清解颗粒制备工艺、质量标准及抗病毒的研究

摘 要：清解颗粒是由生石膏670g、金银花500g、黄芪380g、桔梗365g、黄芩335g、板蓝根320g、栀子310g、连翘300g、大青叶280g、甘草270g、生姜125g、蒲公英100g、杜仲（炮制、适量）、茯苓（适量）、桑白皮（少许）等十八味中药制成，具有清热解毒、补脾益气、祛痰止咳、利水消肿、敛疮生肌、安胎的功效。本方剂是在《中華人民共和国药典》（2020年版）一部成方制剂和单味制剂“清热解毒口服液”“清热解毒片”基础上，并结合民间验方配伍而成。经可重复性试验验证：本新药制剂——清解颗粒具有显著的抗病毒作用、安全可靠性高、尚无明显毒副作用、生产工艺便捷、储存携带方便等优势。

关键词：新药研发;清解颗粒;药理活性;质量标准;抗病毒

一、绪论

通过本项课题研发制备的新药制剂——清解颗粒是根据《中华人民共和国药典》（2020年版）一部成方制剂和单味制剂“清热解毒口服液”“清热解毒片”基础上，并结合民间验方配伍而成，有效地节省了研发投入成本和研发周期，拓宽了新型中药制剂研发的路径，对发展、传承和创新中医药事业具有里程碑作用。

二、处方中各主要药物及关键辅料的研究概况

石膏（CaSO4·2H2O）经炮制后所得溶液具有明显的解热作用，且对正常体温无降温作用，试验过程中发现，在用药55～90mins时，对试验用小白鼠、家兔和禽类（蛋鸡、肉食鸭）体温下降显著、呼吸减缓至正常水平，有效提高了动物体内代谢酶的活性和免疫活性。

金银花学名忍冬（拉丁文Lonicera japonica Thunb.）属多年生半常绿缠绕灌木。它在中国大部分地区多有分布，日本和朝鲜亦有出产，最早在《名医别录》中记载，并被列为上品。其性寒，味甘，入肺、心、胃经，其主要含有绿原酸、木犀草素苷等化学成分，对上呼吸道感染致病病毒和细菌等有较强的抑制力，且具有抗炎、解热、增强免疫力等作用。

黄芪为多年生草本豆科植物蒙古黄芪的根，始载于《神农本草经》作“黄耆”演变而来。其含多种黄酮类化学成分，黄芪多糖类物质是一种干扰素诱导剂，对结核菌感染有明显对抗作用，其抗病毒机理：通过激发巨噬细胞和T细胞的功能，促使E环形成细胞数分裂增加，促生细胞因子，诱生白细胞介素，进而使内源性干扰素在动物体内产生，最终起到抗病毒的作用。

β—环糊精包合技术是利用β—环糊精自身特有的管状结构及疏水性空腔包合药物有效成分，同时具有延长药物保质期、提高药物溶解度、调节释药速度、规避部分不良气味、减少刺激性和部分毒副作用等。

三、清解颗粒常规项（粒度、总灰分等）及溶化性研究

分别通过烘干法、甲苯法、减压干燥法和气相色谱法对本生产工艺所制备的连续三批次清解颗粒进行水分测定，通过以上方法测定的水分含量如下表：

在相对密闭的环境下贮存24个月后，本中药颗粒制剂按照水分测定法（通则0832）测定，测得其水分含量4.9%，远低于8.0%的国家药典标准。在80℃下通过减压干燥至恒重，测得其减失重量为1.53%，低于国家药典规定的2.0%。

随机抽取供试品10g，常温条件下（温度25℃，湿度45%）加入200ml22℃温水，匀速搅拌边观察边记录，搅拌至210s时，完全溶解，溶液呈铬黄色;当室温为4℃时，随机抽取供试品10g，加入200ml4℃水，均速搅拌180s静置，当280s时，完全溶解，溶液仍呈铬黄色。将以上溶液分别静置6H、12H、24H、48H、72H后观察，12H时溶液有轻微浑浊但无明显析出物，过滤后所得粉末沉淀5.7mg，总灰分11.4μg。采用蒸发皿蒸发、浓缩过程中，有少许晶体粉末析出。

