大黄消痔栓的工艺改进及有效成分含量测定*

倪志涛 杜晓凤 史玉攀 商婷 王谨慧

(甘肃中医药大学附属医院，甘肃 兰州 730020)

痔疮是一种位于肛门部位的常见疾病，任何年龄都可发病，且随着年龄增长，发病率逐渐增高，素有“十人九痔”的说法[1]。有学者认为，90%以上的痔疮患者可以通过非手术治疗得以治愈[2-3]。中医辨证治疗痔疮优势明显，具有使用方便、价格低廉、依从性好、疗效显著、不良反应少等优点[4-5]。朱震亨云：“痔者，皆因脏腑本虚，外伤风湿，内蕴热毒。”[6]又《东垣十书》曰：“治痔瘘大法，以泻火、凉血、除湿、润燥为主”。[7]初步确定了痔疮的辨证与治法。大黄消痔栓是我院肛肠科特色中药制剂，具有清热凉血，止痛通便的功效，临床用于混合痔术后止痛、止血、促愈效果显著[8]。最新研究表明，大黄消痔栓对于湿热瘀阻型CABP/CPPS也有较好的治疗效果[9]，具有广阔的应用前景。但生产工艺存在脱模时需冷冻，生产效率低，成品常温贮存易融化变形等缺点，本实验对原处方工艺进行优化，采用HPLC法对栓剂中君药大黄的指标性成分进行含量测定，为更好地控制该栓剂质量及推广使用提供依据。

1 材料

1.1仪器 waters高效液相色谱仪，美国赛默飞世尔科技有限公司；超声波清洗器，上海科导超声仪器有限公司；S26s数显恒温水浴锅，金坛市大地自动化仪器；AE240S电子天平，梅特勒一托利多仪器(上海)有限公司；RBY-4自动融变时限检查仪，昆山广测仪器设备有限公司。

1.2药品与试剂 黄蜂蜡(批号20180123)东光县永盛蜡制品厂，混合脂肪酸甘油酯(硬脂)(批号180302)成都泸天化科森有限责任公司，大黄(批号1903012)甘肃中天药业有限责任公司，槐角(批号1810012)甘肃中天药业有限责任公司，冰片(批号180435)云南林缘香料有限公司，甲醇(批号119110630G002)广州艾欣科学仪器有限公司，三氯甲烷(批号20120916)利安隆博华医药化学有限公司，注射用水(批号M19020906)四川科伦药业股份有限公司，芦荟大黄素(批号110786-201042)、大黄酸(批号110765-201076)、大黄素(批号110794-201087)、大黄酚(批号110789-201107)、大黄素甲醚(批号110773-201055)均购于中国食品药品检定研究院。

2 方法与结果

2.1基质比例的确定 按处方量药粉配比，以栓剂成型为前提，以混合脂肪酸甘油酯与蜂蜡不同比例为考察因素，采用综合评分法评价制得栓剂的优劣，以外观形态(Q1)、重量差异(Q2)、融变时限(Q3)为评价指标进行评分，综合得分为三种指标分数总和。Q1：观察栓剂外观完整度、表面光滑度、硬度。外观完整得1分、表面光滑得1分、硬度适宜得1分，最高得3分，最低得0分；Q2：栓剂重量差异，重量差异≤3%得2分，5%<重量差异≤7.5%得1分，重量差异>7.5%得0分；Q3：按2015年版《中国药典》通则0922融变时限检查法测定，融变时限≤30 min者为10分，在30～40 min者每延长1 min，分数相应减少1分。根据得分分析，原基质中加入少量蜂蜡能有效改善其成形性，且对栓剂融变时限有一定影响，当蜂蜡量低于9∶1时，成形性不好，但随着蜂蜡量的增加，当蜂蜡量大于7∶1时，融变时限达不到要求，当蜂蜡量大于5∶1时，两种基质难以混匀，导致重量差异大。综合考虑，混合脂肪酸甘油酯与蜂蜡比例为8∶1时，栓剂成形性好，硬度适宜，重量差异小，融变时限符合规定，为最佳基质比例。试验安排及结果见表1。

