一种蛹虫草配伍的新工艺酒对小鼠免疫功能调节作用研究

何 迅，郭 宾，左浩江，杨素红，杨 华，李治中，邹晓莉，李 蓉，许 欣，裴晓方

(1.四川大学华西公共卫生学院(华西第四医院),四川成都 610041；2.宜宾五粮液仙林生态酒业有限公司，四川宜宾 644000)

我国酒文化绵延千年、独具特色。《本草纲目》记载烧酒具有“消冷积寒气，燥湿痰，开郁结，止水泄；治霍乱疟疾噎膈、心腹冷痛、阴毒欲死；杀虫辟瘴，利小便，坚大便，洗赤目肿痛”等功效。现代中医也认为适量饮酒具有增进食欲、舒缓情绪、消除疲劳、活血通脉、助药吸收等作用。近期研究还发现适量用饮低度酒与心血管风险呈负相关[1-2]。随着人们生活水平提高，公众对酒的需求持续增加，健康饮酒的理念也逐渐深入人心。与传统白酒相比，消费者更愿意选择兼具传统风味和保健功能的产品。因此，近年来我国保健酒广受青睐，市场蓬勃发展，增长率已超过白酒。

蛹虫草是保健酒常用的泡制材料。蛹虫草又称北冬虫夏草，与冬虫夏草有相似的功效成分与药理作用[3-4]，可参与宿主免疫调节[5-12]，并具有缓解肝损伤[13]、调节血糖、改善胰岛素抵抗、抗氧化等多种功效。此外，蛹虫草中虫草多糖、虫草素、超氧化物歧化酶等活性成分还明显高于冬虫夏草[14-15]，加之成品酒的口味醇和、成本较低、人工培育质量可控等优点，作为野生冬虫夏草的替代品已获广泛认可[15-16]，并被尝试用于白酒、黄酒、米酒、啤酒、葡萄酒、茶酒、客家娘酒等多种酒类产品。另有研究发现，蛹虫草可通过竞争性抑制黄嘌呤氧化酶活性，降低体内尿酸含量，具有防治高尿酸血症和痛风的潜质[17-18]。结合上述研究，与传统白酒相比，以蛹虫草配伍的保健酒可望具有多种保健功效。此外，不同白酒的非酒精成分具有不同功效，目前缺乏以头部川酒为基酒的保健酒尝试，其对宿主免疫功效也尚不清楚。

新工艺酒是五粮液基酒配以蛹虫草为主自主研制的保健酒。该酒既保持了五粮液的独特风味，又充分保留了蛹虫草为主要材料的滋养调补功效，市场前景广阔。为研究新工艺酒对宿主免疫功能的调节作用，依据《保健食品检验与评价技术规范》，观察不同剂量新工艺酒对小鼠细胞免疫、体液免疫、单核-巨噬细胞功能、NK 细胞活性率的影响，探讨日常饮用新工艺酒对宿主的免疫调节作用，为健康饮酒提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

酒样：经曲面响应法优化制法的五粮液蛹虫草新工艺酒（5 倍浓缩液，酒精度15%vol），推荐服用量为100 mL/人/日。

实验动物：SPF 级雄性Balb/c 小鼠，体重18～22 g，由成都达硕实验动物有限公司提供，动物许可证号：SCXK（川）2013-24号。

耗材及试剂：绵羊红细胞SRBC（成都达硕实验动物有限公司），补体为12 只健康豚鼠（四川省实验动物管理委员会养殖场）的混合血清，YAC-1细胞（中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库），RPMI1640 培养液、双抗（成都哈里生物科技有限公司），氧化型辅酶Ⅰ（Sigma），墨汁（一得阁），刀豆蛋白A（Sigma）、细胞增殖试剂盒I MTT（Sigma），酶标仪（Multiskan MK3）。

1.2 实验方法

1.2.1 动物分组及干预

动物基础饲料适应性喂饲后，随机分为5组，每组40只，包括：水对照组、基酒对照组、新工艺酒低、中、高剂量组。各组灌胃液依次为灭菌水、15%vol基酒、8.33 mL/kg·bw、16.67 mL/kg·bw、33.33 mL/kg·bw新工艺酒（分别相当于推荐日服用剂量的5 倍、10倍和20 倍）。灌胃量为20 mL/kg·bw，每天1 次，连续灌胃30 d，定期称重。

1.2.2 免疫功能评价

连续灌胃30 d 后，颈椎脱臼处死动物。根据《保健食品检验与评价技术规范》中“增强免疫力功能检验方法”，计算脏器/体重比值，测定新工艺酒对小鼠细胞免疫功能（小鼠迟发型变态反应-足跖增厚法，ConA 诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验-MTT 法），体液免疫功能（血清溶血素测定-血凝法，抗体生成细胞检测-Jerne 改良玻片法），单核-巨噬细胞功能（小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验-半体内法、碳廓清法），NK 细胞活性率（乳酸脱氢酶法）的影响[20]。

