高效液相色谱法测定郁李明荟片中芦荟苷的含量

刘梦燕，刘露，李素凯，李冬冬，陈笑宇，杨锦竹※，王伟

（1.吉林大学，吉林 长春 130012；2.吉林省食品检验所，吉林 长春 130012）

本文中的郁李明荟片保健品是由郁李仁、决明子和芦荟组成的复方片剂，从中医学理论上来讲，郁李仁归脾、大肠小肠经，可下气行滞；决明子入肝肾、大肠经，补肾益气，利水通便；芦荟治肠胃燥热，可健胃下泻，三者同用，具有益气、利水和润肠通便之效。芦荟含有20多种蒽醌类物质[1]，其中芦荟苷和芦荟大黄素是泻下通便的主要成分，但用量过大可能会出现毒理安全性问题[2]。周宇红等[3]实验结果表明，芦荟食用安全性取决于其活性物质蒽醌类泻素（芦荟苷）的含量。因此，对保健食品中的芦荟苷进行质量控制十分必要。

目前，芦荟苷的定量检测方法包括紫外分光光度法、高效液相色谱法（HPLC）、质谱法、薄层层析法、硼砂光度法、毛细管区带电泳法及反向离子对色谱法[4-7]，HPLC法因其有高适应性、高重复性等优点，与其他色谱相比具有显著优越性，被广泛应用于药品检验、保健食品等领域。但郁李明荟片含中药成分复杂，用已有的HPLC方法进行含量测定分离效果极不理想，为对郁李明荟片中芦荟苷含量进行控制，保证该保健品的有效性和安全性，本试验建立了芦荟苷含量测定的新方法，并进行其方法学研究，结果表明该法准确高效，重现性高，试样处理简单，可作为该品中芦荟苷的质量控制依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器设备

Acchrom S3000型高效液相色谱仪;WondaSil C18 Superb（250 mm 4.6 mm，5m）色谱柱；KQ-250DE型数控超声波清洗器；Sartorius BT 25s电子天平。

1.2 试剂与材料

芦荟苷对照品（批号为110787-201206中国药品生物制品检定所）；郁李明荟片为实验室自制（郁李仁、芦荟和决明子按5:5:2的比例配比，辅料为玉米淀粉、硬脂酸镁。规格为0.6 g/片，每片含0.48 g芦荟生药。食用方法为每日2次，2片/次）；甲醇（色谱纯，赛默飞世尔科技有限公司）；磷酸（色谱纯，天津市光复精细化工研究所）；水为试验室双蒸水；其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱填充柱：（WondaSil C18 Superb柱，4.6 mm 250 mm，5m）；流动相：甲醇-0.1%磷酸水溶液（37:63）；检测波长：355 nm；流速：1 mL/min；柱温：25℃；进样量：20L。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 取芦荟苷对照品适量，精密称定，加冰醋酸-甲醇（1:100）制成每1 mL含0.2 mg的溶液，作为对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备 取郁李明荟片适量，研成粉末，过五号筛，精密称定0.2 g，置25 mL的量瓶中，加冰醋酸-甲醇（1:100）适量，超声处理（200 w，40 kHz）40 min，取出后过滤，放置至室温，加冰醋酸-甲醇（1:100）溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过即得供试品溶液。

2.2.3 不含芦荟的阴性对照溶液的制备 取除芦荟以外的两种药材进行提取干燥，相同方法制粒。将所得颗粒按“2.2.2”所述方法进行处理，得到不含芦荟阴性对照溶液。

2.3 方法学考察

2.3.1 专属性试验 分别取对照品溶液、供试品溶液、不含芦荟阴性对照溶液注入色谱仪，记录色谱图。在芦荟苷对照品色谱相应的位置上，样品呈现保留时间一致的色谱峰，样品中芦荟苷的色谱峰与其他色谱峰分离度良好，且阴性样品溶液在对照品峰位置无干扰峰，说明该方法专属性良好，见图1。

