183株沙门菌属细菌的血清型分布、分子分型特征及耐药性分析

石红，王毅

宝鸡市中心医院检验科，陕西 宝鸡 721008

沙门菌属细菌是寄生在动物和人类肠道中的常见菌种，沙门菌属细菌感染为临床常见的食源性疾病和人畜共患病，可引起多种临床表现，严重威胁机体健康安全[1]。沙门菌属细菌的型别较多，抗原结构和血清型较复杂，相关研究报道，腹泻患者不同血清型的沙门菌属细菌的致病力有明显差异[2]。抗生素是临床治疗沙门菌属细菌感染的常用手段，但近年来随着抗生素的滥用，沙门菌属细菌的耐药率不断增加，增加临床治疗难度[3]。朱德永等[4]研究也表明，目前沙门菌属细菌的多重耐药问题较严重，其对三代头孢药物和环丙沙星的敏感性较低。临床加强沙门菌属细菌的药敏监测对此类细菌耐药性传播的抑制有重要影响，且可指导临床用药。本研究主要分析183 株沙门菌属细菌的血清型分布、分子分型特征和耐药性情况。

1 资料与方法

1.1 一般资料183株沙门菌属细菌来自宝鸡市中心医院2016年2月至2020年10月门诊及住院患者的临床送检标本，其中血液标本50 例，大便标本127例，尿液标本4 例，其他引流液标本2 例；其中女性89例，男性94例；年龄：≤10岁4例，11～20岁9例，21～30岁65例，31～40岁31例，41～50岁25例，51～60岁42例，＞60岁7例。183例患者年龄、性别信息均齐全。

1.2 方法

1.2.1 细菌鉴定及血清型分型将所有患者送检标本进行培养，取无菌棉拭子蘸取可疑部分并立即送至实验室。用亚硝酸盐增殖液进行接种，37℃温度下孵化24 h，并同时接种麦康凯琼脂培养基和HE 琼脂培养基。36℃、24 h后查看细菌生长状态，通过初步生化、细菌分离得到沙门菌属，并进行分型。

1.2.2 药物敏感性试验全部试验菌株均通过纸片扩散法进行体外药物敏感性试验。首先制备接种菌液，制作接种平板，贴纸片并赋育。培养后将平板取出，用游标卡尺测定抑菌环直径，参照相关标准评价菌株对常见抗生素的敏感性结果[5]。

1.2.3 PFGE 分型首先进行胶块制备，再裂解沙门菌属细菌，洗胶块，胶块内DNA酶切、加样、电泳、染色、脱色和拍摄图像。将拍摄图像上传至对应数据库软件，进行处理和分析。以国际标准菌株H9218作为标准分子量进行校准，识别、标记条带位置。用非加权配对算术平均法进行条带的聚类分析[6]。

2 结果

2.1 183 株沙门菌属细菌血清型分布183 株沙门菌属细菌中鼠伤寒沙门菌为最常见血清型，其次为肠炎沙门菌，见表1。

表1 183株沙门菌属细菌血清型分布

2.2 主要沙门菌属细菌分子分型特征对183株沙门菌属细菌前两种血清型鼠伤寒沙门菌、肠炎沙门菌进行PFGE分型。两种血清型菌株共168株，参照100%相似度，119株鼠伤寒沙门菌可见81个PFGE型，29株肠炎沙门菌可见21个PFGE型。

2.3 183株沙门菌属细菌耐药性分析沙门菌属细菌对四环素、头孢哌酮、链霉素、萘啶酸、氨苄西林表现出耐药，对卡那霉素、头孢他啶、头孢吡肟、头孢噻肟、头孢曲松、阿莫西林/克拉维素的耐药率较低，且全部菌株对环丙沙星、头孢西丁、亚胺培南均敏感，见表2。

