蕨麻猪生殖道组织结构的研究

陈宗芳, 李赛洋

(1.天祝县畜牧技术推广站,甘肃 天祝 733299;2.西北民族大学)

蕨麻猪又称"虫草蕨麻猪"、“藏豚”、“山猪”，是小型原始地方猪种，由野猪驯化而来。蕨麻猪主要分布在我国西北甘南地区，该地区海拔高，气候寒冷，农作物生长期短，饲料缺乏，属于高寒缺氧、原始无污染的青藏雪域高原。猪只终年靠放牧采食为主，经漫长的繁育发展，逐步形成了这种特殊猪种。与市场上的普通猪相比，蕨麻猪生长周期较长、繁殖率低、体型较小、效益高，但是数量较少。

蕨麻猪由于长年在草原上拱食地下生长的蕨麻(俗称“人参果”)等当地盛产的野生中草药而得名。因为生长环境恶劣，数量稀少，被定为“国家级畜禽遗传保护品种”。经过权威检测，蕨麻猪是唯一具有碳酸酐酶的猪，这使其具有惊人的抗病力和生命力。而且其肉质中所含淀粉酶是其他肉质的2～30倍，不饱和脂肪酸和抗自由基成份含量高，还含有丰富的氨基酸、维生素、矿物质成份。具有强心、改善血液循环、调整血压、抑制癌细胞生长、抗衰老、抗疲劳等药理活性。

目前国内对于蕨麻猪生殖道的相关研究较少。关于蕨麻猪的研究，初期主要内容集中在染色体核型分析，生长发育、肉质特性、血液蛋白(酶)多态性等方面研究，生殖器官生长发育的研究。其次，针对蕨麻猪的种质稀有度，提出了资源保护和开发利用。而现阶段的研究主要集中在蕨麻猪的基因研究上，李军成等对蕨麻猪的生长激素基因序列进行了一系列的研究，研究表明，蕨麻猪与榕江香猪的亲缘关系最近。还有各类多发性疾病，如仔猪大肠杆菌病，肉质性状研究、和其他种类猪的对比研究上。而金光明等应用组织学方法、电镜技术发现猪雌性生殖道黏膜是黏膜免疫的诱导位点。

为了应对市场高需求，本文从繁殖方向着手，主要研究蕨麻猪生殖道结构及组织学特点，以期为后续深入研究蕨麻猪繁殖有关问题提供良好的理论依据。本试验利用苏木精—伊红染色法(hematoxylin-eosin staining)对蕨麻猪生殖道进行分段组织学切片观察。

1 材料与方法

1.1 实验动物

所有动物材料均采自甘南藏族自治州合作市蕨麻猪养殖场，实验过程符合国家动物福利法规，取材前猪只未禁食禁水，且为健康同龄猪只。

采样时，选择6只四月龄性成熟期的空怀期健康蕨麻猪。待驻场工作人员宰杀后，打开腹腔，分别采集生殖道各部位样本：阴道、输卵管(漏斗部、壶腹部、峡部)、子宫(子宫体、子宫颈)、卵巢。采集样本时应保证采集各组织结构完整(阴道管壁的黏膜、肌层、外膜，输卵管壁的黏膜、肌层、浆膜等，结构破坏将影响实验结果)。样本用生理盐水缓慢冲洗，然后迅速投入准备好的4%多聚甲醛溶液中固定12 h，之后换液固定48 h。

1.2 实验仪器与实验试剂

卡诺氏固定液、FAA固定液、各种浓度的酒精(30%、50%、70%、80%、90%、95%、100%)、二甲苯、石蜡、埃利希苏木精染液， 1%伊红酒精溶液，1%盐酸酒精溶液，甘油蛋白粘片剂，郝普特氏粘片剂，中性树胶。

切片刀，切片机(盖迪)，恒温箱(101型)，温台，熔蜡炉，蜡杯，酒精灯，蜡铲，展片台，吸管，镊子，单面刀片，台木，毛笔，洒精灯，包埋盒，染色缸，盖玻片，载玻片，玻片盘，树胶，树胶瓶，显微镜(OLYMPUS BX51)，温度计，脸盆，水浴锅。

1.3 实验方法

1.3.1 石蜡切片的制作 将组织样本进行常规的石蜡包埋。将固定后的组织块置于流水下水洗，水洗时间依固定时间而定。组织进行梯度酒精脱水后，于酒精和二甲苯的混合溶液及二甲苯中透明，然后在58～60℃的温箱中进行浸蜡操作，最后在包埋框中进行组织块的包埋。待蜡块完全凝固后，进行常规石蜡切片(毛笔将切片置于加热后的蒸馏水中进行展片，捞片后，于40～55℃的温度烘片2 h)