图1 HPLC图谱Fig.1 HPLC chromatograms

2.3.2 线性关系考察 将“2.2.1”项下的对照品溶液用冰醋酸-甲醇（1:100）逐步稀释，得到浓度分别为0.054 4 mg/mL、0.108 8 mg/mL、0.163 2 mg/mL、0.2176 mg/mL、0.272 0 mg/mL和0.326 4 mg/mL的芦荟苷对照品溶液，依次吸取各溶液20L，按照“2.1”项下的色谱条件注入色谱仪，记录峰面积，以芦荟苷对照品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，如图2。得到回归直线方程为y=27545x+292.57，R2=0.9995表明芦荟苷在0.054 4~0.326 4 mg/mL范围内线性良好。

图2 芦荟苷标准曲线Fig.2 The standard curve of aloin

2.3.3 精密度试验 将“2.2.1”项下的对照品溶液，按照时间顺序连续进样6次，每次吸取20L，记录峰面积。求得峰面积的RSD值为0.68%（n=6），表明仪器精密度良好。

2.3.4 重现性试验 按照“2.2.2”项下供试品溶液制备的方法对6份郁李明荟片的样品进行处理，取各溶液20L，注入HPLC仪器中进行测定，计算含量。结果表明，6份郁李明荟片的平行样中所含的芦荟苷含量平均值为21.33 mg/g，RSD为0.63%（n=6），说明该方法的重现性良好。

2.3.5 稳定性试验 精密吸取同一份供试品溶液，按照“2.1”项下的色谱条件在0、2、4、8、12、24 h时进样，测定峰面积，得到RSD为0.40%（n=6），表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

2.3.6 加样回收试验 精密称取6份郁李明荟片的药粉，计算其中芦荟苷含量，再各自加入等量的芦荟苷对照品，按照“2.2.2”项下的供试品溶液制备的方法进行处理，吸取20L进行测定，计算各样品中芦荟苷的实测值，计算平均回收率为97.16%，RSD为1.87%（n=6）（表1），表明该测定方法回收率良好。

表1 加样回收率试验结果Table 1 The result of the recovery test

2.4 样品含量测定

从3批郁李明荟片中各取3个平行样，按照“2.2.2”项下供试品溶液制备的方法进行处理，分别吸取20L，注入HPLC仪器中进行测定，3个批次平行样平均值分别为21.05 mg/g、21.00 mg/g和21.36 mg/g。3批含量RSD值为0.92%。表明该品芦荟苷含量稳定，均一性良好。

3 讨论

在供试品处理方法的选择上，本试验同时用甲醇超声和冰醋酸-甲醇（1:100）超声处理供试品，在同一色谱条件下连续进样对比发现，冰醋酸-甲醇（1:100）超声处理方法的供试品稳定性较好，这可能与芦荟苷在酸性条件下更稳定有关。另外，供试品超声后对比了文献中过滤和离心（3 000 r,5 min）两种处理方法[8]，进液相后发现并无明显差别，故选用相对简便的过滤处理方法。在流动相的选择上，以药典方法乙腈-水（25:75）作为流动相时，供试品和对照品都有拖尾现象且分离度不好。查阅文献，重新选取甲醇-0.1%磷酸水作为流动相[9]，经过不断调整，最终确定甲醇-0.1%磷酸水（37:63）为流动相，提高了芦荟苷的分离度，峰形良好。

芦荟中含有多种蒽醌类成分，其中芦荟苷含量较多，是芦荟的代表性成分也是泻下通便的主要功效性成分[10]。本试验采用HPLC法对郁李明荟片中的芦荟苷进行含量测定和方法学研究，建立了芦荟苷含量测定的新方法，结果显示芦荟苷在0.054 4~0.326 4 mg/mL范围内线性良好，回归直线方程为y=27545x+292.57，R2=0.9995；重现性RSD值为0.63%（n=6），重现性良好；平均回收率为97.16%，RSD为1.87%（n=6），表明该方法回收率良好。综上可知该方法稳定可靠，可用于芦荟苷的含量测定和质量控制。