荧光染色（一步法）在皮肤性病常见疾病直接镜检中的应用效果分析

马元龙，陈 旭，张金锁，李 浩，高 娃，于希军

（1.内蒙古医科大学附属医院皮肤性病科，内蒙古 呼和浩特 010050；2.内蒙古医科大学中医学院）

我科真菌室常规的检测疾病有手、足、体、股癣，甲真菌病，花斑癣，马拉色菌毛囊炎，传染性软疣，痤疮，疥疮，念珠菌性龟头炎，念珠菌性阴道炎，口腔念珠菌病。临床医生需要一种准确率高而且快速有效的检验手段来帮助临床诊疗。20%KOH湿片法存在主观性强、干扰因素比较多、容易漏检、误检的情况；荧光染色法背景清晰，菌丝、孢子、毛囊螨（卵、幼虫、若虫、成虫）、软疣小体、疥螨（成虫、幼虫、若虫、卵、卵壳、疥粪）蓝白色荧光，并对两种检验方法进行比较，现将结果总结报告如下：

1 资料及方法

1.1 一般资料

研究资料均来自皮肤性病科门诊，收集时间为2018-06~2020-07。高度疑似真菌感染的患者有手癣316例，足癣366例，甲真菌病288例，体癣216例，头癣166例，股癣184例，花斑癣124例，马拉色菌毛囊炎164例，念珠菌性龟头炎126例，念珠菌性阴道炎166例，口腔念珠菌病118例，痤疮292例，传染性软疣120例，疥疮156例，所有疾病患者取材同样皮损的标本均一式两份。

1.2 方法

（1）取材：用75%的酒精常规消毒需要取材的部位，手、足、体、股、花斑癣用钝刀刮取或用无齿镊子夹取边缘新鲜的皮屑，头癣用无齿镊子夹取带菌鞘的断发及鳞屑；甲真菌病用钝刀刮取或者用无齿镊子夹取甲床下的碎屑；马拉色菌毛囊炎用无齿镊子夹取前胸及后背部毛囊性丘疹、脓丘疱疹种的一种皮损，痤疮用无齿镊子夹取丘疹、脓疱、白头、黑头粉刺中的一种皮损；疥疮如发现隧道夹取或刮取隧道，无隧道刮取手缝处水疱，夹取身体部位的丘疹；传染性软疣夹取半球形丘疹。念珠菌性龟头炎刮取龟头及冠状沟处的分泌物及红色丘疹；口腔及阴道念珠菌用棉签取其分泌物做检查。所有同样皮损的标本一式两份；（2）染色：20%KOH湿片法：一份标本滴加一滴KOH溶液，盖上盖玻片，在酒精灯上稍微加热一下，然后在普通光学显微镜下镜检，记录镜检结果；荧光染色法：一份标本滴加一滴荧光染色液（江苏莱芙时代生物科技有限公司生产）。染色5min，盖上盖玻片，吸取多余的染液置于荧光显微镜下观察，以发现菌丝、孢子、毛囊螨（卵、幼虫、若虫、成虫的其中之一）、疥螨（卵、幼虫、若虫、成虫、卵壳、疥粪的其中之一）、软疣小体为阳性。

1.3 统计学处理

应用SPSS 26.0软件对数据进行统计学处理，两种方法数据均采用χ2检验分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

11种真菌感染性疾病以及痤疮、传染性软疣、疥疮用荧光染色法于KOH湿片法检出真菌毛囊螨、疥螨、软疣小体阳性率的比较（见表1、2）。

表1 11种真菌感染性疾病在两种检测方法中真菌阳性率的比较

11种真菌感染性疾病在荧光染色法及KOH湿片法中真菌检出阳性率进行比较，每一种病荧光染色法真菌检出阳性率明显高于KOH湿片法，特别是甲真菌病、马拉色菌毛囊炎用荧光染色法检出的阳性率明显高于KOH湿片法（χ2=18.205，P＜0.05；χ2=112.021，P＜0.05）有显著性差异（见表1）。

毛囊螨、马拉色菌、疥螨用荧光染色法及KOH湿片法检出阳性率比较。荧光染色法明显高于KOH湿 片 法（χ2=19.360，P＜0.05；χ2=38.835，P＜0.05；χ2=10.386，P＜0.05）；只有软疣小体用荧光染色法及KOH湿片法检出阳性率无明显的差异（χ2=0.091，P＞0.05），痤疮检出的马拉色菌包括线状菌丝团及群集性孢子（见表2）。

表2 痤疮、传染性软疣、疥疮患者中两种检测方法中阳性率的比较

3 讨论

KOH湿片法是皮肤科真菌检查使用的一种最古老、最初始的直接镜检法，操作容易、方法简单，只需要一台普通显微镜即可。这种检测方法缺点明显，如背景较为混乱，阳性率低，特别在真菌检验的标本上[1～6]，而且孢子类结构容易和脂滴、气泡混淆，导致误诊[6]。荧光染色法中具有特殊的荧光素，可以特异性结合真菌细胞壁上的几丁质，且具有较高的亲和力，只要十几秒的时间可完成反应，因此检测灵敏度高，反应也较快[7]。从我们对2228例高度疑似浅部真菌病用荧光染色法及KOH湿片法结果的比较看，荧光染色法真菌检出的阳性率明显高于KOH湿片法，特别是荧光染色法更易辨认孢子，在疑难标本中提高了马拉色菌毛囊炎、痤疮内的马拉色菌、念珠菌性甲真菌病的检测。从我们用荧光染色法对164例马拉色菌毛囊炎及292例痤疮内马拉色菌检出的阳性率看，荧光染色法检出的阳性例数分别为145例占88.41%；156例占53.42%，而KOH湿片法检出的阳性例数为51例占31.09%；82例占28.08，二者有显著性差异。288例甲真菌病荧光染色法检出真菌的阳性例数为200例，占75.71%；KOH湿片法检出的阳性例数为138例占47.91%，两种检测方法检出真菌的阳性率有显著性差异，我们还对292例痤疮，156例疥疮用荧光染色法及KOH湿片法检出毛囊螨、疥螨的阳性率看，荧光染色法明显高于KOH湿片法。荧光染色法更易发现毛囊螨的卵及疥螨的卵壳、疥粪等。毛囊螨的卵在荧光染色法下可见呈蘑菇状，自前端向后逐渐增宽至卵体中部最宽，呈现亮蓝白色荧光，疥粪在荧光染色法下发蓝绿色荧光，呈长圆形而稍扁。疥螨的卵壳在寄生虫杂志已有报告，发现4种卵壳，其中有一种卵壳形态特殊，如同沿卵的长轴2/3处用刀子切开一样可见卵壳的裂缝，裂缝出形成“V”字开口[8]。用荧光染色法检出的卵壳更清晰、更明亮、更能观察卵壳的形态。所以，荧光染色法与KOH法比较，初学者易于掌握，能快速出报告，准确率高，值得皮肤科直接镜检检查中推广使用。