p16/Ki67双染在宫颈病变患者筛查中的价值

陈春燕，张仁超，王少晓

［1.深圳市宝安区福永人民医院 病理科，广东 深圳 518000；2.中国科学院大学深圳医院（光明）病理科，广东 深圳518000］

宫颈癌是的常见妇科肿瘤之一，其发病与生 物学因素、行为因素及遗传因素相关，是多种因素综合产生的结果，近年来其发病率逐渐增加，全世界每年新发约50 万例，死亡约20 万例，给女性生命健康安全造成严重威胁［1］。宫颈薄层细胞学（TCT）和人乳头瘤病毒（HPV）筛查是当前宫颈癌筛查的主要手段［2］。而HPV 检测并不能区分一过性病毒感染和持续性病毒感染，细胞学检测则受限于医生的操作技术和本身的灵敏度，使得寻找更为相关的客观指标，及早筛查宫颈病变患者，是当前重要的研究问题［3］。本研究中对80例宫颈病变患者的p16/Ki67 进行免疫染色检测，探究p16/Ki67 染色在临床病变筛查中的应用。

1 资料与方法

1.1 一般资料

以2017 年1 月至2020 年1 月在深圳市宝安区福永人民医院进行筛查的宫颈病变患者80 例为研究对象。纳入标准：①年龄34～62 岁；②经子宫颈刮片细胞学检测为意义不明的不典型鳞状细胞（ASC-US）及以上；③通过宫颈活体组织检查确定病变等级；④能够配合研究且资料完整。排除标准：①存在盆腔放疗史；②存在宫颈病史；③怀孕患者；④应用免疫性药物治疗；⑤存在免疫系统疾病。本研究经医院伦理委员会审批。

1.2 方法

以取样刷采集宫颈脱落细胞，用消化液（清洗液∶冰醋酸为9∶1）处理洗去黏液和血液，4℃环境下保存。由操作经验丰富的医师制备细胞涂片、制片并阅片，参照TBS 标准描述诊断结果［4］。细胞学检测阳性（ASC-US 及以上）的患者采集子宫颈活体组织进行病理检查，根据结果进行对症处理。

使用APTIMA HPV Assay 试剂盒（美国豪洛捷）和PANTHER System 检测系统（美国豪洛捷）对样本中HPV E6 和E7 的表达进行检测，操作步骤按照说明书进行。此方法仅可对定性检测高危型HPV，不可区分病毒的确切类型。

使用p16/Ki67 检测试剂盒（福州迈新）进行免疫组织化学染色，步骤严格按照说明书要求操作，由专业技术人员观察染色结果并判断。判断标准为：同一细胞细胞核呈褐色或黄色且细胞质呈红色为阳性，同一细胞仅见一种颜色或未见颜色为阴性［5］。

1.3 统计学方法

采用SPSS 20.0 软件进行数据的统计分析。计数资料以百分率（%）表示，行χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 宫颈病变检查结果

80 例研究对象中TCT 检查为ASC-US 59 例，不能排除高度上皮内病变的不典型鳞状上皮（ASC-H）4 例，低度鳞状上皮内病变（LSIL）14例，高度鳞状上皮内病变（HSIL）3 例。p16/Ki67染色阳性共45 例，ASC-US、ASC-H、LSIL 和HSIL 分级患者中p16/Ki67 阳性比例分别为45.76%、75.00%、85.71% 和100.00%，随着TCT分级增加，p16/Ki67 染色的阳性率增加，差异有统计学意义（P<0.05）；HPV 阳性共54 例，ASCUS、ASC-H、LSIL 和HSIL 分级患者中HPV 阳性比例分别 为 66.10%、50.00%、71.43% 和100.00%，不同TCT 分级患者的HPV 阳性率间差异无统计学意义（P>0.05）。见表1。

