高效液相色谱法测定三层共挤输液用管中芥酸酰胺含量*

李 莎，杨 柳，吴红洋，蒲道俊，余春梅，范能全△

（1.重庆市食品药品检验检测研究院，重庆401121；2.西南药业股份有限公司，重庆400038）

药用包装材料塑料制品如三层共挤输液用管等在药品行业应用十分广泛，由于塑料的分子结构及静电积累、物质扩散和贴合形成真空等，塑料薄膜在生产和使用过程中存在开口性差等问题，加入爽滑剂可减少该现象的发生[1]。爽滑剂芥酸酰胺能提高聚烯烃薄膜的开口性能[2]，具有优异的光滑度和耐黏着力，常作为薄膜的加工助剂[3]。芥酸酰胺能使小鼠行动变缓，认知能力下降，易水解为芥酸，引起皮肤损伤[4－6]。药品包装中的芥酸酰胺通过溶解和分子热运动迁移出来，其降解产物直接或间接促进有色化合物和有害物质形成[7]，给药品带来安全风险。目前，芥酸酰胺的检测方法主要有气相色谱(GC)法[8]、气相色谱－质谱（GC－MS）法[9]、红外光谱法[10]、高效液相色谱（HPLC）法[11]、液相色谱－质谱法[12－13]等。由于HPLC法检测芥酸酰胺具有良好的稳定性和灵敏度[14]，故本研究中建立了测定三层共挤输液用管中芥酸酰胺含量的HPLC法。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

安捷伦1260型液相色谱仪（日本Agilent公司）；XSE205型天平（瑞士梅特勒－托利多公司，精度为十万分之一）；ZM200型均质器（德国莱驰公司）；HHS－21－8型水浴锅（上海博讯实业有限公司医疗设备厂）；Milli－Q Advantage A10型超纯水机（法国默克密理博公司）。

1.2 试药

三层共挤输液用管（企业A，批号分别为836LA，836LD，836LF）；芥酸酰胺对照品（CATO公司，CAS号为112－84－5，批号为CCHM700539－1811，规格为25 g，纯度为87.4%）；乙腈（色谱级，安徽时联特种溶剂股份有限公司）；异丙醇（色谱级，成都市科隆化学品有限公司）；试验用水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Agilent Zorbax SB－C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈；流速：1.0 mL／min；柱温：60℃；检测波长：200 nm；进样量10 μL。在该色谱条件下，空白样品溶液和样品基质对芥酸酰胺的测定均无干扰，芥酸酰胺在6.706 min能得到较好分离，表明专属性较好。详见图1。

图1 高效液相色谱图1.erucamideA.Reference solution B.Spiked sample solution C.Blank sample solutionFig.1 HPLC chromatograms

2.2 溶液制备

取芥酸酰胺对照品0.058 57 g，精密称定，置100 mL容量瓶中，加异丙醇溶解并定容，得质量浓度为500μg／mL的对照品贮备液。临用前用异丙醇稀释成所需浓度的对照品溶液。取粉碎后的三层共挤输液用管2.5 g，精密称定，加25.0 mL异丙醇，用回流装置回流煮沸2 h，冷却至室温，用0.45 μm有机滤膜滤过，即得供试品溶液。同法制备缺三层共挤输液用管的空白样品溶液。

2.3 方法学考察

线性关系考察与检测限、定量限确定：分别吸取2.2项下对照品贮备液0.05，0.10，0.20，0.50，1.00，2.00，3.00 mL，置10 mL容量瓶中，加异丙醇配制成质量 浓 度 分 别 为5.12，10.24，20.48，51.19，102.38，204.76，307.14 μg／mL的系列对照品溶液，按2.1项下色谱条件进样测定，以峰面积（Y）为纵坐标、芥酸酰胺质量浓度（X，μg／mL）为横坐标绘制标准曲线，得回归方程Y＝6.658 62X－3.482 26，R2＝1.000（n＝7）。结果表明，芥酸酰胺的质量浓度在5.12～307.14 μg／mL范围内与峰面积线性关系良好。将上述对照品溶液逐级稀释，按2.1项下色谱条件进样测定，以信噪比(S／N)为3时的质量浓度为检测限，以S／N为10时的质量浓度为定量限。结果检测限为0.16 μg／mL，定量限为0.50 μg／mL。

精密度试验：取线性关系考察项下质量浓度为51.19 μg／mL的对照品溶液10 μL，按2.1项下色谱条件连续进样6次，记录峰面积。结果芥酸酰胺峰面积的RSD为0.19%（n＝6），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取线性关系考察项下质量浓度为102.38 μg／mL的对照品溶液10 μL，分别于0 h和11 h时进样测定，记录峰面积。结果芥酸酰胺峰面积的变化率为5.03%，表明对照品溶液在11 h内稳定。

重复性试验：取样品（批号为836LA）适量，精密称定，依法制备供试品溶液，共6份，按2.1项下色谱条件进样测定，并计算样品含量。结果芥酸酰胺含量的RSD为0.93%（n＝6），表明方法重复性良好。

加样回收试验：取样品（批号为836LA）2.5 g，精密称定，共9份，依法制备供试品溶液，分别精密加入混合对照品溶液（质量浓度为1 023.80 μg／mL）2.0，2.5，3.0 mL，平行3份，按2.1项下色谱条件进样测定，并计算回收率。结果见表1。

表1 三层共挤输液用管中芥酸酰胺加样回收试验结果（n＝9）Tab.1 Results of the recovery test of erucamide in three－layer co－extrusion infusion tube（n＝9）

2.4 样品含量测定

取样品（批号分别为836LA，836LD，836LF），依法制备供试品溶液，按2.1项下色谱条件进样测定，并计算含量。结果三层共挤输液用管中芥酸酰胺的含量分别为0.14%，0.09%，0.11%。

3 讨论

试验结果发现，所测三层共挤输液用管提取液中均检测出芥酸酰胺，含量为0.09%～0.14%，提示药品生产企业应对三层共挤输液用管药包材中的芥酸酰胺进行监控，综合考虑选择适宜的药品包装材料。本研究中建立的HPLC法符合三层共挤输液用管中芥酸酰胺含量的分析要求，为药品与药包材相容性研究中芥酸酰胺的分析提供了参考，也对芥酸酰胺国内检测标准的制订有一定参考价值。该方法操作简便，结果准确，重复性好，可用于三层共挤输液用管中芥酸酰胺含量的测定。