延安产野生乌拉尔甘草品质鉴定

★ 曾云飞 李（.延安市中医药研究所 陕西 延安 76000；2.贵州医科大学药用植物功效与利用国家重点实验室 贵阳 55004；3.贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室/贵州省天然药物工程研究中心 贵阳 55004）

甘草为豆科（Leguminosae）蝶形花亚科（Papilionatae Taub.）甘草属（Glycyrrhiza）多年生草本植物，该属在全世界分布有29种6变种，我国约有18种3变种［1］。2005年版《中华人民共和国药典》收载的药用甘草，即乌拉尔甘草（Glycyrrhiza uralensisFisch）、胀 果 甘 草（Glycyrrhiza inflateBatal）和光果甘草（Glycyrrhiza glabraL.），药用器官为其根，别名：国老、甜草、乌拉尔甘草、甜根子等。甘草是一种补益中草药，味辛、甘，性温，归脾、胃经，气微，味甜而特殊，具有补中益气、清热解毒、祛痰止咳、缓急止痛、缓和药性等功效，功能主治清热解毒、祛痰止咳等。甘草分布在中国西北、东北、华北地区，是干旱半干旱荒漠地区优良生态先锋植物［2］。最新医学研究表明，甘草中的甘草酸具有抑制HIV［3］、SAS冠状病毒的作用［4］，甘草素和异甘草素有抗溃疡和解痉作用，能抑制单胺氧化酶，可治疗精神病［5-6］。除药用外，甘草还广泛用于畜牧业、食品、保健品、饮料、烟草、化妆品等工业领域中［7］。

我国对甘草的采集与药用已有四千多年的历史，《神农本草经》中将其列入上品，尔后历代本草皆有记载，素有“十方九草”“众药之王”的美誉。甘草为常用大宗药材，其药性平和，通行十二经脉［8］，目前市场上流通的商品甘草以乌拉尔甘草为主流品种［9］。西北地区为甘草的主产区，内蒙古中、西部及宁夏地区所产乌拉尔甘草品质最好，被称为“西草”。延安位于黄河中游，地处黄土高原，居陕西北部，面积为3.7万平方公里，海拔约800～1 200米，多数地区覆盖有深厚风成黄土。延安属暖温带，年平均气温为7 ℃～10℃，全区无霜期在150～170 d左右，年平均降水量100 mm，每平方厘米的太阳年辐射为90～140千卡，日照时数为1 400～2 900 h。陕北黄土高原区地域宽广，自然条件复杂，为各种植物的生存和多种植被类型的分布提供了优越的条件，植物和植被资源较为丰富，药用植物资源尤为突出［10］。延安的野生甘草质地优、粉质大，被誉为“陕北的国老盖三北”，但没有相关文献报道延安产乌拉尔甘草的品质。鉴于此，本实验以不同产地的乌拉尔甘草作为研究对象，采用高效液相色谱检测方法，对5个产地不同的甘草样品进行分析，并以此为依据判定不同产地甘草样品的优劣。本实验的结果将客观的判定陕北野生乌拉尔甘草的品质，为开发陕北药材提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 样品的采集 本实验所用甘草样品于2016年8月份采自陕西延安城北杨家岭山上，直径为2～3 mm，经延安市药材公司技术人员鉴定为乌拉尔甘草，其他不同产地的乌拉尔甘草样品均购自淘宝网。

1.2 试剂及仪器 Waters 2489高效液相色谱仪，Sartorius 1/10万电子天平，FA2204B上海精科万分之一电子天平。

甘草苷、甘草酸铵（成都标准品有限公司，纯度＞98%，＞98%，批号分别为140723、141109）；色谱纯甲醇，色谱纯乙腈，超纯水，其他试剂均为分析纯。

1.3 测定方法 以甘草酸铵、甘草苷为评价指标，色谱条件和测定方法参照《中国药典》（2015）甘草品质测定方法。

以甘草酸铵、甘草苷为评价指标，色谱条件和测定方法参照《中国药典》（2020）甘草品质测定方法。

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.05 %磷酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为237 nm。理论板数按甘草苷峰计算应不低于5 000。

对照品溶液的制备 取甘草苷对照品、甘草酸铵对照品适量，精密称定，加70 %乙醇分别制成每1 mL含甘草苷20 μg、甘草酸铵0.2 mg的溶液，即得（甘草酸重量=甘草酸铵重量/1.0207）。

供试品溶液的制备 取本品粉末（过三号筛）约0.2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70 %乙醇100 mL，密塞，称定重量，超声处理（功率250 W，频率40 kHz）30 min，放冷，再称定重量，用70 %乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品按干燥品计算，含甘草苷（C21H22O9）不得少于0.50 %，甘草酸（C42H62O16）不得少于2.0 %。

