0.002 0.570±0.003 0.059±0.001 0 0.194±0.002砂仁陈皮制熟地黄（缺砂仁） - 1.033±0.010 0.208±0.002 0.757±0.006 0.059±0.001 0.908±0.008 0.215±0.003砂仁陈皮制熟地黄 - 1.234±0.009 0.218±0.002 0.795±0.007 0.053±0.001 0.581±0.004 0.325±0.003

图6 地黄不同炮制品非糖类成分 (A) 及其混合对照品 (B) HPLC图Fig.6 HPLC map of non-sugar components of different processed products of RR (A) and its mixed reference substance (B)

2.5 糖类成分含量测定

2.5.1 糖类成分对照品溶液的制备 取D-果糖、葡萄糖、蔗糖、蜜二糖、棉子糖、甘露三糖、水苏糖、毛蕊花糖对照品适量，精密称定，水溶解制成质量浓度分别为D-果糖6.888 mg/mL、葡萄糖3.572 mg/mL、蔗糖3.704 mg/mL、蜜二糖9.638 mg/mL、棉子糖4.384 mg/mL、甘露三糖1.334 mg/mL、水苏糖1.299 mg/mL、毛蕊花糖2.012 mg/mL的混合对照品溶液。

2.5.2 供试品溶液的制备 分别取“2.1”项下5种炮制品粉末约1 g置于具塞锥形瓶中，精密称取60%甲醇溶液50 mL，超声45 min，滤过，吸取续滤液2 mL，用0.45 μm微孔滤膜滤过，即得。

2.5.3 色谱条件 Shodex Asahipak NH2P-50 4E色谱柱；流动相为乙腈-水溶液，梯度洗脱：0～10 min，75%乙腈；10～20 min，75%～65%乙腈；20～45 min，65%乙腈；进样量5 μL；柱温40 ℃；体积流量1 mL/min；ELSD参数：雾化温度40 ℃，氮气压力为350 Pa。

2.5.4 线性关系考察 分别吸取“2.5.1”项下混合对照品溶液0.25、1.00、2.00、4.00、5.00 mL置于5 mL量瓶中，定容，得系列混合对照品溶液，按“2.4.3”项下色谱条件测定，以糖类成分峰面积的自然对数为纵坐标（Y），糖类成分的质量的自然对数为横坐标（X）作图，进行线性回归方程计算，计算D-果糖、葡萄糖、蔗糖、蜜二糖、棉子糖、甘露三糖、水苏糖、毛蕊花糖回归方程及相关系数（r），结果分别为D-果糖Y＝1.138X＋4.660，r＝0.999 7，线性范围1.72～34.44 μg；葡萄糖Y＝1.282X＋3.872，r＝0.999 4，线性范围0.89～17.86 μg；蔗糖Y＝2.771X＋3.047，r＝0.999 2，线性范围0.93～18.52 μg；蜜二糖Y＝2.353X＋2.215，r＝0.999 3，线性范围2.41～48.19 μg；棉子糖Y＝2.078X＋3.658，r＝0.999 7，线性范围1.10～21.92 μg；甘露三糖Y＝1.727X＋4.153，r＝0.999 5，线性范围0.33～6.67 μg；水苏糖Y＝1.267X＋4.102，r＝0.999 9，线性范围3.25～65.00 μg；毛蕊花糖Y＝1.332X＋4.571，r＝0.999 1，线性范围0.50～10.06 μg。

2.5.5 精密度试验 取“2.5.1”项下对照品溶液，依“2.4.3”项色谱条件连续进样6次，测得D-果糖、葡萄糖、蔗糖、蜜二糖、棉子糖、甘露三糖、水苏糖、毛蕊花糖峰面积RSD分别为0.78%、1.01%、0.63%、0.44%、0.69%、0.93%、1.04%、0.77%，表明仪器精密度良好。

2.5.6 稳定性试验 精密称取生地黄粉末（S41），按“2.5.2”项下制备供试品溶液，在制备后0、2、4、8、12、24 h依“2.5.3”项色谱条件进样，测得D-果糖、葡萄糖、蔗糖、棉子糖、水苏糖、毛蕊花糖峰面积RSD分别为1.89%、1.24%、0.76%、0.86%、0.63%、0.93%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.5.7 重复性试验 精密称量同一份生地黄粉末（S41），平行制备6份，按“2.5.3”项下色谱方法进样，测得D-果糖、葡萄糖、蔗糖、棉子糖、水苏糖、毛蕊花糖平均质量分数分别为19.022、27.256、88.954、94.652、248.507、13.040 mg/g，RSD分别为1.01%、0.89%、0.95%、0.89%、1.43%、0.91%，表明重复性良好。

2.5.8 加样回收率试验 精密称取已测定含量的生地黄（S41）6份，分别加入“2.5.1”项下糖类对照品溶液3 mL，按“2.5.2”项下方法制备供试品溶液，依“2.5.3”项色谱条件进样，测定含量，计算D-果糖、葡萄糖、蔗糖、蜜二糖、棉子糖、甘露三糖、水苏糖、毛蕊花糖的平均加样回收率分别为98.8%、99.1%、97.0 %、100.5%、97.4%、99.4%、98.6%、101.5%，RSD值分别为1.24%、0.98%、1.36%、1.07%、0.95%、1.79%、0.99%、1.56%。

2.5.9 样品含量测定结果 糖类对照品溶液与供试品溶液分别按“2.5.3”项下色谱条件测定，结果见图7和表2。

表2 地黄不同炮制品中糖类成分的质量分数 ( , n = 3)Table 2 Mass fraction of sugars in different processed products of RR ( , n = 3)

表2 地黄不同炮制品中糖类成分的质量分数 ( , n = 3)Table 2 Mass fraction of sugars in different processed products of RR ( , n = 3)

