ACS患者IL-22的变化及与SYNTAX评分相关性研究

童金凤，万腊根 ,王萍

（1.九江市第一人民医院检验科，江西 九江 332000；2.南昌大学第一附属医院，江西 南昌 330000；3.九江市中医院检验科，江西 九江 332000）

一直以来，我国心血管病防治工作已取得了令人瞩目的成绩，但仍面临许多问题，总的来看，中国患病率及死亡率还处于上升阶段。心血管病死亡占居民疾病死亡构成40%以上，处于前列，高于许多常见疾病[1]。

目前来看，冠状动脉综合征几乎总是由冠状动脉粥样硬化引起，炎症学说、脂质浸润学说、内皮损伤学说、血栓形成学说等是目前动脉硬化综合征的主要学说，其中Peter Libby 开创了动脉粥样硬化炎症学说。IL-22 初始被人们称为IL-TIF，意思为IL-10 相关的T细胞诱导因子。IL-22 同IL-10、IL-19、IL-20、IL-24、IL-26、IL-28A、IL-28B和IL-29 一样归属于IL-10 家族，其主要由Th1、Th17、Th22细胞分泌，是唯一已知的由免疫细胞分泌但不靶向作用免疫细胞的细胞因子[2]。

欧洲心脏病学会年会ESC2008 公布的SYNTAX 积分是首个针对左主干病变和（或）3 支病变的冠状动脉病变解剖特点进行危险分层的积分系统，主要的依据病变位置、严重程度、分叉、钙化等解剖特点，这是一个定量评价冠脉病变复杂程度的工具。

在心脏性疾病方面，有研究表明IL-22与冠心病、病毒性心肌炎、心衰等疾病均有相关[3]。目前关于ACS患者IL-22与SYNTAX 积分相关性鲜有研究，本文运用荧光定量PCR和ELISA 法检测IL-2，并根据SYNTAX 积分分为低、中、高危组，以便找出它们之间的相关性，报告如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象 ⑴选取九江市第一人民医院心内科2018年3 月至2020年4 月的患者，将所有入选病例按照疾病类型分为ACS 组20例（包括AMI 12例和UAP 8例），年龄68.35±8.44 岁，其中男性11例，女性9例，和SAP 组20例，年龄66.00±9.51岁，其中男性12例，女性8例。同时选取同期经心电图、心肌标记物及冠状动脉造影证实没有冠脉病变的健康体检者（health control,HC）20例作为对照组，年龄65.75±7.06 岁，其中男性10例，女性10例。⑵另选取60例ACS患者根据SYNTAX 积分将其分为低危组(评分≤22 分)、中危组(22 分<评分<32 分)、高危组(评分≥32 分)。低危组年龄67.57±11.23 岁，其中男性12例，女性8例，中危组年龄67.11±10.23 岁，其中男性11例，女性9例，高危组年龄66.54±10.12 岁，其中男性13例，女性7例。

1.2 纳入和排除标准 纳入标准：⑴年龄要求小于80 岁,入院后行常规检查,依据患者临床症状，心肌酶谱、心电图和冠状动脉造影和PCI 手术治疗确诊为ACS的患者；⑵AMI的判定标准为休息状态下持续性胸痛30 分钟以上,结合心肌酶谱升高2倍以上，并且心电图发生典型ST段抬高或压低改变；⑶UAP的判定标准为近一月内发生的严重心绞痛,并且心绞痛程度加重，或休息时发生心绞痛，心电图的表现有缺血性改变,心肌酶谱升高在2 倍以内；⑷SAP的判定标准为心绞痛发生频率，持续时间和程度在近一月内没有改变,而且心肌酶谱正常；⑸本研究已经院伦理委员会审核批准。

排除标准：⑴患者有感染性疾病或其他严重肝肾疾病、系统性疾病；⑵患有心肌肥大等其他非急性冠状动脉综合征的心脏病；⑶有滥用药物或酗酒；⑷吸烟患者。

1.3 方法

1.3.1 试剂及仪器 Human IL-22 ELISA KIT（上海翼飞公司）；淋巴细胞分离液（拜尔迪公司）；RTPCR 试剂盒（宝生物公司）；核酸蛋白测定仪（嘉鹏科技公司）；ADVIA2400 全自动生化分析仪；科华ST-360型酶标仪；达安DA7600 PCR 扩增仪。