2 结果

不同产地乌拉尔甘草根部及陕北乌拉尔甘草茎品质鉴定色谱图见图1（由本实验室测定），结果见表1。依据《中国药典》规定，甘草酸铵干燥品计算，甘草酸（C42H62O16）不得少于2.0 %，含甘草苷（C21H22O9）不得少于0.50 %。由表可知，甘肃产的甘草品质最差，其甘草酸和甘草苷的含量分别为1.947 0 %和0.383 9 %，均未达到甘草饮片的最低要求。宁夏和新疆产乌拉尔甘草中甘草酸和甘草苷的含量均高于《中国药典》的规定，内蒙产乌拉尔甘草酸和甘草苷的含量分别为3.514 3 %和1.179 4 %，高于规定的最低值。所有的被测样品中，延安产乌拉尔甘草根中甘草酸和甘草苷的含量最高，分别为6.627 7 %和2.493 9 %，高于药典规定的最低值的3倍和6倍，远远高于其他产地的品质。另外，陕北产甘草茎中甘草酸和甘草苷的含量均很低，分别为0.246 5 %和0.026 9 %，不能达到甘草的最低要求。

表1 不同产地甘草品质鉴定结果

图1 不同产地乌拉尔甘草HPLC图

按贡济宇等的甘草饮片等级评定（一等品：甘草苷质量分数＞1.10 %，甘草酸质量分数＞2.12 %，二等品：甘草苷质量分数＞0.74 %～1.10 %，甘草酸质量分数＞1.95 %～2.12 %，三等品：甘草苷＞0.65 %～0.74 %，甘草酸质量分数＞1.88 %～1.95 %，等外品：甘草苷质量分数＜0.65 %，甘草酸质量分数＜1.88 %）［10］，延安产和内蒙产甘草为一等品，宁夏和新疆产甘草的甘草酸含量均高于一等品的要求，但甘草苷的含量不能达到一等品的要求，甘肃产甘草甘草酸的含量达到了三等品，但甘草苷的含量为等外品。

3 讨论

药用植物是指医学上用于防病、治病的植物，其植株的全部或部分供药用或作为制药工业的原料。野生药用植物是指自然界生长、未经人工驯化栽培、具有药用价值的一类植物，是极其宝贵的天然药物种质资源库。甘草是《中国药典》规定的主要品种，我国甘草资源丰富、储量高、品质优良，甘草酸及多种黄酮类化合物含量高，有极广的临床应用价值。然而，药材产地不同、种类不同，品质也参差不齐。本实验测定了西北不同产地的乌拉尔甘草的品质，测定结果显示除甘肃产乌拉尔甘草不能达到国家规定的最低标准外，其余产地的乌拉尔甘草均超过了最低标准，而延安产乌拉尔甘草品质最佳，甘草酸和甘草苷的含量超过国家最低标准数倍。李成义等［11］报道了甘肃省金塔野生乌拉尔甘草（多年）中甘草酸和甘草苷的含量分别为6.85 %、4.39 %，栽培乌拉尔甘草（5年）甘草酸和甘草苷的含量分别为5.21 %和5.92 %。而本次测试中甘肃产乌拉尔甘草中甘草酸和甘草苷的含量却仅为1.984 7 %和0.383 9 %，均没有达到最低标准，可能是药材并非出自甘肃，且生长年限不够所致。张泽生等［12］报道了新疆产十年以上甘草根主干部分甘草酸的含量为2.4 %，而本文所测新疆产甘草甘草酸的含量为3.283 7 %，高于文献报道。李成义等［13］报道了甘肃金塔、内蒙伊盟、宁夏灵武野生乌拉尔甘草中甘草酸的含量分别为6.85 %、4.80 %、1.80 %，甘草苷的含量分别为4.39 %、2.40 %、0.7 %，本次测试中内蒙产甘草的数值略低于文献报道，而宁夏产甘草的数值略高于文献报道。虽然本次实验所用药材除延安产乌拉尔甘草为本实验室实地采摘，其余均购自网上，但除了甘肃产乌拉尔甘草外，其余产地的测试结果与文献报道相差不大，故本次测试的结果应该是不同产地乌拉尔甘草的真实状况。另外，甘草是以根入药，本实验测试了延安产乌拉尔甘草茎中甘草酸和甘草苷的含量，结果显示远远低于国家的最低标准，故甘草茎不能作为甘草根的替代品。

近年来，随着对甘草开发利用的不断深入，甘草的市场需求量剧增，野生甘草资源遭受了严重的破坏。据统计资料表明，建国初期全国甘草储量约为200～250万吨，现有甘草储量已下降到50～70万吨［14］。由于近几十年的滥采乱挖和大面积垦荒，甘草资源不仅蕴藏量逐年下降，经济产量锐减，生态环境也遭到了极大的破坏，现存的野生甘草资源已无法满足日益增长的市场需求。延安土地广袤、日照充足、黄土层深厚、昼夜温差大，其野生药材产量大、品质好，有着极大的开发潜力，且延安十年退耕还林，生态环境明显改善，植被也得到了很好的恢复。中药材经济的开发有利于改善延安的原有经济模式，多方位、多角度、全面的调整延安的经济产业结构，为延安的经济快速、稳步、可持续的发展提供契机。另外，延安地区大多数处于黄土高原的山区，地区经济发展很不平衡，尤其是边远偏僻山区的经济一直处于落后状态，中药材经济的发展能够兼顾全区不同地貌，使得边远偏僻山区的经济走向良性发展的道路。内蒙产甘草一直为甘草的道地药材，而本次测试结果及文献报道均显示延安产甘草品质优于内蒙产甘草。本实验的结果为进一步开创延安品牌的野生药材提供可能，为延安经济发展开辟新的领域，调整延安产业结构，促进经济转型，改变延安单一经济结构模型，具有重要意义。