表1 大黄消痔栓处方筛选试验安排

2.2灌模时温度的选择 按优选的基质配比和处方量药粉制备栓剂，其他条件保持不变，对灌模时的温度进行考察。分为70、75、80 ℃三组，以栓剂外观为考察指标对灌模温度进行优选。结果，当灌模温度为70 ℃时，栓剂外表粗糙、色泽不均匀；当灌模温度为75 ℃时，制备的栓剂外观完整光滑，色泽均匀；而当灌模温度为 80 ℃时，栓剂顶端存在中空现象，且药粉与基质有分层现象。综上所述，灌模温度选择75 ℃为宜。

2.3脱模时间的选择 按优选的基质配比和处方量药粉制备栓剂，其他条件保持不变，对常温脱模冷却时间进行考察。分3组，脱模冷却时间分别为2、5、10 min。结果显示，当脱模冷却时间为2 min时，栓剂尚不能完全冷凝脱模，容易断裂，5 min时能完全冷凝脱模，成品外观完整光滑、色泽均匀，与10 min脱模时近似。根据实验结果，考虑到生产效率，最终确定常温脱模冷却时间为5 min，相较于原工艺冷冻20 min脱模，优选后的工艺操作简便、效率高。

2.4计算置换价 以质量比8∶1称取混合脂肪酸甘油酯、蜂蜡，水浴加热，保持温度85 ℃至完全熔化，加入处方量药粉或不加药粉，常温冷却至75 ℃，边搅拌边灌模。常温冷却5 min，削去溢出部分，脱模，分别制备大黄消痔栓和空白基质栓，置换价(displacement value，DV)以公式DV=W/[G-(M-W)]计算[10]，大黄消痔栓DV为1.35。

2.5验证试验 根据试验优选的最佳制备条件，分别按比例称取混合脂肪酸甘油酯和蜂蜡，水浴加热保持85 ℃，熔化后加入处方量药粉，混合均匀，待冷却至75 ℃时边搅拌边灌模，常温冷却5 min后，削去溢出部分，脱模。栓剂成品外观完整光滑、硬度适宜，重量差异为1.6%，按2015年版《中国药典》通则0922融变时限检查法测定，三批样品的平均融变时限为19 min。各项数据符合规定，工艺可行。

3 大黄消痔栓中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量测定

3.1溶液的制备

3.1.1混合对照品溶液的制备 精密称取芦荟大黄素标准品22.5 mg、大黄酸标准品13.6 mg、大黄素标准品19.0 mg、大黄酚标准品19.0 mg、大黄素甲醚标准品7.0 mg，分别置于100 mL容量瓶中，加甲醇超声溶解并稀释至刻度，摇匀。分别精密量取上述各标准品溶液2 mL，混匀，作为对照品溶液(浓度为：芦荟大黄素45.0 μg·mL-1，大黄酸27.2 μg·mL-1，大黄素38.0 μg·mL-1，大黄酚38.0 μg·mL-1，大黄素甲醚14.0 μg·mL-1)。

3.1.2供试品溶液的制备 取大黄消痔栓剪碎，精密称取3.0 g，置于锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称定重量，加热回流1 h，冷却至常温，用甲醇补足损失重量，-20 ℃冷却1 h，滤过，取续滤液10 mL，于烧瓶中挥去溶剂，加入8%盐酸20 mL，超声处理2 min，加入三氯甲烷20 mL加热回流1 h，放冷，置于分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液再用三氯甲烷萃取3次，每次20 mL，合并三氯甲烷液，挥去溶剂，残渣加甲醇使溶解，转移至10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，取续滤液过0.45 μm微孔滤膜后，作为供试品溶液。

3.1.3阴性对照品溶液的制备 取除大黄外的其他处方量药粉，按大黄消痔栓制备工艺制成阴性空白栓，按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。

3.2色谱条件 色谱柱：symmetry C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)；以甲醇-0.1%磷酸水溶液(85∶15)作为流动相；检测波长：254 nm；柱温：30 ℃；进样量：10 μL；流速：1 mL·min-1，理论塔板数按大黄素峰计算不低于3000。