1.3.2 HE染色 切片置于切片架上，分别放入二甲苯Ⅰ中浸泡10 min，二甲苯Ⅱ中浸泡10 min，无水乙醇、二甲苯(1:1)中浸泡(缓冲)10 min，无水乙醇Ⅰ、无水乙醇Ⅱ中各浸泡10 min，95%乙醇Ⅰ、95%乙醇Ⅱ、80%乙醇、蒸馏水按顺序分别浸泡5 min，苏木精中浸泡6～8 min，缓流清水冲洗掉多余的染液(15 min)，1%盐酸分色5-10s，自来水冲洗20 min，置于1%伊红溶液中6～8 min，85%乙醇浸泡(颜色淡化5-10 s)，95%乙醇Ⅰ、95%乙醇Ⅱ、无水乙醇Ⅰ中各浸泡5 min，无水乙醇Ⅱ、无水乙醇、二甲苯(1∶1)中浸泡(缓冲)，二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ中各浸泡10 min，最后盖上盖玻片用树胶封片，显微镜下观察。

1.4 统计分析

本实验拟通过蕨麻猪生殖道各部位的HE切片观察各部位的组织学特点，运用横向对比和纵向对比的对比方法，比较蕨麻猪生殖道不同部位的组织学特点。观察阴道、宫颈部、子宫、输卵管(壶腹部、峡部、伞部)的组织学结构，测量各部位黏膜和肌层的厚度，观察各部位黏膜上皮细胞类型的变化情况。通过各部位自身的比较，分析各部位的主要功能和细胞类型。将阴道、宫颈部、子宫、输卵管(壶腹部、峡部、伞部)中具有相同组织结构特点的作对比，将各部位的测量数据做柱状图，并比较，结合各部位功能，分析生殖道各部位的组织学差异。各部位随机取5张切片，每张切片取5个400倍视野范围，测量分析，结果用±SD来表示并进行统计分析，P>0.05差异不显著，P<0.05为差异显著。

2 结果

2.1 生殖道组织学结构

2.1.1 阴道组织学结构

蕨麻猪阴道组织学结构特点如图1所示，阴道管壁由内向外由黏膜层、固有层、肌层组成。黏膜上皮为复层扁平上皮，黏膜下可见散在分布的淋巴集结，黏膜层形成较多纵行皱褶。固有层中纤维结缔组织和基质交错分布，其间分布有大量毛细血管，最外层有一层纵向分布的平滑肌组织。

图1 阴道组织学结构(A:HE×40，B:HE×400，C:HE×400)△为阴道黏膜层，□为阴道固有层，☆为阴道肌层，→为淋巴集结

2.1.2 子宫颈组织学结构

蕨麻猪宫颈部组织学结构特点如图2所示，可见宫颈部管壁由外向内分别由黏膜层、固有层和肌层组成。宫颈部黏膜上皮为复层扁平上皮，形成隐窝，有少量腺体分布，形成较多的皱褶。子宫颈固有层分布有疏松结缔组织、血管和腺体。肌层较发达，内环肌较厚，含有大量的弹性纤维。

图2 子宫颈组织学结构(A:HE×40，B:HE×400，C:HE×200)☆为子宫颈固有层，□为腺样隐窝，→为子宫颈腺体，△为血管

2.1.3 子宫组织学结构

图4 子宫体组织学结构(D:HE×40，E:HE×400，F:HE×400)□为子宫体固有层，☆为子宫体肌层，△为子宫体黏膜层，→可见黏膜固有层中腺体

蕨麻猪子宫组织学结构如图3-4两图所示，可见子宫角管壁由内至外分别为黏膜层、固有层和肌层。子宫角黏膜上皮为单层柱状上皮，黏膜形成褶皱突向子宫腔面，子宫角固有层有大量的腺体、少量的血管和淋巴管分布，子宫角肌层由内环、外纵两层平滑肌组成。子宫体黏膜上皮为单层柱状上皮，分布有杯状细胞、纤毛细胞和分泌细胞，黏膜形成较发达的皱褶，子宫体固有层由疏松结缔组织组成，其中分布有少量腺体和血管，子宫肌层由内环、外纵平滑肌组成，内环肌较发达，内环肌有血管和淋巴管分布。

