高效液相色谱法同时分析7%春雷霉素·噻霉酮可湿性粉剂

陈国珍，苏华，张海娟，党璐，郑建斌

(1.陕西省石油化工研究设计院，陕西 西安 710054；2.西北大学 化学与材料科学学院，陕西 西安 710127)

春雷霉素属于生物农药，作为杀菌剂，具有同时预防和治疗作用，对稻瘟病的防治效果较好。噻霉酮属于有机杂环类化合物，以其高效、低毒等特点填补了国际、国内在该领域的空白，对真菌细菌类病害有很强的抑杀作用[1-4]。研究表明,二者的复配剂对番茄斑疹病菌的防治效果优于单剂[5]。欧盟规定春雷霉素最大残留限量(MRL)为0.01～0.6 mg/kg， 噻霉酮最大残留限量(MRL)为0.05～1 mg/kg。目前，国内外对两者的检测方法主要有：液相色谱串联质谱法[6]、高效毛细管电泳法[7]、生物测定法[8]、高效液相色谱法(HPLC)等[9-10]。本研究采用HPLC法为春雷霉素和噻霉酮分析制定相关的国、行标奠定了基础。

1 实验部分

1.1 试剂与仪器

春雷霉素标准品(85.2%，国家农药检验中心 沈阳)；噻霉酮标准品(97.0%，国家农药检验中心 沈阳)；乙腈、甲醇均为色谱纯；十二烷基硫酸钠，分析纯；7%春雷霉素·噻霉酮可湿性粉剂。

Waters 2695高效液相色谱仪；Millipore超纯水机器；梅特勒XP 504分析天平；KQ-250DE超声波清洗器。

1.2 色谱参数

色谱柱为150 mm × 4.9 mm(i.d.)不锈钢柱，内装Eclipse XDB-C18，5 μm填充物；流动相为甲醇-乙腈-水(0.6%十二烷基硫酸钠，用磷酸调pH值为2.5)=40∶20∶40(v/v/v)，流速1.0 mL/min；检测波长210 nm；进样体积10 μL；柱温35 ℃。

1.3 标准溶液和样品溶液的制备

准确称取春雷霉素、噻霉酮标准品各0.02 g(精确至0.000 2 g)，于50 mL烧杯中，加入一定量超纯水，用超声波清洗器超声溶解10 min，至标样溶解完全，冷却至室温。转入50 mL容量瓶，定容，摇匀。采用0.45 μm微孔滤膜过滤，备用。

准确称取试样含春雷霉素和噻霉酮0.02 g(精确至0.000 2 g)，制备方法同标准样品。

1.3.1 检验检测 在上述1.2节分离检测条件下，等基线平稳后，连续进数针标准品溶液，直至相邻两针标准品之间的响应值相对误差小于1.5%时，按照标品、样品、标品、样品、标品的顺序进行进样检测。

春雷霉素和噻霉酮标准样品的高效液相色谱见图1(A)，春雷霉素和噻霉酮样品高效液相色谱见图1(B)。

图1 春雷霉素和噻霉酮标品

2 结果与讨论

2.1 流动相的选择

研究采用不锈钢柱150 mm × 4.9 mm(i.d.)，所用色谱柱为Eclipse XDB-C18。采用不同比例甲醇-乙腈-水(0.6%十二烷基硫酸钠，用磷酸调pH值为2.5)作为流动相。通过大量的实验数据，综合分离度、峰形以及保留时间等因素，流动相的最优化体积比为甲醇-乙腈-水(0.6%十二烷基硫酸钠，用磷酸调pH值为2.5)=40∶20∶40(v/v/v)，流速为1.0 mL/min，春雷霉素和噻霉酮分离效果较好，且保留时间合适。

2.2 线性关系

在上述实验条件下，配制一系列含有不同质量浓度春雷霉素(噻霉酮)标准品溶液进行实验。分别以春雷霉素和噻霉酮标准溶液质量浓度C(g/L)为横坐标，以春雷霉素和噻霉酮的峰面积A为纵坐标绘制标准曲线，见图2。

图2 春雷霉素(A)和噻霉酮(B)的线性关系Fig.2 Linear correlation of kasugamycin and benziothiazolinone

由图2可知，春雷霉素的线性方程为y=4 248.2+4.0x，相关系数R2为0.999 7；噻霉酮的线性方程为y=88 817.3+1.2×107x，相关系数R2为0.999 6。实验结果表明，春雷霉素、噻霉酮的质量浓度与峰面积之间具有良好的线性关系。

2.3 方法精密度的测定

对同一批次7%春雷霉素·噻霉酮可湿性粉剂，在1.2节色谱条件下，平行测定5次，结果见表1。

表1 春雷霉素和噻霉酮的相对标准偏差Table 1 Relative standard deviation(RSD) of kasugamycin and benziothiazolinone

由表1可知，春雷霉素和噻霉酮的标准偏差分别为0.8%和2.9%，相对标准偏差为0.396%和0.548%，结果表明所建立方法具有良好的精密度，可以用于实际样品的检验检测。

2.4 加标回收率

在7%春雷霉素·噻霉酮可湿性试样中分别加入一定量的春雷霉素和噻霉酮标准样品，在1.2节色谱条件下，测定春雷霉素和噻霉酮含量，加标回收率结果见表2。

表2 春雷霉素和噻霉酮加标回收率Table 2 Recovery test results of kasugamycin and benziothiazolinone

由表2可知，春雷霉素加标回收率在98.0%～101.8%之间，平均回收率为99.6%；噻霉酮加标回收率在98.9%～102.6%之间，平均回收率为101.2%。可知该方法可以准确分析制剂中春雷霉素(噻霉酮)的含量。

3 结论

建立了利用高效液相色谱法同时快速检测春雷霉素、噻霉酮含量的方法。该方法具有分离效果好，线性关系良好，操作简单等优点。能够适用于质检机构与生产企业对春雷霉素和噻霉酮的质量监督与控制，为春雷霉素和噻霉酮分析制定相关的国、行标奠定了基础。