氯虫苯甲酰胺·噻虫胺颗粒剂高效液相色谱分析

2021-10-22王广成许艳秋陈丙坤谢树林高立明

农药科学与管理 2021年8期

王广成，许艳秋，陈丙坤，谢树林，高立明

(四川省农药检定所，四川成都 610041)

1 前言

氯虫苯甲酰胺是一种高效广谱的杀虫剂，对鳞翅目的夜蛾科、螟蛾科、蛀果蛾科、卷叶蛾科、粉蛾科、菜蛾科、麦蛾科、细蛾科等均有很好的控制效果[1-2]。噻虫胺是一类高效安全、高选择性的新型烟碱类杀虫剂，主要用于防治水稻、蔬菜、果树及其他作物上的蚜虫、叶蝉、蓟马、飞虱等半翅目、鞘翅目、双翅目和某些鳞翅目类害虫[3-4]。氯虫苯甲酰胺与噻虫胺的杀虫组合物具有扩大防治谱和增效的作用，并可以降低用药成本，用于防治鳞翅目、半翅目、膜翅目、鞘翅目等多种害虫。

有关氯虫苯甲酰胺的分析方法[5-7]和噻虫胺的分析方法[8-9]已有相关报道，但两者混配颗粒剂的分析方法目前还未见公开报道，本文采用高效液相色谱法对试样中的氯虫苯甲酰胺和噻虫胺同时进行分离和测定，该方法操作快速、简便，精密度和准确度均能满足定量分析要求，能适用于生产质量控制和相关分析的研究。

2 实验部分

2.1 试剂与溶液甲醇：色谱纯；水：一级水；磷酸：分析纯；氯虫苯甲酰胺标准品：(≥99.0%)；噻虫胺标准品：(≥99.0%)；1.5%氯虫苯甲酰胺·噻虫胺颗粒剂(其中氯虫苯甲酰胺含量0.3%、噻虫胺含1.2%)。

2.2 仪器高效液相色谱仪：Agilent 1260，具有DAD检测器和自动进样器；色谱柱：250mm×4.6mm(i.d.)不锈钢柱，內填ZORBAX SB-C18，5μm填充物；过滤器：滤膜孔径0.45μm。

2.3 液相色谱操作条件流动相：Ψ(甲醇+0.1%磷酸水溶液)梯度淋洗(表1)；流量1.0mL/min;柱温：(30±2)℃；检测波长：240nm；进样体积：5μL；保留时间：噻虫胺约为5.09min，氯虫苯甲酰胺约为10.95min。氯虫苯甲酰胺和噻虫胺的高效液相典型色谱图(图1～2)。

表1 梯度淋洗程序(VA+VB)

图1 氯虫苯甲酰胺·噻虫胺标样高效液相色谱图

图2 1.5%氯虫苯甲酰胺·噻虫胺颗粒剂高效液相色谱图

2.4 测定步骤

2.4.1 标样溶液的配制称取氯虫苯甲酰胺胺标样0.05g(精确至0.000 2g)和噻虫胺标样0.2g(精确至0.000 2g)于50.00mL容量瓶中，加入适量甲醇溶解，超声5min，恢复至室温后用甲醇稀释定容，摇匀，准确移取5.0mL于50.00mL容量瓶中，加入甲醇稀释定容，摇匀备用。

2.4.2 试样溶液的配制称取已研磨粉碎的试样2.0g(精确至0.000 2g)置于100mL具塞锥形瓶中，用移液管准确加入甲醇50.0mL，超声5min，恢复至室温后，用0.45μm滤膜过滤，滤液备用。

2.4.3 测定在上述操作条件下，待仪器稳定，基线平稳后，连续注入数针标样溶液，至相邻2针标样溶液的响应值相对变化<1.5%后，按照标样、试样、试样、标样溶液的顺序进行测定。

