高效液相色谱法测定牡丹皮中芍药苷含量的研究

程玉柱 夏运喜 徐友利 符俊峰 刘晓燕

摘要：采用高效液相色谱法测定牡丹皮中芍药苷的含量。方法：采用高效液相色谱法，C18柱（5μm，150mm×4.6mm），流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（15：85），流速1.0ml/min，柱温：30℃，检测波长230nm。结果：芍药苷在0.04197-0.2099mg/ml范围内线性关系良好（r=0.9996，n=5）;平均回收率为99.2%（n=6），RSD为1.04%。结论：本方法快速灵敏、准确可靠，可用于牡丹皮的质量控制。

关键词：牡丹皮;芍药苷;高效液相色谱法

牡丹皮为毛莨科植物牡丹Paeonia suffruticosa Andr.的根皮。具有清热凉血，活血化瘀之功效。用于热入营血，温毒发斑，吐血衄血，夜热早凉，无汗骨蒸，经闭痛经，跌扑伤痛，痈肿疮毒[1]。牡丹皮主要含丹皮酚类和芍药苷类成分[2]。芍药苷具有多种生物活性，对心血管、中枢神经系统免疫、以及平滑肌等方面均有肯定的药理作用[3]。在《中华人民共和国药典》2010版中对牡丹皮的含量测定只控制了丹皮酚指标，未对芍药苷进行控制。本研究采用高效液相色谱法测定牡丹皮中芍药苷的含量，为更加全面的控制牡丹皮质量提供了参考依据。

1仪器与试剂

高效液相色谱仪（日本岛津，SPD-20A），超声仪（昆山市超声仪器有限公司 ），电子天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司），电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）。牡丹皮饮片（盛海堂中药饮片有限公司），芍药苷对照品（中国食品药品检定研究，批号110736-201337）、甲醇（天津赛孚瑞科技有限公司），乙腈（Tedia Company， Inc.）、磷酸（上海苏懿化学试剂有限公司）。

2方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱：C18柱（5μm，150mm×4.6mm），流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（15：85），流速1.0ml/min，柱温：30℃，检测波长230nm，进样量20μl。在此色谱条件下，样品中芍药苷峰与其他非被检测成分峰能够达到分离。

2.2对照品溶液的制备

精密称取芍药苷对照品11.24mg，置于100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，对照品溶液的浓度为0.1079mg/ml。

2.3供试品溶液的制备

取牡丹皮粗粉（过60目筛）约0.5g，精密称定，置于50ml量瓶中，加甲醇约45ml，超声处理（功率500W，频率40Hz）30分钟，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4系统适用性试验

精密吸取芍药苷对照品溶液20μl，重复进样5次，测定芍药苷峰面积，RSD=0.87%。表明仪器精密度良好。

2.5线性关系考察

精密称取芍药苷对照品10.96mg，置于25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液的浓度为0.4197mg/ml，作为储备液。分别精密量取储备液1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml，分別置于10ml量瓶中，加甲醇并稀释至刻度，摇匀，即得浓度分别为0.04197mg/ml、0.08394mg/ml、0.1259mg/ml、0.1679mg/ml、0.2099mg/ml的溶液。分别进样20μl。以峰面积为纵坐标，以进样浓度为横坐标，进行线性回归（r=0.9996，n=5）。表明芍药苷在0.04197-0.2099mg/ml范围内呈良好的线性关系。

2.6重复性试验

取同一牡丹皮粗粉（过60目筛），分别制得供试品溶液6份，进样，计算含量，结果其RSD为1.32%，表明该方法具有良好的重复性。

2.7中间精密度试验

由另一检验员，在相同检验条件下，取同一牡丹皮粗粉（过60目筛），分别制得供试品溶液6份，进样，计算含量，结果其RSD为1.16%，表明该方法具有良好的中间精密度。

2.8稳定性试验

精密吸取同一供试品溶液，分别在0、4、8、12、18、24h进样，测定芍药苷峰面积，RSD=1.14%。表明供试品溶液在24内稳定性良好。

2.9准确度试验

取已测定含量的牡丹皮粗粉（过60目筛）约0.25g，共6份，精密称定，分别置于50ml量瓶中，各精密加入芍药苷对照品储备液（0.4197mg/ml）4ml，加甲醇适量，超声处理（功率500W，频率40Hz）30分钟，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，分别进样20μl，测定芍药苷含量，记录图谱，计算得平均回收率为99.2%，RSD为1.04%，结果见表1。

3讨论

在《中华人民共和国药典》2010版中对牡丹皮的含量测定只控制了丹皮酚指标，未对芍药苷进行控制，笔者认为未能全面客观地平均牡丹皮的质量。本研究采用高效液相色谱法测定牡丹皮中芍药苷的含量，进行了系统适用性、线性关系、重复性、中间精密度、稳定性、精密度试验，为更加全面的控制牡丹皮质量提供了参考依据。

参考文献：

[1]中国药典委员会.中华人民共和国药典一部[S]. 北京：中国医药科技出版社，2010;160-161.

[2]吴少华，马云保，罗晓东，等.丹皮的化学成分研究 [J]. 中药草，2002，33（8）：679-680.

[3]郑世存，李晓宇，欧阳兵，等.芍药苷药理研究新进展 [J]. 中国药物警戒，2012，09（2）：100-103.