ABO及Rh 新生儿溶血病血清学试验与临床应用

葛云萍，段金娥

（济源市中心血站供血库，河南 济源 459000）

新生儿溶血病（HDN）是一种因母儿血型不合，胎儿红细胞抗原刺激母体产生免疫性抗体，通过胎盘进入胎儿体内引起免疫反应，使胎儿红细胞遭到破坏，出现新生儿黄疸、贫血、水肿、肝脾肿大等疾病，严重者危及生命或出现核黄疸等后遗症。因此，早期进行相关试验结合临床表现确诊，及时治疗，能有效降低死亡率减少后遗症。笔者对2016年5 月-2018年4 月医疗机构送检的疑似HDN患儿标本血清学试验结果进行分析，报告如下。

1 材料与方法

1.1 对象及来源 2016年5 月-2018年4 月，市医院、二院、保健院送到血库的疑似HDN患儿申请单及血标本1299 份，2 管/份,抗凝血2ml,不抗凝血3ml。日龄10min～21d。血清胆红素值204.19～374.36（umol/l)。患儿母亲住院分娩时抽取不抗凝血4ml，均送血标本备血。

1.2 试剂与仪器 ABO和Rh 血型检测试剂、筛选细胞、谱细胞和ABO 标准红细胞(上海血液生物医药有限公司)。抗IgG 抗人球蛋白检测卡（长春博讯生物公司），试剂均在有效期内使用。日本久保田离心机,TD-A 离心机和FYQ型免疫微柱孵育器（长春博研生物公司），水浴箱（江苏姜堰）。

1.3 血清学试验方法及结果判读 母亲血标本进行ABO、Rh 血型及不规则抗体检测。患儿 标本鉴定ABO、Rh 血型，直接抗球蛋白（DAT）、游离抗体和抗体释放试验，三项试验采用微柱凝胶法。母-儿ABO 血型不合的患儿游离、释放试验观察AC(BC）和OC 凝聚阳性结果，ABO 血型相合观察OC阳性结果，对OC 阳性的患儿进一步确定抗体特异性，判断血型系统，鉴定母儿为同一种抗体，且母亲对应抗原阴性,所有检出的抗体能够和新生儿红细胞反应判断试验阳性。试验步骤及判读结果，参照文献[1,2]及试剂说明书。

1.4 新生儿溶血病判断 单项红细胞抗体释放试验阳性或者合并直接抗人球蛋白试验阳性和/或游离抗体。

1.5 统计学方法 数据采用计算器V1.70 软件进行卡方检验，P<0.01 时为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 检测 1299例，确诊HDN 627例，ABO HDN 614例占97.93%，O-A与O-B 组发病率比较χ2=29.01,P<0.01。Rh HDN13例占2.07%。ABO及Rh HDN 发病率见表1

表1 ABO及Rh HDN 发病率（n.%）

2.2 ABO HDN O-A与O-B 组直抗试验阳性率分别为10.41%、4.11%，差异有统计学意义（χ2=7.45,P<0.01）。ABO HDN 母-儿血型三项试验结果，见表2。

表2 ABO HDN 母-儿血型三项试验结果（n.%）

2.3 ABO HDN 一胎236例、二胎378例发病率分别为38.44%、61.56%,差异有统计学意义χ2=29.01,P<0.01；游离抗体试验一胎146例、二胎280例，阳性率分别为30.67%、50.95%，差异有统计学意义（χ2=54.95,P<0.01）。ABO HDN 日龄≤3 天阳性率为79.32%，≥8 抗体放散试验阳性率为0.81%。Rh HDN 日龄≤3 天、4～7 天、≥8 天三项试验全阳性，红细胞凝集强度呈4+，均为二胎及以上。ABO及Rh HDN 胎次、日龄与三项试验的关系见表3。

表3 ABO及Rh HDN 胎次、黄疸日龄与溶血三项的关系（n.%）

3 讨论

HDN 是临床造成新生儿死亡的重要原因，可导致胎儿发育停滞、畸形、流产及新生儿高胆红素血症[3]。其主要发病机制为母-儿血型不合，使母体免疫系统产生抗体，与新生儿红细胞抗原结合出现溶血，血液中未结合胆红素增加超过肝脏代谢能力，导致患儿贫血、水肿、黄疸等症状，对新生儿早期进行溶血三项试验，提高确诊率，有利于临床对新生儿的诊疗和提高新生儿存活率。

