和络舒肝片提取工艺方法的研究

历 娜，李桂荣，王 缨，尚金燕

（山东药品食品职业学院·山东威海·264200）

和络舒肝片是一种传统的中药制剂，本品具有疏肝理气，清化湿热，活血化瘀，滋养肝肾的功能，适用于慢性迁延性肝炎，慢性活动性肝炎及早期肝硬化。

1 仪器、药品与试剂

1.1 仪器

1100型高效液相色谱仪；Mettler AE240型电子分析天平；SD-1500型喷雾干燥机。

1.2 药品

大黄素对照品（中国药品生物制品检定所提供，批号：120902-201609）；大黄、白芍、白术、三棱等二十味中药材（河北安国药材站提供）；所用药品经检验，均符合中国药典现行版一部中的有关各项规定。

1.3 试剂

甲醇(色谱纯，进口)；纯化水（经0.45m滤膜过滤）；乙醇。

2 实验方法

2.1 提取考察

和络舒肝胶囊原生产工艺规定的提取方法为传统的水煎煮法，该法具有用水量大，煎煮时间长，能耗大，浸膏粘度大，不易粉碎且易吸潮，稳定性差等缺点，故以浸膏得率及浸膏中大黄素的含量为测定指标，考察加热回流提取技术对大黄等二十味药材进行提取的效果[1]。

2.1.1 提取方法对提取率的影响

取处方量半枝莲、海澡等二十味药材用水冲冼干净，分别采用水煎煮法（煎煮二次，每次1.5小时）和加热回流法（3小时）进行提取，并加入10量的水，过300目滤布后，将提出液浓缩至密度为1.22g/ml，微波干燥后得干浸膏，称出重量，计算出膏率，并取少量干膏按2.2大黄素含量测定方法项下测定大黄素的含量，结果见表2-1。

结果表明，和络舒肝片中药材采用加热回流法进行提取，得到的出膏率及大黄素的含量远高于原生产工艺中水煎法的提取量。

2.1.2 加水量对提取率的影响

取和络舒肝片处方量的中药材三份，采用加热回流法对其进行提取，考察加水量对提取率的影响，分别加入药材量的6、8、10倍量的水，加热回流提取3小时，过300目滤布后，采用三效减压浓缩法对提取液进行浓缩至密度为1.25g/ml，微波干燥后得干浸膏，称出重量，计算出膏率，并取少量干膏按2.2大黄素含量测定方法测定大黄素的量，提取结果见表2-2。

表2 -2加水量对提取效果的影响

结果表明，采用8倍加水量和10倍加水量提取时，出膏率和大黄素的含量变化不大，所以从节约生产成本的角度考虑采用8倍加水量更适合工业化生产。

2.1.3 提取时间对提取率的影响

取和络舒肝片处方量的中药材三份，分别加入8倍量的水，第一份提取2小时、第二份提取3小时、第三份提取4小时，过300目滤布后，采用三效减压浓缩法对提取液进行浓缩至密度为1.25g/ml，微波干燥后得干浸膏，称出重量，计算出膏率，并取少量干膏按2.2大黄素含量测定方法测定大黄素的量，提取结果见表2-3。

表2 -3提取时间对提取率的影响

结果表明，提取时间为4小时，出膏率、大黄素的含量与3小时较为接近，从生产成本、缩短生产周期的角度来考虑，采用提取时间为3小时适合工业大生产，虽然随着时间的增长，出膏率及大黄素的含量会有所提高，但会大大提高生产成本，延长生产时间。

2.2 大黄素含量测定方法

2.2.1 色谱条件[2-3]

以C18为填充剂；甲醇-0.1%磷酸溶液（80∶20）为流动相；检测波长为254nm，流速：1.0mL/min，进样量10μl，按大黄素峰计算，理论板数不低于1500。

2.2.2 对照溶液的制备

取大黄素对照品适量，精密称定，加醋酸乙酯-无水乙醇（1∶2）混合溶液适量使溶解，再加入醋酸乙酯-无水乙醇（1∶2）混合稀释至刻度，制成每1ml中含10g的大黄素对照品溶液。

2.2.3 供试溶液的制备

取干燥后的干浸膏6.0g，置圆底烧瓶中，精密称定重量，向圆底烧瓶精密加甲醇100ml，再精密称定重量后置水浴锅上，开始加热回流2小时，取出、冷却，再精密称定重量，减失的重量用甲醇补足，混合摇匀，过滤后精密量取50ml续滤液置表面皿中，在水浴上蒸干，向残渣中加入25ml盐酸溶液（1→10），用超声波清洗器处理5分钟，使残渣溶解后加氯仿25ml，再放置水浴锅上加热回流30分钟后立即冷却，将冷却液转移到时分液漏斗中进行分离，取氯仿层，酸水层用氯仿提取2次，每次用量为25ml，最后将氯仿液合并蒸干，再向残渣加入醋酸乙酯-无水乙醇（1∶2）混合液，使其溶解后转移至50ml量瓶中，用醋酸乙酯-无水乙醇（1∶2）混合液稀释至刻度，混合摇匀，即得。

