复方一枝蒿颗粒儿童用药有效剂量评价

2021-09-13孙静李俊郭姗姗李艳赵荣华时宇静高英杰姚荣妹崔晓兰石高攀

世界中医药 2021年14期

孙静李俊郭姗姗李艳赵荣华时宇静高英杰姚荣妹崔晓兰石高攀

摘要目的：探讨复方一枝蒿颗粒儿童用药的有效性及最佳有效剂量范围，为儿童临床用药的有效性及用法用量提供参考。方法：通过甲型H1N1流行性感冒病毒感染致幼龄小鼠肺炎模型及死亡模型观察复方一枝蒿颗粒的抗病毒作用;采用腹腔毛细血管通透性试验及棉球肉芽肿试验观察其抗炎作用;采用扭体试验观察其镇痛作用;采用金黄色葡萄球菌感染致幼龄小鼠死亡模型观察其抗菌作用，采用脂多糖（LPS）致幼龄家兔发热模型观察其解热作用。结果：复方一枝蒿颗粒0.7、0.9 g生药/（kg·d）2个剂量组可发挥稳定的抗病毒抗菌作用，并可显著抑制小鼠毛细血管通透性及大鼠棉球肉芽肿形成，减少小鼠扭体次数。结论：复方一枝蒿颗粒在0.7～0.9 g生药/（kg·d）剂量范围内对幼龄动物模型具有良好的抗病毒、抗菌、抗炎、镇痛作用。

关键词儿童用药;复方一枝蒿颗粒;抗病毒;抗炎;镇痛;甲型H1N1流行性感冒病毒;有效性;用法用量

Abstract Objective：To explore the efficacy and optimal effective dose range of Fufang Yizhihao Granules and provide the reference for the effectiveness and dosage of children′s clinical medication.Methods：The anti-viral effect was observed through the pneumonia model and death model of young mice caused by H1N1 influenza virus infection; the anti-inflammatory effect was observed by the abdominal capillary permeability test and the cotton ball granuloma test; writhing test was used to observe its analgesic effect; Staphylococcus aureus infection-induced death model of young mice was used to observe its antibacterial effect，and LPS-induced young rabbit fever model was used to observe its antipyretic effect.Results：0.7 and 0.9 g/（kg·d）（content of crude drugs ） of Fufang Yizhihao Granules had stable antiviral and antibacterial effects，inhibited capillary permeability and formation of rat cotton granuloma，and reduced the number of writhing times in mice.Conclusion：Fufang Yizhihao Granules have significant antiviral，antibacterial，anti-inflammatory and analgesic effects on young animal models in the range of 0.7～0.9 g/（kg·d）.

Keywords Children′s drugs; Fufang Yizhihao Granules; Antiviral; Anti-inflammatory; Analgesia;Type A H1N1 influenza virus; Effectiveness; Usage and dosage

中圖分类号：R285.5文献标识码：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2021.14.006

儿童（尤其是2～12岁）是流行性感冒（简称流感）的易感人群，据统计，在秋冬季节流感流行季，有30%～40%的学龄前及学龄期儿童会感染此病[1]。同时，儿童作为一个特殊群体，免疫系统发育不完善，抵抗力差，也是重症流感的高危人群[2-4]，在中重度流感患儿中约1/3会出现严重并发症如重症肺炎、急性呼吸窘迫综合征、急性坏死性脑病、心肌炎、脑膜炎等，危重症流感病死率可高达30%～50%[5-8]。

