顶空毛细管气相色谱法测定雷公藤多苷片中残留溶剂

何风艳何 轶王 峰王亚丹戴 忠 马双成

（中国食品药品检定研究院，北京100050）

雷公藤多苷片为雷公藤多苷加辅料制成的片剂，具有抗炎及免疫抑制的作用［1］，临床广泛用于类风湿性关节炎［2⁃3］、肾病综合症［4⁃6］、慢性荨麻疹［7⁃8］、银屑病［9⁃10］等疾病的治疗。其主药雷公藤多苷主含二萜内酯、生物碱、三萜等活性成分，是由卫矛科雷公藤属植物雷公藤Tripterygium wilfordiiHook.f.的去皮根芯木质部加水或乙醇、氯仿提取及硅胶柱色谱分离得到的脂溶性成分混合物［11⁃14］。由于雷公藤多苷制备过程中使用了多种有机溶剂，为了评价制剂质量，保证用药安全，本研究参照《中国药典》 相关指导原则［14］，采用顶空毛细管柱色谱法对制剂中4种有机溶剂残留量进行了测定。

1 材料

7890B 气相色谱仪、7697A 顶空进样器、FID 检测器（美国Agilent 公司）。N，N⁃二甲基甲酰胺（色谱纯，国药集团化学试剂有限公司）；甲醇，环己烷（色谱纯，美国赛默飞世尔科技有限公司）；无水乙醇，氯仿（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）。雷公藤多苷片15 批，来自10 家企业。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 B⁃624 毛细管柱（30 m × 0.32 mm，1.8 μm）；检测器FID；柱体积流量1.5 mL／min；柱温程序升温，起始温度40 ℃，保持5 min，再以10 ℃／min 升温至220 ℃；进样口温度230 ℃；检测器温度300 ℃；载气为高纯氮；顶空加热箱90 ℃，平衡时间30 min；定量环100 ℃，传输线110 ℃。理论塔板数以氯仿峰计算不低于10 000。色谱图见图1。

图1 各成分GC图

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液 精密称取甲醇、乙醇、氯仿、环己烷对照品适量，加N，N⁃二甲基甲酰胺制成每1 mL分别含2.4、3.4、2.1、2.2 mg 的溶液，作为对照品贮备液。取对照品贮备液液适量，加N，N⁃二甲基甲酰胺稀释得到每1 mL含甲醇0.001 8 mg、乙醇0.96 mg、氯仿0.14 mg、环己烷0.023 mg 的混合溶液，作为对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液 取本品1.0 g，精密称定，置10 mL顶空瓶中，精密加入N，N⁃二甲基甲酰胺3 mL，密封瓶口，涡旋混匀，即得。

2.3 线性关系考察 取对照品贮备液，加N，N⁃二甲基甲酰胺逐级稀释，得到系列溶液，分别吸取各溶液，进样测定。以质量浓度为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），进行线性回归，结果见表1。

表1 各成分线性关系

2.4 精密度试验 精密移取对照品溶液3 mL，置10 mL顶空瓶中，在“2.1”项条件下连续进样6 次，测得甲醇、乙醇、氯仿和环己烷峰面积RSD分别为2.5%、2.0%、2.2%、2.9%，表明仪器精密度良好。

2.5 重复性试验 取雷公藤多苷片（S1）约1.0 g，精密称定，平行6 份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，在“2.1”项条件下进样，结果甲醇含量低于线性范围，乙醇含量为0.24%，RSD分别为1.5%，表明该方法重复性良好。

取雷公藤多苷片（S15）约1.0 g，精密称定，平行6份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，在“2.1”项条件下进样，结果乙醇含量低于线性范围，甲醇、氯仿和环己烷的含量分别为0.000 33%、0.029%、0.006 0%，RSD分别为4.2%、1.5%、0.2%，表明该方法重复性良好。