3.3系统适用性 取混合对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各适量，在“3.2”项色谱条件下分别进样10 μL，观察色谱图，混合对照品、供试品中各组分分离度良好，且阴性无干扰，表明方法专属性强。色谱图见图1。

注：1.芦荟大黄素；2.大黄酸；3.大黄素；4.大黄酚；5.大黄素甲醚

3.4线性关系的考察 取“3.1.1”项下混合对照品溶液，分别精密吸取0.5，1，2，4，6，8 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀。按“3.2”项下色谱条件测定峰面积。以进样浓度(x，μg·mL-1)为横坐标，峰面积(y)为纵坐标进行线性回归，得回归方程与线性范围，见表2。

表2 回归方程与线性范围

3.5精密度试验 精密量取“3.1.1”项下混合对照品溶液2 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀。按“3.2”项下色谱条件进行测定，连续进样6次，记录峰面积。结果，芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚峰面积的RSD分别为1.23%、1.62%、0.85%、0.97%6、1.42%(n=6)，表明仪器精密度良好。

3.6稳定性试验 取供试品溶液，按“3.2”项下色谱条件，在0，2，4，6，8，10，12 h各测定1次，记录峰面积。结果，芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚峰面积的RSD分别为1.25%、0.95%、0.84%、1.53%、0.78%(n=6)。表明供试品溶液12 h内稳定性良好。

3.7重复性试验 精密称取同一批(190301)样品适量，按“3.1.2”项下方法平行制备供试品溶液6份，按“3.2”项下色谱条件进行测定，记录峰面积。结果，芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚峰面积的RSD分别为1.47%、0.85%、1.43%、0.97%、1.13%(n=6)。表明方法可重复性良好。

3.8加样回收试验 精密称取已知含量的样品(190301)，随机分为低、中、高组，分别精密加入样品中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚含量的80%、100%、120%标准品溶液，按“3.1.2”项下方法制备供试品溶液，按“3.2”项下色谱条件进行测定，分别记录峰面积，带入标准曲线方程并计算平均回收率及RSD。结果，芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚平均回收率分别为98.2%(RSD=0.6%)、103.5%(RSD=1.3%)、97.1%(RSD=0.8%)、96.0%(RSD=0.7%)、99.3%(RSD=1.6%)(n=3)。表明该方法回收率高。

3.9样品含量测定 称取3批样品各3份，按“3.1.2”项下方法制备供试品溶液，按“3.2”项下色谱条件进行测定。结果见表3。

表3 样品测定结果(n=3)

4 讨论

大黄消痔栓以混合脂肪酸甘油酯为基质，具有较好的稳定性，但制剂脱模时需冷冻，贮存温度高时易变形，本实验在混合脂肪酸甘油酯中加入少量蜂蜡，能显著提高栓剂的成形性、缩短脱模冷却时间、改善贮存温度要求，使大黄消痔栓能更好的推广应用。

大黄消痔栓中大黄凉血解毒，逐瘀通经为君药，黄连清热燥湿、泻火解毒，槐角清热泻火、凉血止血共为臣药，冰片清热止痛用于疮疡肿痛、溃后不敛等为佐药。全方具有清热燥湿、通便活血、消肿止痛、凉血止血之功。研究表明大黄蒽醌类成分对多种病原微生物具有抑制作用，能有效改善机体发热、疼痛、肿胀等症状[11]，另有研究提出蒽醌类成分是大黄止血作用的物质基础[12-13]，与大黄消痔栓清热、凉血、止痛功效相一致。大黄蒽醌含量测定专属性强，结果准确，可用于大黄消痔栓的质量控制。

2015版《中国药典》共收录栓剂35种，其中中药栓仅10种[14]，相对片剂、胶囊剂及注射剂等剂型较少，但随着中空栓、海绵栓、缓释栓等新型栓剂的深入研究[15]及中药现代化事业的发展，中药栓剂在临床中具有更为广阔的应用前景，也越来越受到医学工作者的重视。