当前临床用于治疗流感的西药主要以神经氨酸酶抑制剂为首选，但其不良反应大，包括恶心、呕吐、皮疹和短暂的神经精神症状等，且易产生耐药性，并不适用于患儿[9]。中医药凭借其独特的优势，被广泛应用于临床治疗儿童流行性感冒，可有效减轻患儿病情，不良反应小，同时在改善患儿流感症状的同时，可提高机体免疫力，改善机体整体状况[10]。复方一枝蒿颗粒为新疆银朵兰维药股份有限公司已上市品种。功效主治为维医：清除“乃孜来”，解毒利咽。用于“乃孜来”所致的感冒、发烧、咽喉肿痛。中医：解表祛风，凉血解毒。用于邪毒所致的感冒发热、咽喉肿痛，病毒性感冒见上述证候者。本研究探讨复方一枝蒿颗粒儿童用药最佳剂量范围，为其儿童临床应用提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物幼龄ICR小鼠，3～4周龄，体质量（14.00±1.00）g，幼龄SD大鼠，4～5周龄，体质量（90.00±10.00）g，均为SPF级，雌雄各半，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，动物许可证号：SCXK（京）2012-0001;幼龄日本大耳白兔，3～4周龄，体质量1.00～1.50 kg，普通级，雌雄各半，由北京金牧阳实验动物养殖有限责任公司提供，动物许可证号：SCXK（京）2015-0005。实验中所有操作均遵循NIH及北京市实验动物伦理委员会的规定。

1.1.2 菌株和毒株金黄色葡萄球菌购自中国药品生物制品检定所菌种室，货号：26003，流感病毒（FM1和PR8株）购自中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所，货号：1469。

1.1.3 药物复方一枝蒿颗粒（试验用干浸膏粉，新疆银朵兰维药股份有限公司，生产批号：T160208）;小儿感冒颗粒（华润三九枣庄药业有限公司，生产批号：1409005）;阿莫西林胶囊（中诺药业石家庄有限公司，生产批号：257141225）;阿司匹林肠溶片（Bayer HealthCare Manufacturing S.r.l，意大利，生产批号：BJ26800）;利巴韦林颗粒（四川百利药业有限责任公司，生产批号：140928）。

1.1.4 试剂与仪器营养肉汤（中国药品生物制品鉴定所菌种室，批号：980226）;乙醚（北京化工厂，批号：20120131）;冰醋酸（国药集团化学试剂有限公司，批号：20141121）;伊文思蓝（中国医药公司北京采购供应站，批号：871226）;水合氯醛（天津市福晨化学试剂厂，批号：20141012）;脂多糖（SIGMA公司，美国，批号：044M4004V）。生物安全柜（Thermo，美国，型号：A2），电子分析天平（OhausCorp.Brock.WJ.，美国，型号：AR1140），电子天平（上海越平科学仪器有限公司，型号：YP1002），电子天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司，型號：AL204），电子天平（赛多利斯科学仪器北京有限公司，型号：BSA3202S-CW），电子台泵（大阳衡器有限公司，型号：TCS-100），恒温震荡培养箱（哈尔滨市冬联电子技术开发有限公司，型号：HZQ-F160），低温高速离心机（Eppendorf，德国，型号：5810R），多功能酶标仪（PerkinElmer公司，德国，型号：Enspire），兽用电子体温计（临海医疗仪器厂，型号：D-10）。

1.2 方法

1.2.1 分组与模型制备

1.2.1.1 流感病毒（PR8/FM1株）感染幼龄小鼠致肺炎模型将幼龄ICR小鼠按体质量等级随机分为正常对照组、模型对照组、利巴韦林对照组、小儿感冒颗粒对照组、复方一枝蒿9.9、7.7、5.5、2.2 g/（kg·d）剂量组，每组10只。除正常对照组外，将各组小鼠滴鼻感染流感病毒液PR8株和FM1株。

1.2.1.2 流感病毒（FM1/PR8株）感染幼龄小鼠死亡模型幼龄ICR小鼠按体质量等级随机分为模型对照组、利巴韦林对照组、小儿感冒颗粒对照组、复方一枝蒿9.9、7.7、5.5、2.2 g/（kg·d）剂量组，每组20只，雌雄各半。所有小鼠滴鼻感染流感病毒PR8株及FM1株。

1.2.1.3 幼龄小鼠急性炎症模型幼龄小鼠按体质量等级随机分为正常对照组、模型对照组、利巴韦林对照组、小儿感冒颗粒对照组、复方一枝蒿9.9、7.7、5.5、2.2 g/（kg·d）剂量组，每组10只。造模时小鼠腹腔注射1%冰醋酸溶液0.2 mL/只，并尾静脉注射0.5%伊文思蓝溶液0.2 mL/只。

