藤茶的药代分布及其与牛蒡子配伍的临床观察

祝日荣 杨溢 倪强 孙睿 雷雨

摘要： 目的 研究藤茶的药代分布情况及其与牛蒡子配伍的临床功效。方法 采用不同剂量喂养大鼠36天，末次给药1 h测量其心、肺、肝、脾、肾、心血组织样品中的二氢杨梅素含量;选取105例慢性咽炎人志愿受试者，随机分为试食组和对照组，分别为53例、52例，连续给药30天，观察试食前后的安全性和功效性指标，采用自身对照，组间对照统计分析。结果 大鼠各项组织中均未检出二氢杨梅素;临床试食未见明显不良反应，安全性指标正常，试食组临床症状及清咽体征有效率分别为62.05%、57.63%，高于对照组改善率，差异有统计学意义。结论 藤茶与牛蒡子配伍具有良好的清咽功效，且在该试验剂量下安全性高。

关键词：藤茶 ; 牛蒡子 ; 高效液相 ; 慢性咽炎

Abstract： Objective To study the Pharmacokinetics distribution of Ampelopsis grossedentata and the clinical efficacy of compatibility with Fructus arctiine. Methods The rats were fed with diffe-rent doses for 36 days， and the content of dihydromyricetin in the heart， lung， liver， spleen， kidney， heart and blood tissue samples was measured 1 hour after the last dose ; Choose 105 patients with chronic pharyngitis who are voluntarily tested， and randomly divide them into a test group with 53 cases and a control group with 52 cases. The drugs are continuously administered for 30 days. The safety and efficacy indicators of each group before and after the test are observed. Contrast statis-tical analysis.Results No residues of dihydromyricetin were detected in rat tissues ; There were no obvious adverse reactions in the clinic， and the safety indicators were normal. The effective rates of clinical symptoms and pharynx clearing signs in the test group were 62.05% and 57.63%， respectively， which were higher than the improvement rate in the control group， and the difference was statistically significant. Conclusion The compatibility of Ampelopsis grossedentata and Fructus arctiine has a good pharynx clearing effect， and the safety is high at this test dose.

Key words：Ampelopsis grossedentata ; Fructus arctiine ; HPLC ; Chronic pharyngitis

【中图分类号】R4  【文献标识码】A  【文章编号】1673-9026（2021）09-056-02

显齿蛇葡萄叶（Ampelopsis grossedentata），是葡萄科蛇葡萄属显齿蛇葡萄的茎叶，贵州等地多称作藤茶或霉茶。2013年显齿蛇葡萄叶被批准为新食品原料，藤茶具有清热降压，平肝利湿，活血通络的功效。藤茶中富含黄酮类化合物，其中二氢杨梅素（dihydromyricelin，DMY）高达18%以上，是其标志性成分。有许多试验研究发现藤茶和二氢杨梅素具有抗氧化、抗炎症、解酒醒酒、保肝、抗病原体、抗微生物、抗肿瘤及调血脂等多方面的药理作用[1-2]。苏东林等[3]利用二氢杨梅素对大鼠灌胃14天，实验毒性小，可耐受剂量为5 g/kg。钟正贤等[4]证明大鼠长期进食藤茶中总黄酮成分后未发现明显毒性，推段临床拟用剂量安全。欧贤红等[5]给予家兔口服二氢杨梅素，结果表明二氢杨梅素进入家兔体内后表现出吸收迅速、分布范围广泛、代谢速度快、半衰期短的特征。牛蒡子，药典载明其为菊科二年生草本植物牛蒡（Arctium lappa L.）的干燥成熟果实，药物功效包括疏散风热、宣肺祛痰、利咽透疹和解毒消肿[6-7]。本项目组通过研究藤茶中二氢杨梅素药代动力学分布特征及其与牛蒡子配伍的临床观察，充分研究该配伍的安全性及功效性。确保藤茶牛蒡子配伍用药安全的前提下，对后续清咽功能的保健食品开发提供了实验依据。

1 材料与方法

1.1 药材与试剂

藤茶（采购自贵州江口梵净山云峰野生植物开发有限公司，批号20180620）;牛蒡子（采购自安国市深豪药业有限公司，批号171101）;藤茶牛蒡子受试物（牛蒡子以生药量计，服用量约4 g/d）;藤茶牛蒡子浓缩液（藤茶牛蒡子受试物与无菌水按比例提取、浓缩，即得）;二氢杨梅素对照品（18031501，成都曼斯特生物科技有限公司）;二氢槲皮素对照品（AF20041364，成都埃法生物科技有限公司）;甲醇、磷酸、乙酸乙酯、醋酸、醋酸鈉、生理盐水等均购自北京化工厂。