1.3.2 标本采集及处理 所有研究对象空腹8 小时，由护士无菌操作采集空腹静脉血。采用EDTA-抗凝管采血2ml 用于制备PBMC；采用2 个干燥管分别采血5ml，一管离心用于测血清生化功能，一管离心收集血清-20℃保存用于IL-22 检测。

1.3.3 RT-PCR 检测不同组IL-22mRNA表达水平通过Ficoll-Hypaque 法制备外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）,利用Trizol 试剂提取总RNA。采用cDNA 逆转录试剂盒进行cDNA 合成,应用primer 5.0 设计引物与探针（IL-22 F 5'-CAACTTCCAGCAGCCATACA-3' R 5'-GTTGACACCTGCTTCATCA-3' β-actin F 5'-ACCCACACTGTGCCCATCTAC-3' R 5'-AGCCAA GTCCAGACGCAGG-3'）交由上海英骏生物技术有限公司合成。以制备的cDNA 为模板，根据SYBR Green RT-PCR 一步法试剂盒说明书分别扩增IL-22基因序列,并得出荧光曲线和相应的△Ct 值。以正常对照组各值为参照，采用2－△△Ct法分析目标基因的相对表达量(倍)。反应体系按说明书配置好后，将准备好的样品依次加入96 孔板中，每个样品设3 孔，RT-PCR 反应DN7600 系统上进行，反应条件：95℃预变性10s，95℃变性5s，60℃退火及延伸30s，进行30～40 个循环，重复3 次。

1.3.4 酶联免疫法检测血清IL-22 将收取到的患者和对照组冰冻血清室温解冻，使用ELISA kit 测定IL-22 浓度，所有操作严格参照说明书。

1.4 统计学处理 使用SPSS 19.0 软件对所得数据进行统计分析，计量资料用()表示，组间比较采用非参数Kruskal-Wallis 秩和检验。P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 ACS患者基础资料比较 ACS 组、SAP 组和HC 组在年龄、总胆固醇、总甘油三脂、高密度脂蛋白方面比较无显著性差异（P>0.05），ACS 组低密度脂蛋白高于HC 组，差异有统计学意义（P<0.05），见表1；SYNTAX 评分低、中高危组三组间在年龄、总胆固醇、总甘油三脂、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白方面比较无显著性差异（P>0.05），数据略。

表1 各组基线资料比较

2.2 ACS患者IL-22水平分析 ACS 组和SAP 组同HC 组比较，患者血清IL-22水平升高，分别为：31.41±7.06、17.10±4.81、9.38±2.45，差异有统计学意义（P<0.01）；ACS 组较SAP 组IL-22水平升高，差异有统计学意义（P<0.01），见图1。ACS 组和SAP 组外周血PBMC 中IL-22mRNA水平高于HC组，分别为：4.39±1.79、2.39±1.10、0.89±0.12，差异有统计学意义（P<0.01）；ACS 组IL-22mRNA水平高于SAP 组，差异有统计学意义（P<0.05），见图2。相关性分析发现，血清IL-22 同外周血PBMC 中IL-22mRNA 呈显著正相关（r=0.70，P<0.0001），见图3。

图1 三组间血清IL-22水平比较

图2 三组PBMC 中IL-22mRNA水平比较

图3 IL-22与IL-22mRNA 相关性分析

2.3 不同SYNTAX 评分患者IL-22水平分析SYNTAX 评分高危组患者血清IL-22和外周血PBMC 中IL-22mRNA水平分别为：41.33±6.57、6.58±1.01，均高于低危组患者，差异有统计学意义（P<0.01）；SYNTAX 评分高危组患者血清IL-22和外周血PBMC 中IL-22mRNA水平均高于中危组患者，差异有统计学意义（P<0.01）；SYNTAX 评分中危组患者血清IL-22和外周血PBMC 中IL-22mRNA水平分别为：31.27±5.48、4.64±1.12，均高于低危组患者，差异有统计学意义（P<0.05），低危组分别为：23.10±6.25、3.09±0.85，见图4,5。相关性分析发现,血清IL-22 同外周血PBMC 中IL-22mRNA 呈显著正相关（r=0.65，P<0.0001）,见图6。

