毛细管气相色谱法测定复方鲜竹沥液中α-松油醇的含量

2021-09-27吴旻昱邬秋萍付志文付辉政周志强肖小武

药品评价 2021年15期

吴旻昱，邬秋萍，付志文，付辉政，周志强，肖小武

1.江西省药品检验检测研究院,江西省药品与医疗器械质量工程技术研究中心,国家药品监督管理局中成药质量评价重点实验室，江西南昌 330029；2.江西康恩贝中药股份有限公司，江西上饶 334400

复方鲜竹沥液由鲜竹沥、鱼腥草、枇杷叶、桔梗、生半夏、生姜、薄荷素油七味中药组成，方中为君药的鲜竹沥具有性寒滑利，清肺降火，化痰止咳等功效，鱼腥草和枇杷叶均具有清热降气，化痰止咳等功效，二者共为臣药［1］。鱼腥草为三白草科植物载菜Houttuynia cordataThunb.的新鲜全草或干燥地上部分，均具有止咳化痰、清肺止咳等功效［2］。现行的复方鲜竹沥液处方制法规定要求鱼腥草为蒸馏液入药［3］，而鱼腥草蒸馏液主要含α-松油醇，甲基正壬酮等鱼腥草挥发性特征成分，现代研究表明α-松油醇，甲基正壬酮等为鱼腥草的功效成分［4-6］。现行复方鲜竹沥液的质量标准只是采用对照药材水煎处理法对鱼腥草进行了薄层色谱的定性控制［3］，此方法未能对鱼腥草蒸馏液的挥发性成分进行有效的控制。但《中国药典》2020 版一部［3］收录的以蒸馏液入药的“鱼腥草滴眼液”，《中国兽药典》2015 年版［7］收录的“鱼腥草注射液”也以α-松油醇、甲基正壬酮、4-萜品醇和乙酸龙脑酯进行定量控制。现行标准简单，而相关质量控制研究文献也较少［8-12］。故本研究参照相关研究［13］采用毛细管气相色谱法测定复方鲜竹沥液中α-松油醇的含量，以期为复方鲜竹沥液质量控制提供参考。

1 仪器与试剂

8890 型气相色谱仪（美国Agilent 公司），配置氢火焰离子化检测器（FID）、7693 型液体自动进样器，Openlab 色谱工作站，BT25S 型十万分之一电子天平（瑞士赛多利斯公司）。α-松油醇（中国食品药品检定研究院，批号：111859-201804），甲醇、乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。复方鲜竹沥液样品共计18 批次，共涉及6个生产企业，均来自国家药品评价性抽检市场抽样。

2 方法与结果

2.1 对照品贮备液的制备

取α-松油醇对照品适量，精密称定，用乙酸乙酯∶无水乙醇（8∶2）制成质量浓度约为0.7 mg/mL 的对照贮备液。

2.2 供试品溶液的制备

精密量取鲜竹沥40 mL,通过C18 固相萃取小柱（600 mg∶6 mL，使用前用12 mL 的甲醇活化，活化后用50 mL 水冲洗干净），用乙酸乙酯∶无水乙醇（8∶2）的混合溶液洗脱，收集洗脱液约2 mL，置5 mL 量瓶中，加上述混合溶液至刻度，摇匀，即得。

2.3 色谱条件

色谱柱：DB-WAX（30 m×0.32 mm×0.25 μm）,以N2为载气，柱流速：3.5 mL/min,进样1 μL，分流比10∶1；进样口温度：250 ℃；程序升温：初始温度65 ℃，保留0.5 min，3 ℃/min 升至120 ℃保留0.5 min，10 ℃/min 升至210 ℃；280 ℃后运行5 min，FID 检测器温度300 ℃。结果色谱图中其他成分对α-松油醇色谱峰无干扰，分离度良好，对照品和供试品溶液色谱图见图1。

图1 对照品和供试品溶液的色谱图：A.对照品；B.供试品

2.4 线性关系考察

取“2.1”项下的对照品贮备液，依次用乙酸乙酯∶无水乙醇（8∶2）的混合溶液稀释成5 个所需的质量浓度，按“2.3”项下色谱条件进样测定峰面积。以质量浓度为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），绘制标准曲线并进行回归分析，α-松油醇的回归方程为Y=2.341 6X+3.102 7，R2=0.999 8，α-松油醇在7.524 0～752.400 0 μg/mL 范围内线性关系良好。

2.5 精密度试验

取“2.1”项目下的对照品贮备液，用乙酸乙酯∶无水乙醇（8∶2）的混合溶液稀释5 倍，按“2.3”项条件下连续进样6 次，测定峰面积。结果α-松油醇峰面积的RSD（n=6）为0.87%，表明精密度良好。

2.6 重复性试验

取A 公司复方鲜竹沥（批号：1909013），按“2.2”项下方法平行制备供试品溶液6 份，在上述“2.3”条件下进行分析测定，结果表明α-松油醇平均含量为14.05 μg/mL、RSD（n=6）为1.62%，表明该方法重复性良好。

2.7 稳定性试验

取A 公司复方鲜竹沥液（批号：1909013），按“2.2”项下方法制备供试品溶液，在上述“2.3”条件下分别于0、6、12、18、24 h 进行分析测定峰面积，结果α-松油醇的峰面积的RSD（n=5）为0.71%，表明α-松油醇在24 h 内稳定性良好。

2.8 加样回收率试验

精密量取A 公司复方鲜竹沥液（批号：1909013）6 份，每份20 mL，分别精密加入相对应量α-松油醇对照品溶液（0.150 48 mg/mL）20 mL，按“2.2”项下方法制备供试溶液，在上述“2.3”条件下进行分析测定，计算回收率，结果表明样品按本标准试验，回收率良好，结果见表2。

表1 加样回收率试验结果（n=6）

2.9 样品的测定

取6 家生产企业18 批次的复方鲜竹沥液样品（每家企业3 批次），按“2.2”项下方法制备，每批平行处理两份，每份进两针。在上述“2.3”条件下进行分析测定，以平均峰面积计算α-松油醇含量，结果见表2。

表2 样品的测定结果（μg/mL）

3 讨论

3.1 前处理方式的选择

复方鲜竹沥液成分复杂，试验首先考察了顶空加热直接进样以及溶剂萃取浓缩两种处理方式测定复方鲜竹沥液中的α-松油醇，但供试品中的α-松油醇含量较小且供试品液中薄荷油等成分存在较大干扰，故采取了固相萃取进行净化的方法进行前处理。

3.2 目标成分的确定

考虑到鱼腥草蒸馏液中含有α-松油醇、4-萜品醇、甲基正壬酮和乙酸龙脑酯等多个挥发性特征成分，试验最开始测定复方鲜竹沥液中α-松油醇、4-萜品醇、甲基正壬酮和乙酸龙脑酯4 个组分的含量，但对6 家生产企业的样品测定发现仅检出α-松油醇，均未检出4-萜品醇、甲基正壬酮和乙酸龙脑酯三个成分，故本研究只测定了α-松油醇。