1.2 仪器

高效液相色谱仪（安捷伦，型号：Agilent 1290，检测器：DAD）;电子天平（QHAMS型）;微型涡旋混匀器（IKA VORTEX GENIUS 3）;低温离心机（SIGMA3-16P）;手持微量电动组织匀浆器（LEOPARD S-18KS）;氮气吹扫仪（QGC-12T）。

1.3 动物及饲料

SPF级SD雄性大鼠48只，10周龄，体重170g—200g，从北京华阜康生物科技股份有限公司采购（简称：华阜康），华阜康许可证号：SCXK（京）2019-0008。SD大鼠饲养于北京联合大学的应用文理学院保健食品功能检测中心动物室，实验室级别为SPF级，动物室许可证号：SYXK（京）2017-0038。所有大鼠均分笼饲养，动物室的室温控制在（25±2）℃，试验期间大鼠均为自由摄食、饮水模式。维持饲料由华阜康生产提供。

1.4 研究对象筛选

由CDC伦理委员会批准，自2021年初于天津市第三中心医院随机抽取慢性咽炎者105例，受试者纳入与排除标准详见2012年食药监局发布的“抗氧化功能评价方法等9个保健功能评价方法印发[8]”中附件9“清咽功能评价方法”。本次试食试验开始前召集所有受试者开展了座谈会，同时签署了试验知情同意书。

2 方法

2.1 动物试食分组

大鼠随机平分4组，分别设定空白对照组、低、中、高三个剂量组，即0.38 g/kg、0.75 g/kg、2.25 g/kg，灌胃给药剂量均以生药计。经口给予大鼠受试物36 d，实验结束当天给受试物1 h后，将大鼠断颈处死。将受试大鼠的心、肺、肝、脾、肾、心血组织样品剥离留样，独立分装称重。按W ： V加入6倍量生理盐水，冰上匀浆，4000 r/min离心15 min，取组织匀浆上清液200 ?L，置于10 mL的具塞离心管里，再加入甲醇50 ?L，然后加入10 ?L1内标溶液（101 ?L/mL），最后再加入400 ?L醋酸緩冲液（pH 4.5），涡旋1 min，然后加入4 mL乙酸乙酯。再次涡旋2 min，转速4000 r/min，离心时间10 min，吸取上清液，于常温下用氮气吹干，取150 ?L流动相溶解残留物，涡旋30 s，然后离心3 min，最后吸取适量上清液，用HPLC液相色谱法进行检测。

2.2 检测方法

2.2.1 色谱条件

色谱柱：Agilent C18柱（柱参数：250 mm × 4.6 mm ， 5 ?m）;流动相：甲醇 - 0.05 %磷酸水溶液（30 ： 70）;流动相流速：1 ml/min;检测波长291 nm;柱温25 ℃;进样量10 ?l;运行时间20 min;理论塔板数按二氢杨梅素计算不低于3 000[7]。二氢杨梅素保留时间为6.68 min，二氢槲皮素保留时间为13.75 min，如图1所示获得样品色谱图。

2.2.2 方法学考察

样品同日内重复进样6次，连续进样3天，考察该方法仪器的精密度。样品常温放置4 h、反复冻融3次以及冰箱4 ℃放置12 h，考察该样品的稳定性。冷冻（-20 ℃）保存15 d，考察该样品的长期稳定性。参照“2.1”样品处理方法，考察该处理方法的加样回收率。

结果显示，二氢杨梅素在0.019 9～0.318 mg / ml范围内线性良好，定量下限为0.019 9mg/ml，日内、日间精密度RSD绝对值均小于8.4 %;样品稳定性RSD绝对值均小于11.5 %;加样回收率均大于85%，RSD绝对值均小于9.3 %，符合生物样品分析方法指导原则。图2为专属性考察中空白组织与加入对照品二氢杨梅素及外标品二氢槲皮素的专属性指纹图谱。

2.3 人体试食分组

藤茶牛蒡子受试物由某研究所提供，以袋泡茶为剂型，连续饮用30天，每日3次，每次1袋，沸水冲泡后饮用，对照组采用空白对照。试验期间受试者保持原有的饮食习惯，用组间对照和自身对照两种试验设计。受试者按咽部症状体征随机分为试食组和对照组，分组时考虑病程、年龄和性别等因素，进行均衡性比较。

2.4 安全性与功效性观察指标[8-9]