2.6 加样回收率试验 取雷公藤多苷片（S1）约0.5 g，精密称定，平行6 份，置10 mL 顶空瓶中，精密加入每1 mL 含乙醇0.427 mg／mL 的对照品溶液3 mL，涡旋混匀，在“2.1”项条件下进样测定，计算回收率，结果见表2。

取雷公藤多苷片（S15）约0.5 g，精密称定，平行6份，置10 mL 顶空瓶中，精密加入每1 mL分别含甲醇、氯仿、环己 烷0.577、0.046、9.11 μg／ mL 的对照品溶液3 mL，涡旋混匀，在“2.1”项条件下进样，计算回收率，结果见表2。

表2 各成分加样回收率试验结果（n＝6）

2.7 检测限及定量限 取对照品贮备液，加N，N⁃二甲基甲酰胺逐级稀释，精密吸取3 mL 至10 mL 顶空瓶中，测定信噪比，以信噪比为3 时的溶液浓度作为检出限，以信噪比为10 时的溶液浓度作为定量限，结果见表1。

2.8 样品含量测定 取雷公藤皂苷片15 批，在“2.1”项条件下进样，结果见表3。

表3 雷公藤多苷片中残留溶剂测定结果（%）

3 讨论

传统的直接进样法气化温度较高，样品可能在气化过程中分解，并且色谱分离易受样品基体干扰。顶空进样法使用较低的平衡温度，抽取气液平衡后的气体成分进行色谱分析，可以有效减少基体干扰。实验曾采用直接进样，残留溶剂色谱峰受基体影响而峰型较差，采用顶空进样可有效改善峰型，因此实验中使用顶空进样法。

顶空进样法中，常用溶剂包括水、N，N⁃二甲基甲酰胺、二甲基亚砜等。雷公藤多苷为脂溶性混合物，以N，N⁃二甲基甲酰胺为溶剂，可快速溶解主药及其残留溶剂，利于检测。同时，雷公藤多苷制备过程中可能使用的有机溶剂主要为非高沸点溶剂，N，N⁃二甲基甲酰胺沸点适宜，可满足测定要求。

实验中比较了不同顶空加热温度（70、80、90 ℃）和加热时间（20、30、40 min）对残留溶剂测定的影响。结果表明，随着加热温度升高，溶剂峰面积呈增加的趋势，而不同加热时间对测定影响不大，最终选择90 ℃下加热30 min。

随着药品安全性保障工作的提升，制剂及药用辅料中残留溶剂的检测日益受到重视。2020年版《中国药典》 一部中三七三醇皂苷、三七总皂苷等3个提取物和心脑健片、正清风痛宁片等7个制剂品种（或主药原料）已对残留溶剂进行检测。这些品种的生产工艺均涉及有机溶剂提取或大孔树脂使用。雷公藤多苷由卫矛科雷公藤属植物雷公藤的去皮根芯木质部加水或乙醇、氯仿提取及硅胶柱色谱分离得到［11⁃14］。实验中发现雷公藤多苷片中存在甲醇、乙醇、氯仿、环己烷4种有机溶剂。参考文献［11，14］，主药雷公藤多苷提取过程中可能用到乙醇和氯仿；甲醇、氯仿、环己烷都是硅胶柱色谱纯化过程中常用的有机溶剂。此外，乙醇还是片剂制备中常用的润湿剂。主药生产及片剂制备工艺可能引入此4种有机溶剂。

《中国药典》 规定药品中甲醇、乙醇、氯仿、环己烷的限度分别为0.3%、0.5%、0.006%和0.388%［15］。对10个厂家15 批样品的测定结果表明，B 厂家6 批样品乙醇含量超出限度（0.63%～0.96%），J 厂家1 批样品氯仿含量超出限度（0.029%），存在有机溶剂残留超标情况。2种超标溶剂中，氯仿被国际癌症研究机构列为2B 类，为疑似致癌物，危害较高［16］，应引起重视。根据本实验结果，建议厂家进一步完善生产工艺，其他类似中药制剂也应以此为鉴，加强对残留溶剂的监控，以避免过量有机溶剂残留对人民用药安全带来的不利影响。