牧场消毒后病原菌筛查及建议

杨文刚 周玉东 盛 涛 张九歌

(1.新疆兵团第七师胡杨河市畜牧兽医站，新疆 奎屯 833200；2.新疆农业大学动物医学学院，新疆 乌鲁木齐 830000)

面对当前严峻的动物疫病防控形势,消毒能有效杀灭病原体,切断动物疫病传播途径。但在实际的养殖生产中,养殖场一味地开展消毒工作，往往忽略消毒后病原菌存在状况，极易造成疫病的传播。笔者选取新疆奎屯垦区2个规模奶牛养殖场，通过采集牧场消毒通道、犊牛舍、产房、挤奶厅、养殖圈舍等消毒后环境样品，以实验室PCR检测为手段，筛查消毒后牧场饲养环境中存在的感染病原菌，为牧场降低疫病传播风险，指导有效开展消毒工作提供参考。

1.检测情况

1.1 检测样品：2020年12月17日到21日期间，按牧场消毒程序消毒后，采集检测2个集约化牧场环境样共41例样品。

1.2 仪器、试剂：荧光定量PCR仪（Gentier 96E）、牛奶致病菌DNA提取试剂盒（深圳易瑞，批号：20090801，规格50T）、16联牛乳腺炎病原菌核酸检测试剂盒（深圳易瑞，批号：20072001，规格50份/盒）、1.5ml离心管。

1.3 实验方法

1.3.1 样本DNA提取：采用牛奶致病菌提取试剂盒提取DNA，依照说明书操作进行提取。

1.3.2 荧光PCR检测：采用16联牛乳腺炎病原菌核酸检测试剂盒，依照说明书操作进行检测。

2.检测结果

检测结果：整体检测过程阴/阳对照结果符合试剂盒要求，根据PCR实验文件Text结果文档导出Excel格式结果，使用软件分析数据后结果见表一、表二。

表1 集约化1牧场24例样本统计

5 - - - - - - ±犊牛舍6-++-±--++7 - + - + - - ±8-++-± - -±9±++-- - -++10+±+----11+± ++ -±±12 + + - + - - ±13 + - + + - - ±14-± -- - -±产房15 - - - - - - -16 - - - - - - -17 - - - - - - -18---±---19 + - + + - - ±消毒间20 + + - + - + ±21 - + - + - + +22 - + - + - - +23---±--+24-+ -+ -±+阳性：++，弱阳性：+，疑似阳性：±，阴性：-（符号对应的Ct值详见说明书）奶牛舍

检测结果表明，集约化1牧场24例样本中共检出酵母菌9例，大肠杆菌9例，葡萄球菌属6例，肠球菌属6例，β-内酰胺酶抗性基因4例，化脓隐秘杆菌2例。

表2 集约化2牧场17例样本结果统计

15 - - - - - - - - -16-± - +-±+--17+ + - + - +±--阳性：++，弱阳性：+，疑似阳性：±，阴性：-（符号对应的Ct值详见说明书）奶厅

检测结果表明，集约化2牧场17例样本中共检出酵母菌12例，肠球菌属10例，大肠杆菌9例，葡萄球菌属8例，化脓隐秘杆菌6例，β-内酰胺酶抗性基因4例，金黄色葡萄球菌1例，牛支原体1例。

3.结果分析

3.1 根据检测结果可知，两个牧场感染类环境型病原菌主要集中在犊牛舍、产房和奶牛舍，其中集约化1牧场犊牛舍和奶牛舍感染大肠杆菌、肠球菌属较为严重，产房感染葡萄球菌属较重。集约化2牧场犊牛舍和产房感染葡萄球菌、大肠杆菌、肠球菌属、化脓隐秘杆菌较为严重，奶牛舍感染肠球菌属、大肠杆菌属、化脓隐秘杆菌较重，奶厅也有葡萄球菌、大肠杆菌属、化脓隐秘杆菌污染。

3.2 葡萄球菌属革兰氏阳性球菌，可通过多种途径侵入机体，引起化脓性感染。大肠杆菌是短杆菌，革兰阴性，对幼畜（禽）常引起严重腹泻和败血症。化脓隐秘杆菌是一种兼性厌氧菌，引起牛的流产和乳腺炎等疾病。肠球菌属革兰氏阳性，无鞭毛、无芽孢，兼性厌氧，家畜最常见是本属菌所致的尿道感染。两个牧场的多个饲养环境均有葡萄球菌、大肠杆菌属、化脓隐秘杆菌、肠球菌属感染，与前期对这两个牧场抽检奶牛乳房炎致病菌样品检测结果基本相符，与当前两个牧场高发犊牛腹泻、奶牛乳房炎有直接关联性。

4.结论

通过牧场各环境样品检测显示，按牧场消毒程序消毒后的两个牧场均存在多种病原菌，且以感染类环境型病原菌：葡萄球菌属、大肠杆菌、化脓隐秘杆菌等为主，显示牧场原消毒程序消毒效果不理想，这也是犊牛舍、产房、奶牛舍发生犊牛腹泻、奶牛乳房炎的主要原因之一。

5.建议

5.1 加强牧场管理

根据实验室检测结果可知目前牧场感染的主要菌群种类，针对以环境型病原菌为主的饲养环境，这两个牧场同属一个公司管理，在牧场关键消毒点的把控需要加强-，避免犊牛腹泻、奶牛乳房炎持续发病的情况发生。建议牧场建立一套牧场消毒技术规范和效果评价体系，对消毒环境进行科学的评价，指导牧场各饲养环境有效开展消毒工作，为牧场健康高效养殖发展提供保障。

5.2 加强牧场消毒工作，规范消毒程序。

针对牧场饲养环境存在的致病病原菌，牧场需通过消毒液药敏实验，筛选对病原菌较为敏感的消毒剂，如选择酚类、醛类、卤素类等，尤其对新疆冬季天气寒冷，液体类消毒液受气温影响较大，选用碱类、固体粉质类两种以上消毒药品交替使用，可有效加强环境消毒，提高消毒效果，不仅可以防止消毒药品滥用，降低病原体耐受性，而且可有效防控疫病传播，降低兽药的使用及因疫病死淘的经济损失。