记录受试者试食前后的精神、睡眠、饮食、大小便等项目，进行血、尿、便常规及血生化指标检查。试食前进行胸透、心电图和腹部B超检查，试验开始及结束时观察症状体征。

按咽部症状的轻重计算积分（1度1分、2度2分、3度3分），检查咽部粘膜充血、咽后壁滤泡增生、粘膜水肿等体征，按轻、中、重分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级。记录试食前后症状、体征积分和改善情况。症状减轻1度、咽部体征检查结果减轻Ⅰ级为有效，症状、体征均无显著性改善为无效。

2.5 质量控制[9]

试食过程中调查记录员和操作员均都经过了规范化培训，全都考核合格。现场调查及试食均由他们全程进行监督，及时进行查漏补缺，严格按照操作规程开展试验，按要求进行样本的采集、储运和检测。

2.6 统计学方法

采用SPSS 16.0统计软件分析，计量数据以均数±标准差（ ）表示，采用t检验;计数数据以率（%）表示，采用X2检验，P < 0.05为显著性差异，P < 0.01为极显著性差异，均证明该数据具有统计学意义。

3 结果

3.1 样品检测

大鼠经灌胃给予不同剂量的受试物1 h后，其心、肺、肝、脾、肾、心血组织样品均未检出二氢杨梅素，表明该指标成分在大鼠体内迅速得实现消解，即在体内不容易产生蓄积，胃肠道吸收快，也就是说药效能够快速实现。由此推断二氢杨梅素的血药浓度达峰迅速，半衰期不超过0.5 h。

3.2人体试食实验

清咽功能人体试食实验原理是试食组自身比较及试食组与对照组组间比较，咽部临床症状、体征积分明显降低，且症状、体征改善率较对照组有明显增加，差异有显著性，可判定该受试样品具有清咽功能。

3.2.1一般情况

初始试验时113例符合要求的受试者（对照组56例，试食组57例），试食组和对照组各有4例未在规定时间复查，按标准排除，试食有效病例105例（对照组52例、试食组53例），各失访4例，试验脱离率分别为7.1%，7.0%。试食期间对照组58.44±6.76岁（男12人、女40人;病程2.38±0.95年）;试食组57.55±7.89岁（男9人、女44人;病程2.13±0.86年），两组差异均没有统计学意义。

3.2.2安全性观察

饮用30天后，两组人员的精神、睡眠、饮食、大小便、体重、血压和心率未见明显异常;血、尿、便常规等血生化指标结果均正常，未见过敏及其他不良反应（恶心、胀气、腹泻、腹痛等）。

试食前后上述各项指标均基本在正常范围。

3.2.3临床症状、体征改善有效率

试食后试食组咽痛、咽痒、咽干、干咳、咽异物感和多言加重等咽部症状减轻有效率均高于对照组;试食组总有效率（62.05%）高于对照组（9.63%），见表1。

试食后试食组黏膜充血、水肿、咽喉壁淋巴滤泡增生和分泌物附着等体征检查结果减轻有效率均高于对照组;试食组总有效率（57.63%）高于对照组（10.53%），见表2。

3.2.4 临床症状、体征积分值比较

试食组试食后的症状与体征积分均有一定程度的降低，与试食前自身、试食后对照组比较，差异都有统计学意义（P < 0.001），数据详见表3。

4 討论

慢性咽炎以脏腑亏损、虚火上炎多见，如《医学纲目》卷十五曰：“喉疮多虚火，游行不利客于咽喉”。吸烟、饮酒等不良习惯，可大大加重群众患慢性咽炎的概率，具有清咽功能保健食品的开发迫在眉睫[10]。本着未病先治的中医理论，本文利用藤茶与传统中药牛蒡子配伍治疗慢性咽炎，探究其安全性与功效性。参照国家食品药品监督管理总局2012年保健食品评价方法中心附件9清咽功能的评价方法，采用自身和组间对照两种实验，验证该配伍剂量下的藤茶牛蒡子受试物对人体健康无明显不良影响。指标性成分二氢杨梅素动物体内半衰期较短，消除快且不易蓄积，两者配伍在该剂量下安全性高。

在配伍安全的前提下进行功效验证可知，受试人体病情症状及体征改善明显，有效率远高于对照组。另外，茶饮的方式更有利于药物作用于局部，加速咽部炎症好转，从而起到局部与全身治疗的双重作用，进一步提高疗效[11]。且茶饮简便易行，患者依从性好，适宜居家缓解咽部不适。

参考文献：

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[8]佚名. 食药监局：抗氧化功能评价方法等9个保健功能评价方法印发[J]. 中国食品， 2012， 000（011）：45-45.

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