细胞块切片免疫组化染色技术在对胸腔积液进行病理诊断中的应用

李贤龙，王 鹏

（联勤保障部队第九八五医院病理科，山西 太原 030012）

机体的脏层与壁层胸膜间有一潜在的胸膜腔，其中含有少量的液体，正常情况下该液体的产生与吸收处于动态平衡的状态，当机体发生全身或局部病变时此动态平衡会被破坏，此时会因该液体形成过快或吸收过缓而产生胸腔积液[1]。大量的临床实践证实，多数的胸腔积液是由恶性间皮瘤、淋巴瘤、转移性癌等恶性肿瘤所致，其中转移性癌引起的胸腔积液最为常见。转移性肺腺癌、转移性胃癌、转移性乳腺癌、转移性卵巢癌、转移性肠癌等均可引起胸腔积液，其中转移性肺腺癌最易引起胸腔积液[2]。临床上主要是通过胸腔积液中是否检测出脱落细胞判断患者有无肿瘤性病变，并根据脱落细胞是否为癌细胞确定其肿瘤的性质[3]。细胞涂片病理学检查是临床上对胸腔积液进行病理诊断常用的方法。有研究表明，浆膜腔原发性间皮瘤与转移性癌的细胞形态较为相似，仅采用细胞涂片病理学检查法对胸腔积液标本进行病理诊断，难以区分癌细胞与正常细胞的形态，诊断的灵敏度和准确率较低。临床上治疗转移性癌与间皮性肿瘤的方案截然不同，对这两种疾病进行鉴别诊断的结果会影响患者后续治疗方案的制定[4]。因此，寻找一种灵敏度及准确度较高的诊断方法对胸腔积液进行鉴别诊断和定性诊断就成为目前病理学研究的重要课题。许晖[5]的研究表明，在对转移性癌与间皮性肿瘤进行鉴别诊断时，对其胸腔积液进行细胞块切片免疫组化染色病理学检查的灵敏度及准确率较高。本次研究主要是探讨细胞块切片免疫组化染色技术在对胸腔积液进行病理诊断中的应用价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

本次研究的对象为2019年6月至2020年12月期间联勤保障部队第九八五医院收治的50例胸腔积液患者的50份胸腔积液标本。这50例患者的病情经影像学检查和临床综合检查均被确诊为胸腔积液。这50例患者均签署了参加本次研究的知情同意书。在这50例患者中，有男30例，女20例；其年龄为22～70岁，平均年龄为(45.1±7.9)岁。

1.2 研究方法

对这50份胸腔积液标本分别使用细胞涂片法和细胞块切片免疫组化染色法进行病理检查，方法是：1）采集胸腔积液标本。⑴在早上8:00～9:00，收集患者60 mL的胸腔积液，分别装入3～5个试管中。⑵将胸腔积液标本放入离心机中，以3000 r/min的转速进行10～15 min的离心处理，然后用移液枪吸出上清液，保留沉渣备用。2）制作胸腔积液标本。⑴取部分沉渣制作成细胞涂片。⑵在剩余的沉渣中加入浓度为10%的甲醛液，将其放入离心机中以3000 r/min的转速进行5 min的离心处理，用移液枪吸出上清液后，用滤纸包好所有的沉渣。对沉渣进行脱水处理后制作成细胞蜡块。对细胞蜡块进行连续切片制成细胞块切片，每个切片的厚度为3～ 4μm。3）对胸腔积液标本进行染色处理。⑴使用HE（苏木精-伊红）对细胞涂片进行染色处理。⑵使用免疫组化染色技术对细胞块切片进行染色处理，方法是：①本次研究使用的试剂盒为Maxvi-sion试剂盒〔其中包含细胞角蛋白7（cytokeratin 7，CK7）、甲状腺转录因子（thyroid transcription fartor-1，TTF-1）、细胞 角 蛋 白5/6（cytokeratin 5/6，CK5/6）、粒/单 核 细 胞相关抗原（cluster Of differentiation，CD15）、上皮抗原Ber-EP4（简称Ber-EP4）、人类全癌上皮相关糖蛋白-2（humam pancarcinoma-associated epithelial glycoprotein，MOC-31）、癌胚抗原（carcinoembryonic，CEA）、肾母细胞瘤蛋白质抗体（Wilns Tumor Protein, WT-1）、钙网膜蛋白（Calretinin）、肌间线蛋白（Desmin）等〕，使用的显色剂为二氨基联苯胺（Diaminobenzidine，DAB）显色剂。②所有操作均严格按照Maxvi-sion试剂盒的说明书进行。4）对胸腔积液标本进行观察。由2位资深的病理医师对胸腔积液标本进行观察。⑴观察细胞涂片中是否有脱落细胞，并根据经染色后其中是否有不典型性细胞核 、细胞的形态及黏附性等判断胸腔积液属于良性还是恶性。良性胸腔积液：细胞涂片中有反应性增生间皮细胞，细胞的弥散性较好、相对较为温和、无不典型细胞核。恶性胸腔积液：细胞涂片中的细胞成团，出现严重的不典型性细胞核、细胞形态严重不温和。不能肯定性质的胸腔积液：细胞涂片中的细胞弥散或细胞成团，出现中重度不典型性细胞核或中轻度不典型性细胞核。⑵观察对患者进行细胞块切片免疫组化染色病理学检查时恶性胸腔积液的检出情况。恶性胸腔积液检查结果呈阳性的判断标准是：CK7和CEA的细胞质均染色且在细胞膜或细胞浆上表现为棕黄色，Ber-EP4、CK5/6、MOC-31和Desmin 的细胞质染色并呈棕黄色，TTF-1和WT-1在细胞核中表现为棕黄色颗粒，Calretinin的细胞质和细胞核均显色且在细胞膜、细胞浆或细胞核上表现为黄色，CD15 的细胞膜和细胞质均染色。