图4 不同SYNTAX 评分患者血清IL-22水平比较

图5 不同SYNTAX 评分患者IL-22mRNA水平比较

图6 不同SYNTAX 评分患者IL-22与IL-22mRNA 相关性分析

2.4 SYNTAX 评分与IL-22 相关性分析 将SYNTAX 评分分组的低、中、高危患者血清IL-22和外周血PBMC 中IL-22mRNA 作相关性分析发现，SYNTAX 评分同血清IL-22 呈显著正相关（r=0.74，P<0.0001），SYNTAX 评分也同外周血PBMC中IL-22mRNA 呈显著正相关（r=0.75，P<0.0001），见图7。

图7 SYNTAX 评分与IL-22 相关性分析

3 讨论

本研究选取20例ACS患者作基线分析，从结果可以看出，ACS患者低密度脂蛋白胆固醇水平高于健康对照组。这符合我们对ACS 一致的观点，即血脂异常，如低密度脂蛋白胆固醇升高、甘油三酯升高和脂蛋白a 升高在动脉粥样硬化中起着核心作用。体内和体外已有许多研究表明，低密度脂蛋白胆固醇可以侵入血管内皮下，诱导内皮功能障碍，并通过一些不同的机制引发斑块形成。侵入到内皮下的低密度脂蛋白胆固醇也可以被氧化修饰，巨噬细胞暴露于氧化低密度脂蛋白（oxidized low density lipoprotein,oxLDL）表达清道夫受体，如CD36，它能结合并促进氧化低密度脂蛋白形成[4]。

IL-22 主要由淋巴样谱系细胞分泌，包括αβT细胞、γδT、NKT细胞、CD4+T细胞等分泌,不过在人类T细胞中还主要是Th22细胞分泌IL-22。IL-22 被认为具有病菌防御，再生和损伤保护作用。现在IL-22和心血管疾病的研究也不断地引起科研工作者的兴趣，越来越多的证据表明IL-22 或许可以作为心血管疾病治疗靶点。如在柯萨奇病毒B3诱导的急性病毒性心肌炎中，脾T H22细胞的百分比、血浆IL-22和心脏IL-22受体表达明显升高[27]。小鼠模型中，急性心肌梗死后第一周补充IL-22可有效预防左心室功能障碍和心力衰竭[5]。

动脉粥样硬化是冠心病、脑梗阻和外周血管病变的主要因素。在小鼠动脉粥样硬化模型中，IL-23及其下游靶点IL-22 可通过抑制致动脉粥样硬化微生物的生长抑制动脉粥样硬化，当表达炎性细胞因子IL-23 消失，病情加重[6]。在另一项动脉粥样硬化的研究中，Th22细胞及其分泌的IL-22 都参与了动脉粥样硬化的发展，急性心肌梗死患者血清IL-22 高于不稳定性心绞痛，稳定性心绞痛及健康对照组[7]。本研究发现，ACS 组IL-22水平高于SAP 组和HC 组，这说明IL-22 参与了动脉硬化的发展。

SYNTAX 评分范围从0 到83，更高的分数表明冠状动脉疾病更复杂。本研究发现，随着SYNTAX 评分从低危到高危,血清IL-22水平是逐渐上升的，外周血IL-22mRNA水平也是逐渐上升,并且SYNTAX 评分和IL-22 存在一定的相关性。这给我们的启示是,更复杂的冠状动脉病变可以导致更高的IL-22 变化。

总之,本研究我们发现急性冠状动脉综合征IL-22的变化，并且这一变化随着评分的增高而增高，推测IL-22在此疾病种有重要作用。