表1 p16/Ki67 染色和HPV 检测在不同宫颈病变患者中的比较（例）

2.2 p16/Ki67 染色和HPV 检测的敏感性和特异性

组织学检查为金标准，80 例患者中诊断为LSIL 及以上病变者17 例，LSIL 以下病变者63 例。p16/Ki67 双染诊断LSIL 及以上病变的敏感性为88.24%，特异性为52.38%；HPV 检测LSIL 以下病变的敏感性为76.47%，特异性为34.92%。p16/Ki67染色和HPV 检测的敏感性间差异无统计学意义（χ2=0.366,P=0.545），特异性间差异有统计学意义（χ2=3.904,P=0.048）。见表2。

表2 p16/Ki67 染色和HPV 检测的敏感性和特异性（例）

3 讨论

宫颈癌是威胁女性生命安全的第二大恶性肿瘤，在中低收入国家中其发病和死亡情况均仅次于乳腺癌，位居第2 位，进行有效筛查和预防是宫颈癌防治的重要措施［6］。进行宫颈癌筛查和接种HPV 疫苗是国际上推荐的防控方案，但HPV疫苗接种率仍处于较低水平，有效筛查仍是女性预防宫颈癌及宫颈病变的重要手段［7］。细胞学检查、阴道镜检查和组织学检查是宫颈病变诊断的主要步骤，TCT 是宫颈病变检查的第一步，根据TBS 分类标准可将患者分为：正常范围（NILM）、ASC-US、ASC-H、LSIL 和HSIL，诊断为ASC-US及以上的患者为阳性，阳性患者进行阴道镜检查和组织学检查，而细胞学检查对技术人员操作有一定要求，且有漏检的情况［8］。

美国阴道镜和宫颈病例学会和美国病理医师学会在2012 年发布的指南中提出，分子生物学标志物Ki67 和p16 可用于宫颈癌前上皮细胞病变的辅助诊断［9］。p16 能够通过抑制细胞周期依赖性蛋白激酶的活性抑制增殖，HPV 整合感染可导致p16 蛋白表达上调，Ki67 表达在细胞的有丝分裂期，是细胞增殖的有效标记［10-11］。本研究中所有研究对象均为TCT 检查阳性患者，其中ASC-US、ASC-H、LSIL 和HSIL 患者所占比例分别为73.75%、5.00%、17.50%和3.75%，p16/Ki67 染色阳性在不同分级的患者中阳性率的差异有统计学意义，病变越严重，阳性率越高，与宫颈病变的发展导致细胞迅速增殖有关。

HPV 感染是宫颈病变的风险因素，持续的病毒感染可能伴随HPV DNA 整合至宿主细胞基因组中，导致E6 和E7 蛋白过表达，下调抑癌基因LRP1B 和FHIT 的表达，上调癌基因HMGA2 和MYC 的表达，引发宫颈上皮细胞癌变［12］。本研究中HPV 检测阳性在ASC-US、ASC-H、LSIL 和HSIL 患者所占比例分别为66.10%、50.00%、71.43% 和100.00%，阳性率有升高的趋势，朱梅娟［13］对260 例行组织学检查的患者分析，结果显示患者病变越严重，HPV 检测阳性率越高，与本研究结果一致，提示对女性群体进行HPV 感染的检测能够辅助诊断宫颈病变，有利于对HPV 阳性患者及早干预。

官燕飞等［14］对p16/Ki67 双染和HPV 检测对低级别鳞状上皮内病变分流诊断的价值进行分析，结果显示p16/Ki67 染色、HPV 检测和联合检测均显示出良好的诊断效率，在患者分流管理中有积极的临床意义。有报道显示p16/ki67 染色可降低阴道镜转诊率，本研究中p16/Ki67 染色用于诊断的敏感性为88.24%，与HPV 检测的敏感性无显著性差异，p16/Ki67 染色用于诊断的特异性为52.38%，显著高于HPV 检测的特异性。和细胞学检查及HPV 检测比较起来，p16/Ki67 染色无创高效，操作简单，便于掌握，且价格经济，更适合推广至医疗设施和经济发展不够发达的农村地区，重要的临床意义。

综上所述，p16/Ki67 染色阳性与患者的病变分级相关，在对宫颈癌病变的诊断中显示出良好的敏感性和特异性，可用于宫颈癌筛查的辅助诊断，有重要的参考价值。