抗酸染色后不同复染方法的比较

云洪岩，董 愉，李冰

（1佛山复星禅诚医院有限公司，佛山 528000；2中山大学附属第一医院病理科，广州 510080）

抗酸菌主要有结核杆菌和麻风杆菌，在组织切片上检出抗酸菌，对结核和麻风的病理诊断有重要意义。在常规HE染色难以确定患者是否有抗酸菌的感染，用抗酸染色可以清晰显示抗酸杆菌。为了更好的观察抗酸菌，需要进行复染将组织结构显示出来，以观察抗酸菌在组织中的定位。因此抗酸染色后复染剂的选择就尤为重要。常用的复染剂的有多种，各有优缺点。本文对常用复染剂Mayer氏苏木精、亚甲蓝、和亮绿进行比较，探讨哪一种复染剂更适合抗酸染色，更有利于抗酸菌的观察。

材料与方法

1 材料

收集本院病理诊断为结核或麻风的病例10例，连续石蜡切片5张，厚度均为3μm。

2 染色方法

5张切片同时行抗酸染色：切片脱蜡蒸馏水洗后，用苯酚碱性品红液染色20min，蒸馏水洗去染液，20%硫酸液分化，流水冲水后分别用Mayer氏苏木素、亚甲蓝和亮绿进行复染，复染时间分别为40~60s、1~2s和 1~2s。

结 果

抗酸菌呈红色，胞核及背景根据不同复染试剂呈不同颜色。复染Mayer氏苏木精细胞核呈蓝色，没有背景染色；复染亚甲蓝染色细胞核呈蓝色，背景呈深浅不一的蓝色；复染甲基绿细胞核呈绿色，没有背景染色（表1，图1）。

图1 3种复染试剂染色结果比较。 A，结核杆菌红色，细胞核蓝色，复染苏木精；比例尺，50µm。B，麻风杆菌红色，细胞核蓝色，复染苏木精；比例尺，200µm。C，结核杆菌红色，细胞核绿色，复染甲基绿；比例尺，200µm。D和E，结核杆菌红色，细胞核和背景呈不同蓝色，复染亚甲蓝；比例尺，200µmFig. 1 Comparison of the staining results with three counter-staining reagents. A, counter-staining with hematoxylin, TB bacilli were stained in red,nuclei in blue; scale bar, 50µm; B, counter-staining with hematoxylin, leprosy bacilli were stained in red, nuclei in blue; scale bar, 200µm. C, counter-staining with methyl green, TB bacilli were stained in red, nuclei in green; scale bar, 200µm. D and E, counter-staining with methylene blue, TB bacilli were stained in red, nuclei and background in deep or light blue; scale bar, 200µm

表1 抗酸染色后不同复染试剂染色效果比较Tab.1 Comparison of the staining effect of different counter-staining reagents after acid-fast staining

讨 论

苯酚碱性品红染色法是检测结核杆菌和麻风杆菌的经典方法。苯酚碱性品红将结核杆菌和麻风杆菌染成红色，一旦着染后可以抵抗酸的脱色作用，因此称为抗酸菌[1]。结核杆菌多见于结核性干酪样坏死灶，它主要侵犯肺、淋巴结和肾脏。麻风杆菌主要侵犯皮肤、黏膜和外周神经，在泡沫细胞（麻风细胞）内可见到大量麻风杆菌。抗酸染色将抗酸

菌染成红色后，还需要进行复染，将组织结构显示出来，使抗酸菌与背景对比清晰，可更好的观察到抗酸菌在组织中的定位，如在干酪样坏死灶可见结核杆菌，在泡沫细胞（麻风细胞）内可见到大量麻风杆菌。特殊染色后进行复染主要分为细胞核复染和背景复染，用于细胞核复染的试剂主要是呈蓝色的苏木精、呈红色的核固红和呈绿色的甲基绿；复染背景的试剂主要是呈蓝色的亚甲蓝，呈红色的曙红和呈绿色的光绿。细胞核复染可以清晰看到细胞核，对抗酸菌的定位较好，易于分辨抗酸菌定位在细胞浆还是细胞外。苏木精复染细胞核后细胞核呈蓝色，与红色的抗酸菌对比清晰，苏木精是常规HE染色中常用染料，容易获得，不容易褪色。甲基绿复染细胞核后细胞核呈蓝色，与红色的抗酸菌对比清晰，但甲基绿比较容易褪色，不能长时间保存，而且甲基绿配制较繁琐。核固红由于将细胞核染成红色，与红色的抗酸菌对比不佳。亚甲蓝复染细胞核和背景呈不同蓝色，与红色的抗酸菌红蓝对比清晰，但是亚甲蓝复染不容易掌握，如果染色时间过长，整个背景的蓝色较深，会遮盖红色的抗酸菌，使抗酸菌不容易观察，因此在复染亚甲蓝时要浅染，并在镜下观察复染效果，将细胞核染成蓝色，背景为浅蓝色，使红色的抗酸菌在浅蓝色的背景下容易观察到，但亚甲蓝较苏木精更容易褪色。 综所上述，抗酸染色后，用苏木精复染细胞核最好，最有利于病理医生观察抗酸菌。