3 讨论

沙门菌属细菌的宿主广泛，主要在动物肠道内分布，少部分沙门菌属细菌对宿主具有选择性，其菌型较多，对动物及人均有程度不一的致病性，近年来沙门菌属细菌感染已成为临床严重的公共卫生问题[7]。

血清分型为沙门菌属细菌的主要表型分型方法，其操作简单快速，可重复性高。沙门菌属细菌的血清分型复杂且类别较多，肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌为沙门菌感染的最常见病原。其中鼠伤寒沙门氏菌的感染性强，室温下能够快速繁殖，致病速度极快，是胃肠炎及败血症的主要病原之一[8-9]。肠炎沙门菌为食物中毒事件检出率最高的沙门菌血清型，可从鸡群中分离[10]。另外副伤寒沙门菌、伤寒沙门菌感染则可引起肠热症。本研究中183株沙门菌属细菌感染的最常见血清型为鼠伤寒沙门氏菌，另外肠炎沙门菌也是其优势血清型，此结果与临床报道结果相符[11]。其次部分患者检出副伤寒沙门菌、伤寒沙门菌、甲型副伤寒沙门菌、斯坦利沙门菌，德尔卑沙门菌等血清型。但血清分型存在高消耗、低产出等不足，且易和大肠埃希菌及其他细菌出现交叉反应，此外血清分型的分辨力有限。另有研究报道，单一血清表型分型对传染疾病跨地区传播的追踪、调查价值有限[12]。生物分型、噬菌体分型等表型方法的技术难度高，区分能力较低。

近年来沙门菌属细菌的分子分型技术不断改善，具有高通量、可重复性好和高灵敏度等特点，对流行病的调查有重要价值。PFGE目前已用于多种细菌分子生物学分型监测中，其通过限制性内切酶将菌株DNA 消化，再经PFGE 进行分离，与染色体限制性内切酶图谱对比，对细菌分型进行鉴定[13]。临床研究指出，PFEG 能够反映DNA 序列的不同变化，对细菌性传染病的防治、追踪有重要价值[14]。既往研究表明，鼠伤寒沙门菌PFGE 带型表现出多态性分布[15-16]。本研究结果也显示，按照100%相似度，鼠伤寒沙门菌的PFGE 型别较多，无明显优势带型。另外其余沙门氏菌细菌的PFGE型别也较多，呈散在分布。

抗生素是沙门菌属细菌感染者的常用药物，其中三代头孢菌素和喹诺酮类药物为其首选用药[17]。但有文献指出，部分鼠伤寒沙门氏菌感染者对三代头孢类药物出现耐药[18]。近年来随着抗生素药物的滥用和广泛应用，沙门菌属细菌的耐药问题较突出。王月等[19]研究表示，随着沙门菌属细菌耐药性的不断增加，可相应增加抗生素的种类、用药量和疗程。本研究结果显示，183 株沙门菌属细菌对四环素、头孢哌酮、链霉素、萘啶酸、氨苄西林表现出耐药，此类药物均为临床常见抗生素，证实沙门菌属细菌的耐药性问题较严重。相关研究发现，沙门菌属细菌对萘啶酸耐药性高可能相应增加菌株对环丙沙星的耐药性，从而影响临床用药的选择[20]。但本研究中，全部菌株对环丙沙星均敏感，但未排出潜在的环丙沙星耐药情况。另外本研究中沙门菌属细菌对卡那霉素、头孢他啶、头孢吡肟、头孢噻肟、头孢曲松、阿莫西林/克拉维素的耐药率较低，且全部菌株对头孢西丁、亚胺培南均敏感。提示三代头孢菌素和喹诺酮类药物仍可作为沙门菌属细菌感染经验用药，但建议临床加强抗生素应用的监控，以减少耐药菌株的发生，并有效预防沙门菌属细菌感染，控制疾病流行。

综上所述，沙门菌属细菌的血清型分布和分子分型较复杂，耐药现象较严峻，临床需进一步加强对抗生素用药的监测。