四、制剂分剂量的研究

（一）试验材料及分析

1.试验动物

（1）清洁级昆明小鼠，雄性，体重20g～22g，共50只。由山东大学趵突泉校区动物实验中心提供和饲养。

（2）清洁级Wistar大鼠，雄性，体重190g～210g，共50只。由山东大学趵突泉校区动物实验中心提供和饲养。

在常温下饲养15d后，将以上试验动物按10只每组分组，依次分为空白组、常规组、清热解毒口服液组、清热解毒片组和清解颗粒组进行试验。

2.喂食及给药方法

采用定时定量投食法进行饲养，给药前12h进行病毒感染，每天一次灌胃法连续给药，且给药剂量相同，灌药周期10d，每12小时检测其排便、体重等数值，每天进行X线检查，期末进行解剖化验分析。其中常规组采用灌入阿司匹林溶液、空白组采用灌入生理盐水。

试验第3d率先出现自身免疫组别（清解颗粒组）

在《药典》成方制剂、单味制剂、民间验方基础上配伍而成，根据药效学试验结果得出，通过以上清解颗粒工艺流程制备日服用（按照成人体重60Kg计算）生药所得中药颗粒45g，需生药量133g。

（二）试验仪器、试剂及色谱分析

色谱柱：InertSustain C18 5μm 250×4.6mm，乙腈为色谱纯，水为注射用水，其他试剂为分析纯;清解颗粒：潍坊永和药业有限公司（潍坊市）企业技术中心提供。

流速：1ml/min柱温：25℃检测波长：276nm进样量：5μl柱压：107bar

对照品溶液的制备：依次取黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素四种对照品适量，精密测定，加入70%甲醇制成每1ml含黄芩苷300μg、黄芩素50μg、汉黄芩苷80μg、汉黄芩素20μg的混合溶液，即得。

供试品溶液的制备：取本颗粒制剂装量差异下的内容物0.1g，研磨至细粉，精密测定，置150ml锥形瓶内，加入70%甲醇50ml，密塞，称定总重量，超声处理（功率400W，频率100kHz）15mins，于室温静置放冷，再称定总重量，用70%甲醇补足其失重，摇匀，滤过，取续滤液，即得。从而得出如下图谱：

从液相图谱中可得如下评判数据表格：

五、结语

经如上工艺制备而得的中药清解颗粒呈铬黄色或土黄色、气微、无异味（无焦灼味、无苦味），经实验室实验、临床试验和定向投放应用验证：其具有显著的抗病毒和激发自身免疫作用、安全可靠性高、重现性高、尚无明显毒副作用，且生产工艺便捷、储存携带方便等优点为其推广应用占据了优势。

参考文献：

[1]仝欣.黄芪主要活性成分的药理作用[J].时珍国医国药，2011，22（05）：1246-1249.

[2]马兴铭，丁剑冰主编.医学免疫学[M].北京：清华大学出版社，2013.

[3]杭婧，施一公.剪接体的三维结构及基因剪接的分子机理研究[J].科技导报，2016，34（13）：15-19.

[4]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2020.

项目：潍坊市寒亭区应用技术研究与开发项目：清解颗粒在蛋鸡抗病毒作用的应用研究（ZJ202004）

作者简介：尹海德（1990— ），男，汉族，中共党员，本科，工程师，山东省中药原植物科普教育基地办公室主任，山东省科技特派员，寒亭区高里街道青年工作共建委员会成员，潍坊永和药业有限公司副总经理兼办公室主任，（潍坊市企业）技术中心主任，“两新”团组织书记，潍坊江源生物科技有限公司副总经理，潍坊市工程研究中心主任，山东工业技师学院机电工程系专业课讲师。