1.2.1.4 幼龄大鼠慢性炎症模型幼龄SD大鼠麻醉后，用止血钳将棉球植入两侧腹股沟皮下，去除手术失败的动物，按体质量等级随机分为正常对照组、模型对照组、利巴韦林对照组、小儿感冒颗粒对照组、复方一枝蒿9.9、7.7、5.5、2.2 g/（kg·d）剂量组，每组10只。

1.2.1.5 冰醋酸致幼龄小鼠疼痛模型幼龄小鼠按体质量等级随机分为模型对照组、利巴韦林对照组、小儿感冒颗粒对照组、复方一枝蒿9.9、7.7、5.5、2.2 g/（kg·d）剂量组，每组10只。造模时小鼠腹腔注射1%冰醋酸溶液0.2 mL/只。

1.2.1.6 金黄色葡萄球菌感染致幼龄小鼠死亡模型幼龄小鼠按体质量等级随机分为模型对照组、利巴韦林对照组、小儿感冒颗粒对照组、复方一枝蒿9.9、7.7、5.5、2.2 g/（kg·d）剂量组，每组10只。第3天给药1 h后各组小鼠腹腔注射9×108个菌/mL的金黄色葡萄球菌菌液，0.2 mL/只。

1.2.1.7 脂多糖致幼龄家兔发热模型选取2 d内体温在38.40～40.00 ℃之间的幼龄家兔随机分为8组，每组6只。除正常对照组外其余各组耳缘静脉注射脂多糖250 ng/kg进行造模。

1.2.2 给药方法

1.2.2.1 剂量设置根据品种现在成人用量，采用4种换算方法均得到1～12岁小儿用量在6～20 g/d范围内（生药含量）[11-12]，即0.5～0.8 g/（kg·d）;故设定剂量范围为5、10、15、20 g/d，采用7岁小儿体质量为标准即得0.2、0.5、0.7、0.9 g/（kg·d）4个剂量，试验时换算得：小鼠：2.2、5.5、7.7、9.9 g/（kg·d）;大鼠：1.1、2.8、4.0、5.0 g/（kg·d）;家兔：0.6、1.5、2.1、2.7 g/（kg·d）。

1.2.2.2 流感病毒（PR8/FM1株）感染幼龄小鼠致肺炎模型给药方法感染1 h后各给药组灌胃给药，20 mL/kg，正常对照组及模型对照组同等条件下给蒸馏水，连续4 d。

1.2.2.3 流感病毒（FM1/PR8株）感染幼龄小鼠死亡模型给药方法感染1 h后各给药组灌胃给药，20 mL/kg，模型对照组同等条件下给蒸馏水，连续4 d。

1.2.1.4 幼龄小鼠急性炎症模型给药方法造模前各给药组灌胃给药，20 mL/kg，正常对照组及模型对照组同等条件下给蒸馏水，连续3 d。

1.2.1.5 幼龄大鼠慢性炎症模型给药方法造模当天各给药组灌胃给药，10 mL/kg，正常对照组及模型对照组同等条件下给蒸馏水，连续7 d。

1.2.1.6 冰醋酸致幼龄小鼠疼痛模型给药方法造模前各给药组灌胃给药，20 mL/kg，模型对照组同等条件下给蒸馏水，连续3 d。

1.2.1.7 金黄色葡萄球菌感染致幼龄小鼠死亡模型给药方法造模前各给药组灌胃给药，20 mL/kg，模型对照组同等条件下给蒸馏水，连续5 d。

1.2.1.8 脂多糖致幼龄家兔发热模型给药方法造模前各给药组灌胃给药1次，5 mL/kg，正常对照组及模型对照组同等条件下给蒸馏水。

1.2.3 检测指标与方法

1.2.3.1 流感病毒（PR8/FM1株）感染幼龄小鼠致肺炎模型检测指标与方法于第5天称量小鼠体质量，处死取肺组织称量肺重，计算肺指数及肺指数抑制率。肺指数=小鼠肺重/小鼠体质量;肺指数抑制率=（模型对照组肺指数-给药组肺指数）/（模型对照组肺指数-正常对照组肺指数）×100%[13]。

