市售5种消毒剂对舍饲鸭场的杀菌效果评价

尹锶瑶，吴伯梅，鲜思美,2*,包涛涛，3，杨 倩，张 友，顾庆林，梁 倩，龙婷婷，周 飘，李召仁

(1.贵州大学动物科学学院，贵阳 550025；2.贵州省动物疫病研究所，贵阳 550025；3.贵州省黔东南州农业农村局，贵州黔东南 556000)

我国农业生产中，畜牧业占据重要地位，并逐渐由传统的散养转向集约化及规模化发展，但不可忽视的是其也带来了严峻的环境污染[1]。集约化养殖场排放的污染物中含有大量病原微生物、寄生虫和孳生蚊蝇，从而致使畜禽传染病和寄生虫病蔓延，最终严重危害人畜生命健康[2-3]。养鸭业作为我国畜牧业主要支柱之一，甚是如此，通过菌落总数的测定可以有效了解养殖场环境微生物情况。消毒能够清除或杀灭病原微生物，降低病原的感染和疫病的爆发，是预防疫病的重要措施[4-5]。为了解市场上现常用的消毒剂对养殖场的消毒效果，本试验通过对贵州省某舍饲鸭场空气、粪便、垫料、饮水进行菌落总数测定，并结合现有研究选用配制5种消毒剂[6]，对鸭场空气、漏缝地板、料槽、蛋框、运输车车轮和鸭蹼部皮肤进行现场消毒试验，采集消毒前后鸭场环境及鸭蹼部皮肤样本进行菌落总数测定，为养殖场制定消毒规程及防控细菌性疾病提供依据参考。

1 材料与方法

1.1 主要仪器与试剂 超净工作台(苏州金静净化设备科技有限公司)；冰箱(海尔集团)；高压蒸汽灭菌锅：LDZM-80L-II(上海申安医疗器械厂)；37 ℃恒温培养箱(德国BINDER公司)；胰蛋白胨、酵母粉、琼脂粉、磷酸氢二钾、卵磷脂、TWEEN-80、甘氨酸、硫代硫酸钠等试剂(北京TIANGEN公司)；聚维酮碘溶液、戊二醛癸甲溴铵溶液(河南后裔实业集团有限公司)；苯扎溴铵溶液(江西鹏创生物科技有限公司)；月苄三甲氯铵溶液(西乡长江动物药品有限责任公司)；复方戊二醛(英国考文垂化学药品有限公司)。中和剂和最小杀菌浓度的消毒剂参照吴伯梅[6]等文献配制(表1)

表1 中和剂和最小杀菌浓度的消毒剂Tab 1 Neutralizer and disinfectants with minimal bactericidal concentration

1.2 舍饲鸭场基本情况 该鸭场饲养模式为舍饲，品种为金定蛋鸭，主要为90日龄大小。共计10个舍饲大棚，每个舍饲大棚800～1200 m2，现存栏量共计4万多羽。每个舍饲大棚中，鸭的主要休息区及产蛋区占五分之四，铺设垫料，鸭的活动区占五分之一，为漏缝地板，水线高漏缝地板距离为30 cm左右。

1.3 舍饲鸭场环境微生物菌落的检测与分析 参照GB/T 18204.3-2013公共场所卫生检验方法，采用自然沉降法对鸭场空气进行采样。按梅花布点设置5个采样点，距离墙壁1 m以上，距地面1.2～1.5 m，避开通风处。于5个采样点分别放置2个营养琼脂平板，打开皿盖暴露5 min进行采样。将采集细菌后的营养琼脂平板置于37 ℃的恒温培养箱中培养48 h，菌落计数。

选择3个鸭存栏量最高的舍饲大棚，随机采集鸭棚前部、中部及后部鸭粪便各10份，每30份为一个样本。垫料采样同粪便。水样参照GB/T 5750.12-2006生活饮用水标准检验方法，对用一大棚的水箱进行采集与保存。

空气细菌总数参照张鹤平[7]介绍的奥氏公式 C=50000×每皿菌落数/(平皿面积×采样持续时间)进行统计。粪便、垫料及饮水细菌总数参照GB 4789.2-2016食品安全国家标准中的检测方法进行统计。

1.4 五种消毒剂对鸭场进行现场消毒试验

1.4.1 采样 参照GB/T 18204.3-2013公共场所卫生检验方法，对消毒前后的鸭场空气进行采样，按梅花布点设置5个采样点。每个采样点于消毒前放置2个营养琼脂平板采样5 min，利用鸭场自带的雾线进行4种消毒剂的喷雾消毒，消毒30 min后，放置2个营养琼脂平板采样5 min。将消毒前后的营养琼脂平板于实验室37 ℃的恒温培养箱中培养48 h，进行菌落总数测定。

