ELISA 法在艾滋病HIV 抗体筛查中的应用价值

马 丹

（无锡市疾病预防控制中心微生物检验科，江苏 无锡 214000）

艾滋病（acquired immune deficiency syndrome）是临床中危害性极大的传染病之一，主要是由于感染人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）导致的[1]。HIV 会对机体的免疫系统造成攻击，破坏淋巴细胞，导致患者丧失免疫功能，增加了其他疾病的感染率，致死率极高[2]。AIDS 具有传播速度快、潜伏期长、危害范围广等特点，及时、有效的诊断及监测是控制HIV病毒传播的主要措施，对临床治疗及患者预后也有重要的意义[3]。HIV 抗体检测是临床判断HIV感染的重要指标，虽然检测方法较多，但对于HIV 抗体的初筛，仍面临着种种困难，不同方法的检验结果存在一定的差异[4]。本研究主要分析AIDS 检验中HIV 抗体酶联免疫吸附剂测定法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）的筛查价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2018 年12 月-2020 年12 月无锡市疾病预防控制中心共359 例疑似AIDS 患者作为研究对象，其中男性324 例，女性35 例，年龄19～60 岁，平均年龄（35.16±6.11）岁。

1.2 方法

1.2.1 免疫印迹法检测 严格遵照试剂盒说明书进行判断。HIV-1 抗体阳性：检测出2 条env 带（gp160/gp41 和gp120）以及gag（p17、p24、p55）或pol（p31、p51、p66）带；HIV 抗体阴性：无病毒特异性皮带或仅检出p17 抗体无其他条带。HIV 抗体不确定性：有任何病毒特意条带，但不足以评价为阳性；HIV-2 抗体阳性：HIV-1 阳性或不确定基础上有HIV-2 清晰条带。

1.2.2 胶体金快速法 首先制备待标记蛋白溶液，将pH 7.0 的氯化钠溶液与待标记蛋白透析，当多余盐离子去除后，进行10000 g 4 ℃离心处理，持续1 h，保证聚合物彻底清除。随后准备待标胶体金溶液，先用0.1 mol/L 氯化氢调节胶体金液pH 值，根据待标记蛋白需求的不同，对胶体金的pH 值调节后分别装入不同试管，每个试管1 ml。

1.2.3 ELISA 法 将待检血液以3000 r/min 的速率离心，分离血清，根据HIV 抗体检测试剂盒说明进行ELISA 法检测，具体步骤如下：先取出酶标板，分别设置3 孔阳性对照、2 孔阴性对照、1 孔空白对照、1孔样品。除空白孔外，其余分别对应阳性、阴性对照组以及样品各100 μl。经孵育30 min、洗板6 次后拍干。除空白孔外，每孔均加入酶标记抗原100 μl，再次孵育20 min、洗板6 次后拍干。增加底物液，避光反应15 min 后再加入终止液。通过酶标仪读取不同孔的吸光度（OD）值。

1.3 观察指标 以免疫印迹法检测结果作为金标准，分析ELISA、胶体金法检测阳性率、灵敏度、特异度、检测时间及成本，并分析ELISA 筛查结果的影响因素。灵敏度=真阳性/（真阳性+假阴性）×100%；特异度=真阴性/（真阴性+假阴性）×100%。

1.4 统计学方法 通过SPSS 22.0 统计软件进行数据分析，计量资料以（）表示，采用t检验；计数资料以（n）表示，采用χ2检验。以P＜0.05 表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 胶体金法和ELISA 法检测阳性率、灵敏度、特异度比较 359 例疑似AIDS 患者中，免疫印迹法检测显示HIV 抗体阳性337 例，阳性率为93.87%。ELISA 法检测HIV 抗体阳性率为93.04%（334/359），高于胶体金法的87.74%（315/359），差异有统计学意义（P＜0.05）。ELISA 法灵敏度为97.95%（334/341）、特异度为83.33%（15/18），高于胶体金法的95.17%（315/331）、21.43%（6/28），差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 胶体金法和ELISA 法检测结果比较（n）

2.2 胶体金法和ELISA 法检测时间及成本比较ELISA 法检测时间长于胶体金法，但检测成本低于胶体金法，差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 胶体金法和ELISA 法检测时间及成本比较（）