1.2.3.2 流感病毒（FM1/PR8株）感染幼龄小鼠死亡模型检测指标与方法观察记录2周内小鼠的死亡只数，计算死亡率、死亡保护率、平均存活天数和生命延长率。死亡率=（死亡只数/小鼠总数）×100%;死亡保护率=（模型组死亡率-给药组死亡率）/模型组死亡率×100%;生命延长率=（给药组存活天数-模型组存活天数）/模型组存活天数×100%[14]。

1.2.3.3 幼龄小鼠急性炎症模型检测指标与方法造模20 min后脱颈处死小鼠，用生理盐水冲洗腹腔并收集腹腔液。多功能酶标仪检测各组腹腔液590 nm处吸光度[15]。

1.2.3.4 幼龄大鼠慢性炎症模型检测指标与方法造模后第8天处死剥离棉球肉芽组织，60 ℃烘箱内干燥12 h后称重，减去棉球质量，即为肉芽质量，比较各组干肉芽质量[16-17]。

1.2.3.5 冰醋酸致幼龄小鼠疼痛模型检测指标与方法记录比较造模后小鼠15 min内扭体次数[18]。

1.2.3.6 金黄色葡萄球菌感染致幼龄小鼠死亡模型检测指标与方法观察记录7 d内小鼠死亡数计算死亡率、保护率、平均存活天数及生命延长率。死亡率=（死亡只数/小鼠总数）×100%;死亡保护率=（模型组死亡率-给药组死亡率）/模型组死亡率×100%;生命延长率=（给药组存活天数-模型组存活天数）/模型组存活天数×100%[19]。

1.2.3.7 脂多糖致幼龄家兔发热模型检测指标与方法分别测定造模后1 h、2 h、3 h、4 h的体温，以不同时间体温与造模前体温之差值为体温变化的指标[20]。

1.3 统计学方法采用SPSS 20.0统计软件进行数据分析，其中计数资料以百分率表示，采用χ2检验，计量资料以均数±标准差（±s）表示，采用t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 对流感病毒感染幼龄小鼠致肺炎模型的治疗作用复方一枝蒿4个剂量组均可抑制流感病毒FM1及PR8引起的肺指数增高，其中0.9 g生药/（kg·d）剂量组与FM1及PR8感染模型对照组比较差异均有统计学意义（均P<0.05），0.7 g和0.5 g生药/（kg·d）剂量组与FM1感染模型对照组比较差异有统计学意义（P<0.01）。见表1。

2.2 对流感病毒感染幼龄小鼠的死亡保护作用采用流感病毒PR8株和FM1株感染幼龄小鼠后，小鼠死亡率为均为80%;复方一枝蒿颗粒0.9、0.7、0.5 g生药/（kg·d）3个剂量组可显著降低PR8株感染所致小鼠死亡率、延長平均存活天数;0.9和0.7 g生药/（kg·d）2个剂量组可显著降低FM1株感染所致小鼠死亡率，延长平均存活天数。见表2～3。

2.3 抗炎作用实验结果显示复方一枝蒿4个剂量组均可显著抑制幼龄小鼠急性炎症反应和大鼠慢性炎症反应。见表4～5。

2.4 对冰醋酸致幼龄小鼠疼痛模型的影响复方一枝蒿0.9、0.7、0.5 g生药/（kg·d）3个剂量组可显著减少冰醋酸致小鼠疼痛的扭体次数，与模型对照组比较差异有统计学意义（P<0.05、P<0.01）。见表6。

2.5 对金黄色葡萄球菌感染致幼龄小鼠死亡的保护作用复方一枝蒿颗粒0.9、0.7、0.5 g生药/（kg·d）3个剂量组均可降低金黄色葡萄球菌感染幼龄小鼠死亡率，延长平均存活天数，其中0.9 g生药/（kg·d）剂量组与模型对照组比较差异有统计学意义（P<0.01）。见表7。

