HPLC法对阿仑膦酸钠成分的测定

魏丽英,李景欣

(福建省厦门市中医院,福建 厦门 361000)

阿仑膦酸钠的英文名为Alendronate[1],作为第三代的双膦胺类药物能够很好的治疗骨质疏松、恶性肿瘤等,主要针对于高钙血症进行治疗。一般来说,阿仑膦酸钠的分子结构有两个膦铵基团,十分容易进行电离,在高效液相色谱法上难以进行保留。在结构上会出现无生色团,在检测时难以使用常规仪器进行检测。对于阿仑膦酸钠来说,常见的检测方式为酸碱定位滴定法、离子交换色谱法等等。随着社会的高速发展,我国人口老龄化越来越严重,患有骨质疏松的人也越来越多,由于骨质结构受到了破坏,降低了骨头的抗压性,十分容易出现骨折的疾病[2]。严重会造成全身骨折,多发于女性。经过近几年的不完全统计,50岁以上有1/3的女性患有骨质疏松。阿仑膦酸钠能够在一定程度上治疗骨质疏松以及防止骨质疏松。

1 阿仑膦酸钠的药学成分

阿仑膦酸钠作为一类骨代谢剂,化学名叫做4-胺基-1-羟基亚丁基。可以根据自身的特点进入到骨质当中,当药物彻底释放之后,能够提高骨细胞的活性,防止骨质疏松的发生。阿仑膦酸钠是第三代的双膦胺类药物,效果比第一代Etidronate药物和第二代Pamidronate都强[8],在上个世纪末在美国被正式纳入骨质疏松治疗用药。该药主要是由碳、氢、水、钠、氮和磷所组成,其化学式为C4H12NaNO7P2-3H2O。

2 实验

阿仑膦酸钠在合成的过程中主要是将Y-氨基丁酸进行水解,将水解后的产物与亚磷酸进行缩合。早在上个世纪末期,美国学者就开展了阿仑膦酸钠的合成方法。以Y-氨基丁酸为原料进行合成,包括氯苯法、熔融法、甲磺酸法等等。譬如在氯苯法当中,将氯苯当做溶剂,对Y-氨基丁酸进行水解,将水解后的产物与亚磷酸等进行缩合,从而得到阿仑膦酸钠。熔融法是美国学者Giorgio Stsibano在上世纪中期所提出的,需要Y-氨基丁酸、亚磷酸进行反应,不要任何的溶剂。因为亚磷酸的熔点与反应温度相似,可以将亚磷酸进行熔融,随后在加入一些Y-氨基丁酸,从而得到液态的混合物,最后在加入三氯化磷等磷酰化物,整体呈酸性,在经过一系列的操作,包括过滤、水解等等,就可以得到阿仑膦酸钠结晶。在这个过程中,反应率需要到70%。我国学者在上世纪末也在此基础上,对熔融法进行了加工,在得到4-胺基-1-羟基亚丁基之后,调节其中的pH值,从而得到单钠盐三水合物。熔融法最突出的特点就是不需要溶剂就可以得到阿仑膦酸钠,并且在水解之后,就能得到阿仑膦酸钠的结晶,整体的操作步骤比较简单,含阿仑膦酸钠成分较高。唯一的缺点就是不能投入生产,无法提高产能。

2.1 仪器和试药

仪器：DIONEX液相色谱仪,UVD170U紫外线检测器。

试药：阿仑膦酸钠药片(石药集团,规格：10mg,批号007110401),9-基甲基氯甲酸酯进口试剂,将甲醇作为色谱纯。

2.2 色谱条件

色谱柱：PLRP-S 100A(4.6mm×250mm,8um)；缓冲盐(14.7g柠檬酸钠,7.05g磷酸氢二钠),在水中进行溶解,调节pH值为8.0,检测其中的波长,266nm,流速为1.0mL/min。

实验溶液：选择阿仑膦酸钠10mg的细粉,使用稀释液的过程中,取29.4g的柠檬酸钠,将其溶解在水中,配置成20μg/mL的溶液,继续将其过滤。随后取50mL中含有5mL的硼酸盐溶液,具体步骤为取硼砂18g,将其加入水中并且稀释,加入5mL的9-基甲基氯甲酸酯溶液,摇30s左右,并在恒温条件下放置30min,加入25mL的二氯甲烷,等充分溶解后,就可当做实验溶液。

对照溶液：需要选取适量的阿仑膦酸钠对照组,并将其配置成20μg/mL的溶液,使用相同的方法制成5mL的对照品溶液。

2.3 检测波长

使用对照溶液,通过照分光光度法,在仪器上进行扫描,波长范围在200～400nm之间,在266nm时,检测到的紫外线吸收最强,所以选择266nm作为检测的波长。

2.4 空白辅料实验

使用空白辅料来形成空白辅料的溶液,使用实验溶液和对照溶液在空白辅料上通过色谱条件进行分析,并在DIONEX液相色谱仪上进行分析,对色谱图进行记录。详见图1,图2。

图1 对照品HPLC色谱图

图2 试验品HPLC色谱图

2.5 精密度测定

对照溶液的浓度为21μg/mL,将药品放入仪器中,得到的结果是RSD为0.61,精密度要求基本符合。

2.6 样品含量测定实验

规格为10g的三种样品,批号分别为007110201,007110401,007111001；70g三种样品,批号分别为152110501,152110801,152111001,通过HPLC以及原紫外法对其进行分析,并在国家药监局颁布的最新标准下进行测定,结果基本一致。

3 讨论

高效液相色谱法(HPLC)主要通过高压系统,将性质不同的溶剂放入固定相的色谱柱当中,并且当溶剂中的各个成分分开,使用检测器对其进行检测。在很多行业当中都有所应用,譬如化学、工业、医学。该方法的具有以下五个特点：①高压,一般会以流动的液体为载体,在色谱柱当中有较大的阻力,为了保证色谱柱的正常运行,必须对其使用高压；②高效,对于所测定液体的分离效率较高；③灵敏度较高,通过紫外检测器能够分离到0.01mg,具有较高的准确性；④应用的范围较广,一般的有机化合物都可以使用高效液相色谱法进行分析；⑤速度较快,相较于传统的色谱法来说,高效液相色谱法有着更快的载体流速。至少可以节省十分钟以上的时间。本文通过高效液相色谱法对阿仑膦酸钠进行分析,阿仑膦酸钠是一种骨代谢调节剂,与人体骨头当中的羟磷灰石有着很亲密的作用,能够增加破骨细胞的活性,降低骨转换率,并且促进骨细胞的吸收。在临床上主要是用于治疗骨质疏松或者防止骨质疏松。在研究中表明,高效液相色谱法对于阿仑膦酸钠的成分测定有着较高的检测效率,并且符合我国的基本标准。

综上所述,高效液相色谱法对于阿仑膦酸钠有着较高的检测价值,受到外部因素的影响较少,有一定的临床价值。