新生儿溶血病血清学三项试验中,直接抗人球蛋白试验是检测患儿红细胞上是否结合免疫抗体,本次试验ABO-HDN DAT 阳性率较低为7.33%，原因是由于新生儿的A（B）抗原密度比成人低，被结合的抗体也很少，因此，许多ABO-HDN的直抗试验呈弱阳性反应，甚至阴性。游离抗体试验是检测新生儿血清中能和患儿红细胞反应的血型抗体,与母体IGg 抗体进入胎儿体内的量有关,该项试验有助于判断疾病的发展病程，我们试验阳性率为69.22%。抗体释放试验是将致敏在新生儿红细胞上的抗体释放下来,在检测释放液中与患儿红细胞抗原结合的抗体，我们试验阳性率为100%。直抗试验和抗体释放试验都是检测红细胞上致敏的血型抗体，但各有特点，直抗试验阳性越强，提示新生儿溶血病的病情越严重，抗体释放试验敏感性最高，是判断新生儿溶血最有力的证据，我们的判断以抗体释放试验阳性为主要依据。

我们的试验结果证实血型免疫抗体引起的HDN 共627例,ABO HDN614例,发病率为97.93%,Rh HDN13例，发病率为2.07%，与李小红报道的血型免疫抗体引起的HDN患儿中，以ABO HDN最多，Rh HDN 居其次基本符合[4]。依据ABO HDN母-儿血型组合进行分析，O-A 组发病率（72.21%）高于O-B（55.94%），二者差异的统计学意义，是因为新生儿A型抗原位点（抗原决定簇）比B型多[5]。同时两组直抗试验阳性率为10.41%、4.11%，差异有统计学意义，表明A型患儿较B型红细胞溶血严重。母非O型母-儿不容时，阳性率为17.14%，阳性率较低的原因是A 或B型妇女的抗B 或抗A 抗体主要为IgM[6]。Rh HDN 发生率较低，可发生于母-儿ABO 不容或相容组，红细胞呈强凝集反应，提示Rh-HDN 引起的溶血症状相对较重，进展快，应引起临床高度重视[7]。

表2 中，ABO HDN一胎、二胎发 病率为49.57%、72.83%,二胎发病率高于一胎的原因，我们认为与母亲免疫系统对胎儿红细胞初次、再次免疫应答有关,母亲初次接触胎儿红细胞抗原进展缓慢，当再次接触相同抗原时，有大量抗体在短时间内产生。理论上适龄孕妇随着妊娠次数的增加，胎儿血再次进入母体几率增加，导致母体的记忆B细胞大量分化，产生高效价IgG抗体[8]。游离抗体试验一胎、二胎阳性率差异，提示患儿溶血病程较长,主要原因是血浆未结合的抗体待骨髓造血系统生成新的红细胞时仍会受到破坏，病程将持续一段时间[9]。ABO及Rh HDN 黄疸日龄≤3 天阳性率均为70%以上，提示检测越早阳性率越高。但ABO HDN≥8 天直抗试验已检测不到，抗体释放试验阳性率仅为0.81%。原因是发病初期抗体致敏红细胞破坏,溶血症状较明显，超过7 天少数检测到抗体，而没被红细胞致敏，溶血表现相对自限。Rh HDN 黄疸日龄≥8 天,甚至21 天检测三项试验仍为全阳性，红细胞呈强凝聚反应。表明Rh HDN 没有及时检测确诊，严重溶血持续存在，因此临床医生应及早排查Rh及其他血型系统的HDN，避免漏诊、误诊。

综上所述，新生儿溶血病危害大，后果严重，但可防可控，关键是产前预防、新生儿早期检测及合理治疗。临床工作中应做到：⑴孕期定期检测：夫妇双方ABO 血型不合的孕妇，定期检测抗-A、抗B 效价及不规则抗体；ABO 血型相合的孕妇只筛查不规则抗体。对抗筛阳性及抗体效价高于临界值的孕产妇[10]，及早干预。⑵新生儿出生时进行溶血三项试验排查，特别是母-儿ABO 血型不合的A 或B型新生儿，Rh及其他血型系统，二胎及以上的疑似患儿，这样才能更早发现，及时确诊，有利于判断HDN的类型、溶血程度、发展趋势，争取治疗时间，最大限度减轻其对患儿的危害，降低致残、致死率。