2.6 解热作用复方一枝蒿颗粒0.5 g生药/（kg·d）剂量组在给药后1 h、2 h、3 h，0.2 g生药/（kg·d）剂量组在给药后2 h，3 h可显著降低脂多糖所致幼龄家兔体温升高，与模型组比较差异有统计学意义（P<0.05）。见表8～9。

3 讨论

儿童作为一个特殊群体，一方面，由于机体免疫机制尚未发育完善，故抵抗力低下，极易患病，尤其是感染性疾病如流感等。另一方面，儿童对药物作用的敏感性高，肝肾代谢功能差，且药物易进入血脑屏障，因此在众多的药品不良反应和药害事件中，儿童成为主要受害群体之一[21]。《2016年儿童用药安全调查报告白皮书》显示，我国14岁以下儿童用药不良反应的发生率为成人的2～4倍，每年约有7 000名儿童死于药品不良反应，有超过3万名儿童因用药不当致聋或致肝肾功能损伤及神经系统损伤等。因此保障儿童安全合理用药需要全社会共同关注。据统计，我国现有儿童专属药品仅占总药品的1.7%，且儿科目录中约半数药品在儿科使用时没有标注儿童的用法用量，说明书中只标注“小儿酌减”等，给儿童用药安全带来极大隐患[22-23]。因此，明确儿童用药的用法用量，为儿童临床应用提供参考，对进一步提升儿童合理用药水平意义重大。

复方一枝蒿颗粒是维吾尔医学中治疗感冒的纯中药临床经验方，功效主治为维医：清除“乃孜来”，解毒利咽。用于“乃孜来”所致的感冒，发烧，咽喉肿痛。中医：解表祛风，凉血解毒。用于邪毒所致的感冒发热、咽喉肿痛，病毒性感冒见上述证候者。其主要成分新疆一枝蒿为菊科蒿属植物岩蒿的地上部分或全草，为新疆道地药材，《本草纲目拾遗》中记载产于巴里坤，具有清热解毒、消食健胃、凉血、止血和祛风湿等功效。复方一枝蒿颗粒临床上主要用于治疗感冒发热和咽喉肿痛，疗效确切[24]。本实验室前期研究表明其对儿童手足口病具有较好的预防和治疗效果[25]，在儿童用药方面具有较好的应用前景。

本研究采用已知成人用量换算儿童用量的计算方法（包括4种方法）设定1～12岁儿童的用药范围，采用与功效主治相关的主要药效学幼龄动物试验模型，对已设定剂量范围的有效性进行评价，探讨复方一枝蒿颗粒儿童用药的最佳剂量。结果表明，复方一枝蒿颗粒在0.9、0.7、0.5、0.2 g生药/（kg·d）剂量范围内对流感病毒FM1株及PR8株感染幼龄小鼠肺炎模型有明显治疗作用，对幼龄动物急、慢性炎症模型、疼痛模型及发热模型具有显著的抑制作用;对金黄色葡萄球菌引起的小鼠死亡具有显著的保护作用，且具有良好的量效相关性，其中0.9、0.7 g生药/（kg·d）剂量时可呈现明显稳定的药效结果。基于以上结果，并根据不同年龄段体质量中间值计算给药剂量范围，初步提出不同年龄段推荐剂量范围分别为1～3岁：7.0～12.6 g生药/d;4～6岁：11.2～18.0 g生药/d;7～12岁：15.4～22.8 g生药/d，根据实验结果将生药量与制剂包装用量（7.2 g生药/袋）进行折算，推荐复方一枝蒿颗粒儿童用药的用法用量为：1～3岁，1袋/次，1～2次/d;4～6岁，1袋/次，2～3次/d;7～12岁，2袋/次，1～2次/d。最终需根据临床试验结果、毒理学结果等确定复方一枝蒿颗粒小儿临床用药最佳用法用量。

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