表2 胶体金法和ELISA 法检测时间及成本比较（）

2.3 ELISA 法筛查结果影响因素 ELISA 法检测HIV 抗体共出现7 例假阳性，其中2 例因血液标本未妥善处理、2 例血液标本污染、3 例血液标本溶血。

3 讨论

HIV 病毒是一种攻击人体免疫系统的病毒，也是AIDS 发病的主要原因[5]。当患者感染HIV 病毒后，机体内的CD4+T 细胞会受到严重损伤，使得免疫功能逐渐失调，导致其他细菌、病毒的入侵，对患者的生命安全造成了严重的影响[6]。AIDS 的潜伏期较长，未发病前患者不会表现出任何症状，但此时仍可以通过血液、体液进行传播，危害严重[7]。近年来，全球AIDS 的发病率逐年上升，已经成为全球性的公共卫生问题，受到了社会的广泛关注。

定期进行AIDS 检验，及时发现HIV 病毒，早诊断、早治疗是预防AIDS 的重要措施之一。目前临床中检测HIV 病毒的方法较多，如免疫印迹法、胶体金法、ELISA 法等[8]。免疫印迹法是临床检测HIV 的“金标准”，由于检验步骤较为复杂，因此多用于确诊试验，灵敏度与特异度较高。胶体金法主要通过胶体金进行检测，由于胶体金的外观为红色，因此检测过程中安全性较高，且标记物稳定性强，检测过程简单，反应时间一般在30 min 内，但该方法诊断阳性率较低，HIV 病毒敏感性相对较差，因此其结果准确性不高[9]。ELISA 法的检测原理是当抗体与酶结合后，不会导致抗体免疫性反应的特异性变化，对酶活性也无明显影响，补充底物后能够使基质水解呈色，能够改变还原性氢体的颜色，并通过呈色发现酶，从而在细胞水平上显示抗体的部位，具有较高的特异性、敏感性[10]。本研究结果显示，359 例疑似AIDS 患者中免疫印迹法检测显示HIV 抗体阳性337 例，阳性率93.87%。ELISA 法和胶体金法检测HIV 抗体阳性率比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。ELISA 法检测HIV 抗体阳性率、灵敏度、特异度高于胶体金法，差异有统计学意义（P＜0.05）；且ELISA 法检测时间长于胶体金法，但检测成本低于胶体金法，差异有统计学意义（P＜0.05）。由此可以看出，胶体金法和ELISA 法均是检验HIV 抗体的有效方式，但相比之下，ELISA 法的阳性准确率更高。同时，ELISA 法虽然时间较长，但检测成本较低，患者接受能力强，可作为临床首选的检测方式。

本研究结果还发现，ELISA 法检测HIV 抗体共出现7 例假阳性，其中2 例因血液标本未妥善处理、2 例血液标本污染、3 例血液标本溶血。因此，在对HIV 抗体进行ELISA 法检测时，应注意以下几方面：①血液标本是临床检测的主体，一旦标本发生异常，会严重影响检测结果的准确性，导致假阴性、假阳性等情况，根据血液标本的影响因素，包括内源性干扰和外源性干扰[11]；②合理选择试剂，临床中选用的试剂必须经注册批准且检验通过，根据临床评估结果、鉴定报告内容选择特异度、灵敏度较高的试剂盒[12]，因此检测前，应对试剂进行全面的预处理；③标本质量是影响临床检测结果的另一个重要因素[13-15]，血清分离时应保证完全彻底分泌，避免发生纤维蛋白混入血清样本导致的假阳性；血清在保存时应冷冻保存，避免反复冻融对蛋白分子造成破坏，导致假阴性结果；此外，临床检测时，应在试验前至少进行2 次洗板机冲洗，保证清除游离血红蛋白，从而减少对检测结果的不良影响[16]；④HIV 抗体检测需严格遵守《全国艾滋病检测技术规范》流程[17]。

综上所述，ELISA 法与胶体金法检测HIV 抗体均具有一定的临床价值，相比之下ELISA 法敏感度、特异度更高，可作为临床首选方式。但ELISA 法检测过程中应注意检测的规范性，对标本、试剂、温度、操作流程等各方面进行干预，从而避免假阴性、假阳性的出现，进一步提高临床检测的准确性。