图3 子宫角组织学结构(A:HE×40，B:HE×400，C:HE×400)□为子宫角固有层，☆为子宫角肌层，△为子宫角黏膜层，→可见黏膜固有层中腺体

2.1.4 输卵管组织学结构

图6 □为壶腹部肌层，△为壶腹部纤毛□为峡部肌层，△为峡部纤毛

图7 输卵管伞部组织学结构(A:伞部HE×40，B:伞部HE×400，C:伞部HE×200)□为伞部固有层血管，△为伞部纤毛

蕨麻猪输卵管组织学结构特点如图5-7三图所示，可见输卵管管壁由黏膜层、固有层和肌层组成。输卵管黏膜上皮为单层柱状上皮，形成许多发达的皱褶，并有分支突向腔面。输卵管壶腹部形成绒毛，绒毛上可见分泌细胞和纤毛细胞，固有层较薄，肌层发达，以环形肌为主，纵行肌散在分布。输卵管峡部形成绒毛，可见微绒毛、分泌细胞和纤毛细胞，固有层极薄，肌层较发达，以环形肌为主，纵行肌散在分布。输卵管伞部形成绒毛，可见微绒毛，肌层较薄，固有层中有纤维结缔组织和丰富的血管。

图5 输卵管壶腹部组织学结构(A:壶腹部HE×40，B:壶腹部HE×400，C:壶腹部HE×200)

2.2 生殖道组织学数据分析

由表1数据可知，蕨麻猪生殖道组织学结构中，阴道黏膜厚度最大(33.71±1.11μm)且与其他部位差异显著(P<0.05)；子宫次之，黏膜厚度为26.41±1.88μm，且与其他部位差异显著(P<0.05)；壶腹部、伞部及峡部黏膜厚度再次之，分别为22.31±1.18μm，21.89±1.30μm，21.68±1.88μm，三者差异不显著(P>0.05)；子宫颈黏膜厚度最小(20.64±0.66μm)，与阴道、子宫差异显著(P<0.05)，与其他部位差异不显著(P>0.05)。

表1 生殖道黏膜平均厚度 μm

由表2数据可知，蕨麻猪生殖道组织学结构中，子宫颈肌层厚度最大(1539.92±199.67μm)，且与其他部位差异显著(P<0.05)；子宫、输卵管壶腹部与阴道部次之，分别为948.06±98.32μm ，891.15±102.49μm，615.76±169.75μm三者无显著差异(P>0.05)，但与其他部位差异显著(P<0.05)；峡部最小，为559.82±116.79μm，与其他部位差异显著(P<0.05)；伞部肌层很薄或者无肌层，未测出数据。

表2 生殖道肌层平均厚度 μm

3 分析

结果显示蕨麻猪生殖道各部位具有不同的组织学特点，分别和其功能相对应。蕨麻猪阴道黏膜上皮为复层扁平上皮，对机体起到机械保护作用，腺管在其中散在分布，可运输粘液，起到润滑作用，且黏膜中含有淋巴细胞等免疫细胞，具有一定的免疫作用，这与金光明等的研究相吻合。

蕨麻猪宫颈部黏膜上皮为复层扁平上皮，具有耐摩擦等保护功能，形成特殊的腺体腺样隐窝，其间也有普通的腺体，且黏膜上皮有杯状细胞分布，分泌粘液流入子宫，具有润滑作用，宫颈部黏膜形成的皱褶比子宫角发达。固有层中有大量的毛细血管、淋巴管和腺体分布。宫颈部肌层较厚，防止精液倒流，猪为子宫内射精动物，这与猪的繁殖特点相吻合。

蕨麻猪子宫角、子宫体黏膜上皮均为单层柱状上皮，具有分泌的作用。黏膜形成许多大小不一的皱褶突向子宫腔面，借助平滑肌有利于运送精子进入输卵管，且子宫体形成的皱褶比子宫角发达。固有层中含有丰富的腺体，分泌粘液。子宫具有发达的内环、外纵两种肌层，这和子宫的生理功能相吻合。

蕨麻猪输卵管黏膜上皮为单层柱状上皮，形成许多皱褶，并有分支突向腔面。输卵管壶腹部形成绒毛，绒毛上可见分泌细胞和纤毛细胞，固有层较薄，肌层发达，以环形肌为主，纵行肌散在分布，这与壶腹部运输受精卵的功能相吻合。输卵管峡部形成绒毛，可见微绒毛、分泌细胞和纤毛细胞，固有层极薄，肌层较发达，以环形肌为主，肌层较壶腹部薄。输卵管伞部形成绒毛，可见微绒毛，肌层较薄，固有层中有纤维结缔组织和丰富的血管。，这说明输卵管具有促进受精及运输受精卵的作用，是卵子受精、卵裂的场所，也是受精卵进入子宫的通道，且具有一定的分泌机能，促进精子流动。

4 结论

蕨麻猪生殖道组织学结构特点与其功能相吻合。