参照DB11/T 1429-2017动物养殖场消毒效果评价规范，对消毒前后的漏缝地板、料槽、蛋框及运输车车轮进行采样。每处设置4个采样点，分别使用4种消毒剂进行喷洒消毒，采样面积取10×10 cm2，于消毒处理前后15 min进行采样。采样时用蘸取适量灭菌生理盐水的棉拭子在取样范围内横、竖各5次滚动涂抹取样，无菌操作放入装有含10 mL相应无菌中和剂的灭菌生理盐水试管中，塞紧试管，标记并记录。旋涡振荡混匀样品，做10倍系列倍比稀释，选择适宜稀释度，取0.5 mL混合液于灭菌平皿，作平行样，用倾注法倒入培养基，37 ℃ 培养48 h，计算样品平均菌落数。

遵循随机采样原则，抽取6只鸭，鸭左蹼皮肤使用无菌棉拭子均匀涂抹进行消毒前采样，鸭右蹼皮肤使用稀释后的聚维酮碘均匀涂抹，5 min后使用无菌棉拭子进行消毒后采样。

1.4.2 菌落总数统计 参照张鹤平[7]介绍的奥氏公式C=50000×每皿菌落数/(平皿面积×采样持续时间)，统计消毒前后空气中每立方米的细菌总数。参照GB 4789.2-2016食品安全国家标准食品微生物学检验，统计消毒前后菌落总数测定漏缝地板、料槽、蛋框、运输车车轮及鸭蹼部皮肤每平方米的细菌总数。

1.4.3 杀菌率的计算 参照DB11/T 1429-2017动物养殖场消毒效果评价规范，根据消毒前后样品平均菌落数计算杀菌率。杀菌率的计算公式为：杀菌率=(消毒前样本平均菌数-消毒后样本平均菌数)/消毒前样本平均菌数×100%。

2 结果与分析

2.1 鸭场空气、粪便、垫料及饮水中的菌落总数测定结果 对采集自鸭场环境中的空气、粪便、垫料及饮水的样本进行菌落总数测定，结果见表2。由表可知，舍饲鸭场空气菌落总数为3.79×104CFU/m3，超出NY/T 388-1999畜禽场环境质量标准规定数值(25000 CFU/m3)；粪便菌落总数为2.67×107CFU/g，超出GB18596-2001畜禽养殖业污染物排放标准规定数值(1.03×106CFU/g)；垫料菌落总数为3.7×106CFU/g，超出NY/T1167-2006畜禽场环境质量及卫生控制规范规定的清洁土壤数值(5×104CFU/g)；饮水菌落总数为12 CFU/mL，符合GB 5749-2006生活饮用水卫生标准(100 CFU/mL)。

表2 鸭场空气、粪便、垫料及饮水菌落总数测定结果Tab 2 The results of the determination of thetotal number of bacteria in the air, feces, paddingand drinking water of the duck farm

2.2 空气、漏缝地板、料槽、蛋框、运输车车轮消毒前后结果 消毒剂对鸭场空气漏缝地板、料槽、蛋框、运输车车轮消毒前后结果分别见表3，表4，表5，表6，表7。由表可知，鸭场空气菌落总数范围消毒前为(2.81～4.09)×104CFU/m3，消毒后为(2.47～2.94)×104CFU/m3，戊二醛癸甲溴铵对空气的杀菌率最高，为34.85%；鸭场漏缝地板菌落总数范围消毒前为(4.68～23.7)×109CFU/m2，消毒后为(0.203～2.37)×109CFU/m2，复方戊二醛对漏缝地板的杀菌率最高，为96.78%；鸭场料槽菌落总数范围消毒前为(6.02～34.2)×107CFU/m2，消毒后为(1.84～17.3)×107CFU/m2，戊二醛癸甲溴铵对料槽的杀菌率最高，为74.35%。鸭场蛋框菌落总数范围消毒前为(4.67～34.6)×104CFU/m2，消毒后为(2.5～6.47)×104CFU/m2，复方戊二醛对蛋框的杀菌率最高，为81.31%；鸭场运输车车轮菌落总数范围消毒前为(3.47～51.9)×104CFU/m2，消毒后为(0.43～11.53)×104CFU/m2，戊二醛癸甲溴铵对运输车车轮的杀菌率最高，为85.86%。