样品质量分数/(mg·g-1)D-果糖 葡萄糖 蔗糖 蜜二糖 棉子糖 甘露三糖 水苏糖 毛蕊花糖生地黄 18.632±0.076 27.445±0.048 89.047±0.105 - 94.533±0.128 - 248.469±0.526 13.577±0.017砂仁陈皮制熟地黄（缺砂仁、陈皮） 127.543±0.187 76.141±0.081 - 82.561±0.119 - 40.752±0.048 - -砂仁陈皮制熟地黄（缺陈皮） 164.461±0.256 104.094±0.122 - 78.740±0.111 - 43.000±0.082 - -砂仁陈皮制熟地黄（缺砂仁） 177.172±0.401 119.037±0.309 - 80.448±0.088 - 51.096±0.089 - -砂仁陈皮制熟地黄 174.405±0.296 119.854±0.185 - 79.488±0.097 - 57.196±0.079 - -

图7 地黄不同炮制品糖类成分 (A) 和糖类对照品 (B) HPLC图谱Fig.7 HPLC map of sugars composition in different processed products of RR (A) and sugars reference substances (B)

3 讨论

3.1 地黄样品特征图谱分析

本研究采用HPLC色谱建立了生地黄、砂仁陈皮制熟地黄及不同缺辅料熟地黄炮制品图谱，经分析，5种炮制品可明显归为3类，即生地黄、砂仁陈皮制熟地黄与砂仁陈皮制熟地黄不同缺辅料熟地黄炮制品，可知生、熟地黄之间以及佐以砂仁、陈皮都使地黄在成分空间存在差异[8-9]。差异成分筛选结果显示，12（5-羟甲基糠醛）、94（异类叶升麻苷）、97（橙皮苷）号峰是引起地黄样品质量特征差异的主要成分，炮制后5-羟甲基糠醛大幅度产生，使熟地黄向温性转变[10]，异类叶升麻苷是补肾的重要成分[10-11]，橙皮苷是砂仁陈皮制熟地黄新增成分[12]，现代研究表明橙皮苷具有促进胃肠蠕动的功效[13]，预测砂仁、陈皮共炮制使砂仁陈皮制熟地黄更好地发挥益精填髓的功效，纠熟地滋腻碍脾之弊。剩余12个差异成分有待进一步研究。

3.2 地黄炮制前后非糖类成分的变化

炮制工艺与质量评价中，多注重成分炮制前后变化趋势[14-15]。上述实验结果表明，生地黄炮制后，苷类含量总体呈减少趋势，苷类成分受热酯键断裂，梓醇、益母草苷、地黄苷D、毛蕊花糖苷可分解出葡萄糖和相应苷元，异类叶升麻苷可分解出甘露吡喃糖、葡萄糖和相应苷元[10]，炮制后增加的葡萄糖、果糖与氨基酸易发生美拉德反应，使5-羟甲基糠醛成分含量升高，故炮制后地黄乌黑如漆[16]；砂仁陈皮制熟地黄中地黄苷D、异类叶升麻苷、益母草苷含量均高于砂仁陈皮制熟地黄（缺砂仁）、砂仁陈皮制熟地黄（缺陈皮），推测同时佐以砂仁、陈皮在一定程度缓解了地黄苷D、异类叶升麻苷、益母草苷的分解。

3.3 地黄炮制前后糖类成分的变化

糖类成分含测结果显示，炮制后糖类成分呈寡糖减少，单糖增加的趋势，且砂仁陈皮制熟地黄中D-果糖、葡萄糖、甘露三糖含量相较于砂仁陈皮制熟地黄（缺砂仁、缺陈皮）分别增加了29.24%、57.14%、44.65%，可知同时佐以砂仁、陈皮能有效促进低聚糖分解成单糖、增加新增成分甘露三糖的稳定性，实验数据显示砂仁陈皮制熟地黄（缺砂仁）中糖类成分的变化也尤为突出。炮制过程中，水苏糖主要分解为甘露三糖和D-果糖[17]，棉子糖可分解为蜜二糖和果糖或半乳糖和蔗糖，部分甘露三糖、蜜二糖可分解成半乳糖和葡萄糖[18]，蔗糖分解成葡萄糖和D-果糖[19]，由于人体缺乏消化酶α-D-半乳苷酶，而砂仁、陈皮的加入可使D-果糖、葡萄糖含量均升高，易于消化，改善了熟地黄滋腻之性，而单糖增加的变化趋势是否改变肠内固有的菌群代谢也值得后期深入研究[20]；现代药理研究表明果糖、葡萄糖具有为机体直接供给热能、补充体液及营养全身的补益功效[21]；蜜二糖、甘露三糖是生地黄炮制后新增成分，研究发现甘露三糖对体外小鼠骨髓细胞的增殖作用与对照组有显著性差异，表明甘露三糖是熟地增强免疫、造血、降血糖等活性的重要成分[22]。李时珍提出“盖地黄性泥得砂之香而窜，合和五脏冲和之气归缩丹田故也”，相较于清蒸地黄，炮制过程加入砂仁可提高血清胃泌素、血浆胃动素的含量，降低胃内容物残留率，有效消除大鼠滋腻碍胃的现象[2]，研究表明，陈皮能促进胃肠动力、胃排空、胃肠蠕动作用，与传统功效“理气宽中”相一致[23]。地黄同砂仁、陈皮共炮制时，香燥之性渗透至地黄内，缓解熟地滋腻之性[24]；上述研究发现辅料砂仁、陈皮是改变砂仁陈皮制熟地黄成分种类、成分含量的重要因素，为阐述砂仁陈皮制熟地黄的炮制机理奠定基础，后期将进一步研究砂仁、陈皮引起熟地黄成分变化对药效的影响[25]。

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