10个白色金针菇菌株工厂化栽培试验
2021-10-15窦宏强程调娟
王 雷 刘 晖 窦宏强 程调娟 袁 斌
（天水众兴菌业科技股份有限公司，甘肃 天水 741000）
金针菇（Flammulina filiformis）又名构菌、冬菇、毛柄金钱菌，隶属于泡头菌科（Physalacriaceae），冬菇属（Flammulina）[1-2]，是我国栽培的主要食用菌之一，也是工厂化栽培数量较大的品种。目前工厂化栽培的金针菇主要为白色品种。为了选育出较优的工厂化白色金针菇品种，我们对收集到的10个菌株进行了比较试验。
1 材料与方法
1.1 供试菌株
10个供试菌株均为白色金针菇，其中，白色13来自河南，白色Q1、白色Q2、白色5号来自山东，J08来自江苏，白色428来自上海，07-3、07-5、07-A、07-11为天水众兴菌业保藏菌种。
1.2 供试培养基
母种培养基：使用日本寒天培养基制作母种试管和平板培养基。液体摇瓶培养基配方：豆粕粉2.11 g，白砂糖12.8 g，KH2PO40.42 g，MgSO40.42 g，水600 mL，pH 6.3～7.3。
栽培料配方：玉米芯37%，米糠30.5%，麸皮10%，棉籽壳6%，大豆皮5.5%，啤酒糟6.5%，甜菜渣2%，贝壳粉2%，碳酸钙0.5%，含水量67%。
1.3 试验方法
1.3.1 供试菌株菌丝生长特性测试
从母种试管中挖取直径为4 mm供试菌株菌块转接至日本寒天平板培养基上，置于19 ℃恒温培养箱中避光培养，试验重复3次。菌丝萌发后第3天，在培养皿底部菌块中心划两条十字交叉线，继续培养至菌落边缘距培养皿边缘约1 cm时，测算菌丝日均生长速度并观察菌丝长势。
1.3.2 ITS rRNA 基因序列及菌株系统发育分析
供试菌株由生工生物工程（上海）股份有限公司进行ITS rRNA基因测序。获得的序列在NCBI（National Center for Biotechnology Infor- mation）与 GenBank（www.ncbi.nml.nih.gov）数据库中以BLAST搜索，获得其他金针菇序列，在CLUSTAL X1.8程序进行比较。使用neighbor-joining method计算进化距离，在MEGA 6.0软件中用p-distances和Kimura-2parameter双参数法构建系统发育树，并用bootstrap检验进化树分支聚类的置信度，重复1 000次[3]。
1.3.3 供试菌株栽培料试验
按照工厂化瓶栽模式，采用1 500 mL聚丙烯瓶装料，瓶口内径84 mm，每瓶湿料重1 060 g，干料重349.8 g。采用液体菌种接种，每个菌株接种16瓶，重复3次。接种后放置于培养温度16～17 ℃，空气相对湿度75%的环境下避光养菌。19天菌丝长满，21天利用机器搔菌并注水8 mL后送至出菇室进行出菇管理。
按照常规工厂化调控方法进行培育，经过菌丝恢复期、现蕾期、低温抑制期，菇蕾长出后包胶片。待子实体长度达15～16 cm时采收，统计平均单瓶产量和生物转化率，并评价子实体品质，包括菇帽大小、干爽度、根切面白度、菇形紧实度、菇柄硬度等，统计优等菇比率。优等菇标准为菇帽直径5～8 mm，菇体干爽、根切面白皙，菇形紧实。
2 结果与分析
2.1 不同菌株的菌丝生长特性
由表1可知，10个白色金针菇菌株在日本寒天培养基平板上的菌丝生长速度相近，其中白色5号日均生长速度最快，为3.81 mm；J08长速慢，为3.28 mm。菌丝长势较弱的是白色Q1和07-5。
表1 10个白色金针菇菌株菌丝生长表现
2.2 10个菌株的系统发育分析
将10个菌株的ITS rRNA基因序列提交到NCBI，通过Blast工具在GenBank数据库中进行相似性比较，选取相似性在99%以上的菌株构建系统发育树（图1）。结果显示，10个菌株可以归于两类，其中07-11、白色Q2、白色28、白色Q1、白色13、07-A、07-5之间的亲缘关系非常近，位于同一个进化枝；其他3个菌株07-3、J08和白色5号的亲缘关系最近，说明具有较高的同源性。而这10株菌株和标准菌株位于不同的两枝，亲缘关系稍远。
图1 11个菌株（含1个标准菌株）基于ITS序列的系统发育树
2.3 不同菌株的出菇产量与品质
10个菌株生物转化率由高到低为：J08>白色Q2>白色Q1>白色5号>07-3>07-5>07-A>白色28>白色13>07-11（表2）。平均单瓶产量以菌株J08最高，为547.27g；以07-11最低，仅472.79 g。单瓶产量最高的是白色Q2，为570.53 g。
表2 10个白色金针菇菌株产量及生物转化率比较
优等菇率是反映金针菇菌株工厂化栽培商业属性的指标之一，考察菇帽、干爽度、根切面、菇形紧实度和菇柄的综合属性。10个菌株的优等菇率由高到低为：白色Q2>白色Q1>白色5号>白色13>07-A> 07-5>07-11>白色28>07-3>J08（表3），其中白色Q2优等菇率为78.9%，J08仅29.17%。菇体干爽度07-A和白色Q1最佳；菇根切面以白色13和07-5表现白净；菇形以07-A、白色Q1和白色5号表现紧实；菇柄硬度以白色Q2、白色Q1、07-A和07-5为好。
表3 10个白色金针菇菌株子实体品质比较
3 小结与讨论
试验结果表明，菌株白色Q2和白色Q1有着较高的生物转化率和优等菇率，符合工厂化栽培对菌株性状的要求，适合工厂化推广和栽培。J08虽然单产和生物转化率高，但子实体农艺性状欠佳，菇帽大，优等率较低。其他菌株表现一般。
本试验平板培养基菌丝的生长速度差异不大，但菌丝的长速和长势与单产并无直接关系。菌丝生长速度快的，单产和转化率不一定高，这与文献[4-6]的报道相一致。
通过ITS序列分析表明，虽然10个菌株来源地不同，但菌株间亲缘关系较近，平均单瓶产量、生物转化率和子实体外观品质表现一定差异。陆欢等[7]研究表明，我国市场上金针菇工厂化栽培菌株的亲缘关系较近，与本文研究结果相符。因此，我国金针菇优良菌种繁育工作任重而道远。
