重庆市部分地区规模化猪场圆环病毒3型流行情况调查

张邑帆，郑 华，张素辉，翟少青通信作者

(1.重庆市畜牧科学院，重庆 荣昌 402460；2.重庆市兽用生物制品工程技术研究中心，重庆 荣昌 402460)

0 引言

猪圆环病毒3型是单链环状DNA病毒，其基因组与PCV1和PCV2相似，可以在动物体内诱导产生特异性免疫反应。2015年6月PCV3在美国首次被发现，随后在北美、亚洲、欧洲等3个大洲多个国家被检出患病猪只的组织中含有PCV3。2017年，有学者通过研究发现PCV3与PNDS和繁殖障碍相关[1]。目前该病主要引起仔猪多系统衰竭综合征、腹泻；母猪可引起流产[2]。PCV3已经成为造成养猪业损失的重要病因之一[3]，并且还有加剧的趋势。

兽医研究所于2020年3—11月对重庆6个地区20个规模猪场的814份猪全血样品进行PCV3检测，并分析其阳性率在不同地区及不同年龄段猪群感染的情况，揭示重庆地区猪群PCV3感染情况及流行特点，为有效防控PCV3提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 样品

814份全血样品分别于2020年3—11月采自重庆6个地区20个规模猪场。

1.1.2 主要试剂

DNA抽提试剂盒，DL2000 DNA Marker，2×Taq PCR Master Mix，购自宝生物工程(大连)有限公司。

1.2 方法

1.2.1 引物设计与合成

根据GenBank 发表的PCV3及相关病毒的基因序列，目的基因片段大小为649 bp，引物序列为：PCV3-F:5’-TTACTTAGAGAACGGACTTGTAACG-3’；PCV3-R:5’-AAATGAGACACAGAGCTATATTCAG-3’引物由生工生物工程(上海)有限公司合成。

1.2.2 PCR扩增

DNA模板2 μL，上下游引物各1 μL，2×Taq PCR Master Mix 12.5 μL，ddH2O 8.5 μL。反应条件：95℃ 5 min；循环95℃ 30 s、55℃ 30 s、72℃ 60 s，共35次；72℃延伸10 min。PCR扩增产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳检测，电泳缓冲液为1×TAE，电泳条件为110 V 25 min，凝胶成像系统拍照保存，阳性对照片段大小为649 bp。

2 结果

2.1 不同地区PCV3检测结果

由表1结果显示，对重庆6个地区20个规模猪场采集的814份猪全血样品进行PCV3检测，PCV3的总样品阳性率为3.1%(25/814)。养殖场阳性率为15%(3/20)。荣昌样品阳性率为0(0/195)，石柱样品阳性率为16.7%(20/120)，丰都样品阳性率为0(0/195)，南川样品阳性率为1.4%(3/210)，长寿样品阳性率为0(0/195)，彭水样品阳性率为2.2%(2/90)，说明重庆地区存在PCV3感染情况。

表1 不同地区PCV3检测结果

2.2 不同生长阶段PCV3检测结果

由表2结果显示，不同阶段感染率分别为：断奶仔猪为1.9%(5/258)，育肥猪为0(0/412)，经产母猪为0(0/124)后备母猪为100%(20/20)。说明断奶仔猪和后备母猪有感染情况，且后备母猪感染是100%。

表2 不同生长阶段样品检测结果

由图1可知，待检测的22个样品中，有20个样品PCV3阳性(2～11、13～22)，这20个阳性样品都来自同一个养殖场，即石柱某养殖场的后备母猪。

3 结论与分析

自从2015年PCV3开始检出以来，PCV3已经慢慢在国内开始流行，因此有必要进一步关注PCV3流行趋势，尽量减小PCV3可能给规模化猪场带来的风险。

此次调查的重庆地区20个规模化猪场，814份猪全血样品，PCV3的总样品阳性率为3.1%(25/814)，总体阳性率不高，和吉林，安徽，广西[4-6]等地地区调查的结果相比相对较低。在荣昌、丰都和长寿等地区皆未发现PCV3感染。2020年重庆市20个规模猪场的PCV3感染程度较低，说明重庆地区的防控体系有效。

注：24—PCV3阴性对照；12—PCV3阳性对照；1～11、13～23检测样品；M—DL2000 DNA Marker。

断奶仔猪有1.9%(5/258)感染PCV3，可能是母猪垂直传播造成的，也可能是外界病原感染，因此猪场环境消毒等生物安全措施很重要。后备母猪感染PCV3达到100%(20/20)，由于采样受限等问题，这次后备母猪采集数量较少，且只采集了石柱某养殖场，因此不能说明该地区感染的严重程度。但是可以说明该猪场PCV3感染比较严重，应该是该场的饲养管理不当造成的。因此该场需要加强PCV3的系统性防控。

受时间和人力的限制，此次调查选择的地区较少，可能与全市实际情况存在一定差异。今后，会持续开展PCV3 感染情况调查，掌握PCV3在重庆地区的流行趋势，为重庆地区的PCV3防控工作提供科学依据。