HPLC-RID法测定丙戊酸钠片的药物含量

于文萃，高毓涛

(1.辽宁地质工程职业学院，辽宁 丹东 118302；2.丹东市市场监管事务服务中心，辽宁 丹东 118002)

丙戊酸钠是广谱抗癫痫药，用于单纯或复杂失神发作、肌阵挛发作的单药或合并用药治疗，有时对复杂部分性发作也有一定疗效。因其分子结构中缺乏有效的共轭系统，导致其无特征的紫外吸收峰，因此，历版《中国药典》将电位滴定法作为其原料和制剂的含量测定方法。近年来，有人利用离子对试剂及紫外末端吸收波长的高效液相色谱法测定其含量，也有用气相色谱法测定其含量，丰富了丙戊酸钠含量测定的检测方法，为丙戊酸钠的鉴别、含量测定和质量控制提供了多种方法选择[1-3]。但其样品的前处理有的需要二次稀释，有的需要添加内标物；而流动相的配置有的需要添加离子对试剂，有的需要进行pH值调节，操作起来稍显繁琐。本课题利用示差折光检测器RID，建立了HPLC-RID测定丙戊酸钠片含量的方法，采用甲醇-水为流动相，结果表明，该方法取样量少、简便、快速、准确、重现性好。

1 仪器与试药

1.1 仪器 岛津LC-20A高效液相色谱系统，岛津RID-10A检测器，岛津Labsolution 色谱工作站。

1.2 试药 丙戊酸钠对照品(购自中国药品生物制品检定研究院，批号：100963-201803，含量99.8%)，丙戊酸钠片(每片含丙戊酸钠0.2 g)为市售，水为纯化水，甲醇为色谱纯。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的制备

精密称取丙戊酸钠对照品适量，加流动相溶解并稀释制成每1 mL约含2 mg丙戊酸钠的溶液。

2.2 供试品溶液的制备

取市售丙戊酸钠片10片，除去糖衣，研细，精密称取适量(约含丙戊酸钠200 mg)，置100 mL量瓶中，加流动相适量使其溶解并稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液即得。

2.3 色谱条件及系统适用性试验

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-水(40∶60)为流动相；柱温30 ℃，进样量20 μL，流速为1.0 mL/min，检测器为岛津RID-10A，检测池温度为30 ℃。对照品及供试品色谱图(见图1、图2)。在该色谱条件下，理论塔板数按丙戊酸钠峰计算均不低于2 000。

2.4 方法学考察

2.4.1 线性范围

精密称取丙戊酸钠对照品203.20 mg，置于10 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，作为对照品储备液。取上述溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL分别置于10 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，制得对照品系列溶液。按上述色谱条件进样测定，以峰面积为纵坐标(Y)、质量浓度为横坐标(X)，绘制标准曲线，经回归分析发现：丙戊酸钠的质量浓度在1.014～5.070 mg/mL范围内有良好的线性关系，回归方程为:Y=1.690×105X-1.046×105，r=0.999 3。

2.4.2 精密度试验

精密吸取同一对照品溶液20 μL，重复进样6次，记录色谱图，丙戊酸钠峰面积的相对标准偏差Drs为0.3%(n=6)。

2.4.3 稳定性试验

精密称取丙戊酸钠片细粉，按“2.2”节的方法制备，分别于0、2.0、4.0、8.0、12.0、16.0、24.0 h测定，记录色谱图，丙戊酸钠峰面积的相对标准偏差Drs为0.4%(n=7)。

2.4.4 重复性试验

精密称取同一批丙戊酸钠片细粉，按“2.2”节的方法制备，按“2.3”节的色谱条件进行测定，记录色谱图，丙戊酸钠峰面积的相对标准偏差Drs为0.3%(n=6)。

2.4.5 检测限和定量限

精密称取丙戊酸钠对照品溶液用流动相定量稀释，以信噪比(S/N)为3∶1测定检测限，结果丙戊酸钠的检测限为15.13 μg/mL。以信噪比(S/N)为10∶1测定定量限，结果丙戊酸钠的定量限为41.07 μg/mL。

2.4.6 加样回收率试验

精密称取已知含量(丙戊酸钠98.7%)丙戊酸钠片(批号：190802)的细粉(约含丙戊酸钠100 mg)9份，置10 mL量瓶中，加流动相适量使溶解并定量稀释至刻度，摇匀，滤过；精密量取续滤液1 mL，置10 mL量瓶中，加入含丙戊酸钠2.010 2 mg/mL的对照品溶液4.0、5.0、6.0 mL各3份，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得加样回收样品液。按上述色谱条件测定，丙戊酸钠的平均回收率为99.0%，相对标准偏差Drs为1.7%(n=9)(见表1)。

表1 丙戊酸钠回收率测定结果(n=9)

2.5 结果

取2个厂家3个批次的供试药品按“2. 2”节的方法制备供试品溶液。在上述色谱条件下，精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，以外标法按峰面积计算含量，结果见表2。

表2 样品测定结果(百分标示量，n=3)

3 讨论

3.1 方法的选择

丙戊酸钠是一种有机酸丙戊酸的钠盐，分子结构中无共轭体系，常规的紫外检测器无法检测。参考相关文献[4-6]，选用HPLC-RID法进行测定。结果表明，通用型检测器示差折光检测器适用于像丙戊酸钠这类无紫外吸收的化合物药品的检测。与现行《中国药典》[7]电位滴定的方法比较，专属性更强，精密度更高。与其他含量测定方法比较，具有操作简便、快速、准确等优点。

3.2 色谱条件的选择

试验中同时考察了乙腈-水、甲醇-磷酸二氢钾(磷酸调节pH值)、甲醇-水流动相系统，结果以甲醇-水系统为流动相时，峰型和分离效果最佳。通过优化，最终确定以甲醇-水(40∶60)为流动相，流速1.0 mL/min。同时考察不同品牌的色谱柱，分离的重现性良好。