2.3 实验结果验证

取处方量半枝莲、海澡等二十味药材3份，用纯化水冲冼干净，分别加入8倍量的水，采用加热回流法提取，提取时间为3小时，过300目滤布后，采用三效减压浓缩法浓缩至密度为1.25g/ml，微波干燥后得干浸膏，称出重量，计算出膏率，并取少量干膏按2.2大黄素含量测定方法测定大黄素的量，验证结果见表2-4。

表2 -4验证结果

结果表明，采用加热回流法对药材进行提取时，出膏率与大黄素的含量比较稳定，适合工业化生产。

2.4 浸膏除杂方法考察

按上述提取工艺制备和络舒肝片的浸膏，浸膏由于是水提法所制得的，所以方中药材除了有效成分被提取之外，还有一些蛋白质、淀粉、粘液质等无效成分[4]。故将提取后的浸膏采用醇沉的方法除去无效杂质成分，同时可以降低自然沉降法浸膏中杂质的含有量，从而降低了片重，提高了有效成分的含量，增强了药效，减少了患者的服用量。研究过程中主要以出膏率、大黄率的含量为考察指标，来考察自然沉降法和用不同浓度的乙醇做沉淀剂的优劣。

精密称取和络舒肝片提取液5份，每份为1000g，将前4份提取液分别浓缩至密度为0.4g/ml时，依次向前4份稠膏中加入浓度分别为65%、75%、85%、95%的乙醇溶液，剩余一份采用自然沉降法，分别静止12小时，过滤，将滤液进行减压浓缩，直至前四份的醇味全部消失，并回收乙醇。将减压浓缩后的和络舒肝片浸膏置烘箱中，进行减压干燥直至恒重，取出放冷，称定其重量，得到和络舒肝片的干膏。计算出膏率，并取少量干膏按上述2.2大黄素的含量测定方法测定大黄素的含量。5份的出膏率与大黄素的含量见表2-5。

表2 -5浸膏除杂方法考察结果

结果表明，采用醇沉法比自然沉降法的出膏率均低，而采用75%的醇进行醇沉时，出膏率最低，但大黄素的含量最高，所以本工艺拟定采用75%的乙醇为除杂沉定剂。

2.5 浓缩试验

精密量取和络舒肝片经75%乙醇除杂后的提取液二份，各20L，分别采用三效减压浓缩和单效常压浓缩进行浓缩，当密度达到1.25±0.05g/ml时，所需要时间分别为：结果见表2-6。

表2 -6浓缩结果

结果表明，三效减压浓缩能大大缩短浓缩时间，可以达到节能、省时的目的。采用单效常压浓缩不但费时，而且浓缩温度较高，可以达到120℃，药液长时间处高温条件下可以使有效成分受到破坏，故采用三效减压浓缩设备进行浓缩。

3 实验结果与讨论

3.1 提取工艺的确定

和络舒肝片原生产工艺的提取方法为传统的水煎煮法，该法具有提取时间长，有效成分提取不完全等缺点，故本课题的研究采用了加热回流提取技术对大黄，三棱、昆布、半边莲、五灵脂、黑豆等二十味中药材进行提取。以浸膏的出膏率、大黄中主要功能成分大黄素的含量为考察指标，对加热回流的提取条件进行优化，最终确定最佳的提取工艺。

3.2 提取液除杂方法的确定

和络舒肝片的提取液由于是水提法所制得的，所以方中药材除了有效成分被提取之外，还有一些蛋白质、淀粉、粘液质等无效成分。原工艺中采用的是自然沉降法，就会不可避免的将一些杂质带入药物中。故本课题的研究将提取后的浸膏采用醇沉的方法除去无效杂质成分，降低浸膏中杂质的收率，从而降低了片重、提高了有效成分的含量，增强了药效、减少了患者的服用量。研究过程中主要以出膏率、大黄率的含量为考察指标，来考察自然沉降法和用不同浓度乙醇进行醇沉时的优劣。结果表明，采用醇沉法比自然沉降法的出膏率均低，证明采用醇沉法会除去一些杂质。而采用75%的醇进行醇沉时，出膏率最低，但大黄素的含量最高，所以本工艺拟采用75%的乙醇为除杂沉定剂。