2.4.4 计算将测得的2针试样溶液以及试样前后2针标样溶液中氯虫苯甲酰胺(噻虫胺)的峰面积分别进行平均。试样中氯虫苯甲酰胺(噻虫胺)的质量分数ω按下式计算：

式中：A1—标样溶液中氯虫苯甲酰胺(噻虫胺)峰面积的平均值；

A2—试样溶液中氯虫苯甲酰胺(噻虫胺)峰面积的平均值；

m1—氯虫苯甲酰胺(噻虫胺)标样的质量，g；

m2—氯虫苯甲酰胺(噻虫胺)试样的质量，g；

ωs—标样中氯虫苯甲酰胺(噻虫胺)的质量分数，% ;

10—标样溶液稀释倍数。

3 结果与讨论

3.1 溶剂的选择根据2种待测物质的溶解度性质，选择甲醇作为溶剂。色谱柱使用常规的反相柱(ZORBAX SB-C18)。

3.2 检测波长的选择通过二极管阵列检测器，对氯虫苯甲酰胺标样和噻虫胺标样进行200～400nm范围内的吸收光谱扫描(图3)。由光谱信息可以得到，噻虫胺在270nm附近有最大吸收，氯虫苯甲酰胺在200nm以下有最大吸收，二者吸收光谱交叉点在240nm附近，为了减少干扰，同时结合噻虫胺与氯虫苯甲酰胺的含量差异，平衡二者峰型大小，故选择240nm作为本方法的检测波长。

图3 噻虫胺+氯虫苯甲酰胺紫外吸收曲线

3.3 流动相的选择在选择流动相时，先后选用甲醇与水系列，甲醇与磷酸水溶液系列作为流动相，对比纯水和0.1%磷酸水溶液作水相的峰形，最后选用甲醇与磷酸水溶液作为流动相系列；结合待测物质含量的差异及出峰时间的差距，通过调节流动相中有机相和水相的比例，选用梯度淋洗作为流动相分离条件，流速1.0mL/min时，氯虫苯甲酰胺和噻虫胺能得到有效分离，出峰时间适宜，峰形尖锐且对称。

3.4 分析方法的线性相关实验准确称取5份氯虫苯甲酰胺标准品(噻虫胺标准品)于5个50.00mL容量瓶中，加入适量甲醇溶解，超声5min，恢复至室温后用甲醇稀释定容，摇匀，分别准确移取5.00mL于50mL容量瓶中，甲醇定容，配制成5个不同浓度的标准溶液备用。按上述色谱操作条件进行分析，分别对氯虫苯甲酰胺(噻虫胺)的质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归分析，得到氯虫苯甲酰胺线性方程为Y=9 130.9X-5.955 9，线性相关系数R2为0.999 6；噻虫胺线性方程为Y=9 960.9X+275.67，线性相关系数R2为0.993 2(表2，图4～5)。

表2 分析方法的线性实验结果

图4 氯虫苯甲酰胺线性关系图

图5 噻虫胺线性关系图

3.5 分析方法精密度实验对同一样品中的氯虫苯甲酰胺和噻虫胺的质量分数进行6次平行测定，并进行标准偏差及变异系数的统计运算，同时运用Horwitz公式计算值作为精密度是否合格的判定依据(表3)。氯虫苯甲酰胺和噻虫胺标准偏差均分别为0.002和0.006，变异系数分别为0.53%和0.49%，本分析方法的变异系数小于Horwitz公式计算值，精密度符合要求。

表3 分析方法精密度实验结果

3.6 方法准确度实验按照配方比例，将除原药以外的所有助剂混匀，制成空白样品。准确称取6个一定量的空白试样，分别准确加入5.00mL氯虫苯甲酰胺标样溶液(1.129mg/mL、1.355mg/mL)和噻虫胺标样溶液(4.479mg/mL、3.583mg/mL)合成6个制剂样品溶液，按上述操作条件分别测定氯虫苯甲酰胺和噻虫胺的回收率(表4)。氯虫苯甲酰胺的平均回收率为99.69%，噻虫胺的平均回收率为100.08%。