表3 空气消毒前后菌落计数Tab 3 Colony count before and after air disinfection

表4 漏缝地板消毒前后菌落计数Tab 4 Colony count before and after disinfection of slatted floor

表5 料槽消毒前后菌落计数Tab 5 Colony count before and after disinfection of feed trough

表6 蛋框消毒前后菌落计数Tab 6 Colony count before and afterdisinfection of egg box

表7 运输车车轮消毒前后菌落计数Tab 7 Colony count before and after disinfectionof transporter wheels

2.3 聚维酮碘对鸭蹼部皮肤消毒前后结果 通过聚维酮碘对鸭蹼部皮肤进行消毒，结果见表8。由表可知，鸭蹼部皮肤菌落总数消毒前为(1.49±1.76)×107CFU/m2，消毒后为(0.41±0.56)×107CFU/m2，聚维酮碘对鸭蹼部皮肤细菌杀菌率为72.45%。

表8 聚维酮碘对鸭蹼部皮肤消毒前后菌落计数Tab 8 Colony count of povidone iodine before andafter disinfection of the skin of duck webs

3 讨论与结论

舍饲鸭场空气菌落总数为3.79×104CFU/m3，超出NY/T 388-1999畜禽场环境质量标准规定数值(25000 CFU/m3)，王光锋[8]等研究中鸭场空气菌落总数为3921 CFU/m3，本研究与其相差近十倍，原因可能与粪便和垫料有关；粪便菌落总数为2.67×107CFU/g， 超出GB18596-2001畜禽养殖业污染物排放标准规定数值(1.03×106CFU/g)，可能是畜禽粪便含有大量微生物，且存活时间长导致[9]；垫料菌落总数为3.7×106CFU/g，超出了NY/T1167-2006畜禽场环境质量及卫生控制规范规定的清洁土壤数值(5×104CFU/g)，可能是垫料被鸭的粪尿污染，又未定时更换干燥洁净的垫料导致。陈亮[10]等指出鸭舍空气细菌与垫料细菌含量呈正相关，鸭粪便分解会使带有微生物的粉尘污染空气[11]，多种因素导致鸭场空气菌落总数严重超标。本研究结果表明，该舍饲鸭场存在大量超过国标菌落总数的安全隐患，环境污染问题十分严峻。

配制五种消毒剂对鸭场进行现场消毒的试验中，四种消毒剂对空气的消毒作用均不理想，按照GB27948-2011空气消毒剂卫生要求，消毒剂对空气中自然菌的杀菌率应≥90.0%，原因可能与消毒方法有关，国内学者谈书勤[12]等在关于空气消毒技术研究中提出了多种空气消毒的观点，生产中可考虑多种空气消毒的方法。臧一天[13]等研究表明喷雾消毒比人工消毒效果更好，该鸭场雾线消毒设施的老旧损坏可能也是原因之一。在对漏缝地板、料槽、蛋框、运输车车轮的消毒试验中，消毒后菌落标准偏差小，杀菌率高，消毒均匀且效果良好。其中复方戊二醛和戊二醛癸甲溴铵消毒效果较好，这两者都是戊二醛与季铵盐的一种复配。这种复配充分发挥两者的杀菌效果，能够有效地杀灭大肠埃希氏杆菌、链球菌、金黄色葡萄球菌[14]，而这些细菌则是引起几种鸭主要细菌病的病原菌[15～17]。生产中通过这种复配联合用药的方式，可使得消毒剂的消杀效率显著提升。聚维酮碘对鸭蹼部皮肤的消毒效果不理想。吴蕾[18]等研究中10%聚维酮碘溶液稀释至0.5%反应30 min杀菌率可达100%，本试验中聚维酮碘溶液作用时间仅为5 min，时间的不足可能导致杀菌效果不理想。周庆民[19]等试验表明pH、光线和储存方式等多种因素会影响聚维酮碘溶液的稳定性，本试验中的聚维酮碘溶液可能因保存不当表现出低的杀菌效果。在实际的养殖过程中，聚维酮碘亲和皮肤、黏膜且无毒性，可以外用对受伤、脱肛的鸭进行消毒处理后再进行治疗[20]。

消毒是疾病综合防治的一个重要环节，在规模化养殖环节中，消毒的效果通常还受消毒模式、消毒方式、消毒剂种类、消毒剂浓度及消毒时间等多种因素影响[21-23]。因此，在实际养殖过程中，应该始终秉持“预防为主，治疗为辅”的原则，根据养殖场自身情况，制定合适合理的消毒程序。对该鸭场来说，建议加强管理，定时更换干净的垫料，及时清理粪尿污物，使用有效消毒设施，选择合理消毒药物，轮换用药，定期消毒，预防细菌性疾病，保障动物及人员健康。