1.2.3 实验数据统计

采用PEMS 3.1 软件进行统计学分析。结果以“均数±标准差”表示，采用各实验组与对照组均数比较方差分析对数据进行处理。对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。

2 结果与分析

2.1 小鼠体重、脾脏/体重比值、胸腺/体重比值分析

各剂量组与对照组相比，其初始体重、中期体重、末期体重、体重增重均无统计学差异（P＞0.05）（数据未示出）。此外，脾脏/体重比值、胸腺/体重比值也无统计学差异（P＞0.05），见表1。

表1 新工艺酒对小鼠脾脏/体重比值和胸腺/体重比值的影响

2.2 新工艺酒对小鼠细胞免疫功能的影响

迟发型变态反应：抗原攻击24 h 后，各剂量组与对照组小鼠相比，其足跖肿胀度无统计学差异（P＞0.05），见表2。

淋巴细胞转化实验（MTT 法）：各剂量组与对照组小鼠相比，其光密度差值无统计学差异（P＞0.05），见表2。

表2 新工艺酒对小鼠细胞免疫功能的影响

2.3 新工艺酒对小鼠体液免疫功能的影响

血清溶血素测定：新工艺酒中、高剂量组与水对照组和基酒对照组小鼠相比，其抗体积数显著增高（P＜0.01，P＜0.05），其余各剂量组与对照组小鼠相比，其抗体积数无统计学差异（P＞0.05），见表3。

抗体生成细胞检测（Jerne 改良玻片法）：各剂量组与对照组小鼠相比，其抗体生成细胞数无统计学差异（P＞0.05），见表3。

表3 新工艺酒对小鼠体液免疫功能的影响

2.4 新工艺酒对小鼠单核-巨噬细胞功能的影响

腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力测定：各剂量组与对照组小鼠相比，其腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬百分率与吞噬指数无统计学差异（P＞0.05），见表4。

碳廓清实验：各剂量组与对照组小鼠相比，其碳廓清吞噬指数a 无统计学差异（P＞0.05），见表4。

表4 新工艺酒对小鼠单核-巨噬细胞功能的影响

2.5 新工艺酒对小鼠NK细胞活性率的影响

新工艺酒低、中剂量组与水对照组和基酒对照组小鼠相比，其NK 细胞活性率显著增加（P＜0.01，P＜0.05），其余各剂量组与对照组小鼠相比，其NK细胞活性率无统计学差异（P＞0.05），见表5。

表5 新工艺酒对小鼠NK细胞活性率的影响

3 讨论

目前，保健酒中用于提高免疫力的原料主要有冬虫夏草和蛹虫草等。据《本草拾遗》和《本草从新》记述，冬虫夏草“味甘性温，秘精益气”，“以酒浸数枚，啖之治腰膝间痛楚，有益肾之功”。然而由于野生冬虫夏草生长缓慢、数量稀少，加上过度挖采已导致资源濒临枯竭[5]。现代研究表明，蛹虫草与冬虫夏草都含有虫草素、虫草多糖、腺苷、生物碱、酚类、超氧化物歧化酶、硒等功效成分[3，16]。其中，虫草多糖作为免疫调节剂，可促进IL-2、IL-6、IL-8、IL-18等细胞因子表达，刺激淋巴细胞增殖、提高巨噬细胞活性，是理想的免疫增强剂[6-7，19]；腺苷有促进血管扩张，增加血流量，降低血压等作用；虫草酸能改善人体微循环，具有降血脂、镇咳、祛痰等作用；硒作为公认的抗癌元素，也具有抗氧化，增强机体免疫的能力[15]。此外，大量细胞、动物、人体研究均表明，蛹虫草可望通过刺激NK 细胞、T 细胞、B细胞、巨噬细胞活性，促进免疫因子表达等多种途径，来提高宿主的免疫力[10-11，20-23]。

本研究根据《保健食品检验与评价技术规范》，测试了新工艺酒对小鼠细胞免疫、体液免疫、单核-巨噬细胞功能、NK 细胞活性率的影响，结果发现：在小鼠血清溶血素抗体积数检测中，中剂量组（16.67 mL/kg·bw）和高剂量组（33.33 mL/kg·bw）与水对照组和基酒对照组小鼠相比，其抗体积数显著增加（P＜0.01，P＜0.05）；在小鼠NK 细胞活性率测定实验中，低剂量组（8.33 mL/kg·bw）和中剂量组（16.67 mL/kg·bw）与水对照组和基酒对照组小鼠相比，其NK 细胞活性率显著增加（P＜0.01，P＜0.05）。根据《保健食品检验与评价技术规范》及相关评价标准，提示新工艺酒具有改善小鼠免疫力的作用。同时，本研究结果也与上述蛹虫草调节宿主免疫的研究结果相吻合，但受样本量、干预方式等限制，有待进一步验证。

综上所述，新工艺酒既保持了五粮液酒基的独特风味，又充分保留了蛹虫草的滋养调补功效，具有增强宿主机体免疫的潜质，适合多类人群食用，市场前景广阔，值得进一步研究开发。