1.3 观察指标

观察使用细胞涂片病理学检查与细胞块切片免疫组化染色病理学检查法对这些胸腔积液标本进行病理诊断的结果。

1.4 统计学方法

对本次研究中的数据均采用SPSS 20.0统计软件进行处理，计量资料用均数±标准差（±s）表示，采用t检验，计数资料用百分比（%）表示，采用χ²检验。以P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 对50份胸腔积液标本进行细胞涂片病理学检查与细胞块切片免疫组化染色病理学检查的结果

与进行细胞涂片病理学检查相比，对50份胸腔积液标本进行细胞块切片免疫组化染色病理学检查的阳性检出率更高，差异有统计学意义（χ²=11.64，P＜0.05）。详见表1。

表1 对50份胸腔积液标本进行细胞涂片病理学检查与细胞块切片免疫组化染色病理学检查的结果

2.2 用细胞涂片病理学检查与细胞块切片免疫组化染色病理学检查法对50份胸腔积液标本进行定性诊断的结果

使用细胞块切片免疫组化染色病理学检查法对这50份胸腔积液标本进行定性诊断的准确率为100%（50/50），使用细胞涂片病理学检查法对这50份胸腔积液标本进行定性诊断的准确率为72%（36/50）。与使用细胞涂片病理学检查法相比，使用细胞块切片免疫组化染色病理学检查法对这50份胸腔积液标本进行定性诊断的准确率更高，P＜0.05。在恶性间质瘤患者的胸腔积液标本中WT-1、CK5/6、Desmin及Calretinin的阳性表达率较高，在转移性肺腺癌患者的胸腔积液标本中CK7、Ber-EP4、CD15、CEA、TTF-1 及MOC-31的阳性表达率较高。详见表2。

表2 用细胞涂片病理学检查与细胞块切片免疫组化染色病理学检查法对50份胸腔积液标本进行定性诊断的结果[份(%)]

3 讨论

对胸腔积液进行细胞病理学检查是临床上鉴别诊断良恶性肿瘤的常用手段之一。相关的调查数据显示，对胸腔积液进行细胞涂片病理学检查的灵敏度较低，仅为50%～70%[6-7]。郭仁杰等[8]的研究表明，转移性癌症患者和浆膜腔原发性间皮性肿瘤患者的胸腔积液中细胞形态的相似度很高，单用细胞涂片病理学检查法难以区分这两种细胞形态，而对这两种疾病进行鉴别诊断的结果可直接影响医师为患者制定的治疗方案，进而影响治疗的效果。细胞块切片技术是通过对细胞标本进行离心处理，使细胞高度浓缩后形成沉淀，再用浓度为10%的甲醛对沉渣进行固定，然后对其进行脱水、石蜡包埋、切片处理的一项技术。使用该技术可采集较多的细胞成分，在对细胞块进行石蜡包埋后可连续切片，不仅能够长期保存标本，还可控制切片的厚度、均匀度，以便进行观察[9]。免疫组化染色法是通过使用显色剂对抗体进行标记，再用标记后的抗体与细胞中的未知抗原进行特异性结合，然后利用化学反应显色反映其位置、活性及分布等[10-11]。细胞块切片免疫组化染色技术的操作简单，可对未知抗原进行精确的定位，且特异性强[12]。应用细胞块切片免疫组化染色技术可完整地保存细胞标本，有利于对标本进行多项病理学检查。细胞块切片免疫组化染色病理学检查具有操作简单、特异性强、标本易保存等特点。本次研究的结果证实，细胞块切片免疫组化染色技术在对胸腔积液进行病理诊断中具有较高的应用价值。