菌毒清胶囊制备工艺及质量研究*

李卓亚，李运景，唐 蕾，赵伟国，梁镇标

（广东省中山市人民医院，广东 中山 528400）

菌毒清颗粒（粤药制字Z20070531）是由中山市人民医院研制的中药复方制剂。笔者参与了探索菌毒清颗粒稳定性和分散片处方优选的前期工作[1－2]。研究发现，菌毒清颗粒具有滋阴降火、凉血利咽等功效，对流行性感冒、咽炎、EB病毒阳性患者有较好疗效[3－7]。动物研究显示，菌毒清提取物对鼻咽癌细胞CNE－2Z荷瘤裸鼠的病情有改善作用[8]。但菌毒清颗粒蔗糖含量较大，在潮湿条件下易结块。硬胶囊剂可掩盖药物的不良气味，提高药物的稳定性和生物利用率，减弱药物的刺激性[9－12]，且制备工艺成熟。本研究中参考了其他中药制剂硬胶囊制备工艺[13－15]，将菌毒清颗粒改造为药效更理想、服用与携带更方便的硬胶囊剂，旨在扩大该药的使用人群，提高患者的用药依从性。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

1200型高效液相色谱仪（美国Agilent公司）；超声仪（天津市奥特赛恩斯有限公司）；AUW220D型电子分析天平（日本Shimadzu公司）；电热鼓风干燥箱（上海实验仪器厂有限公司）；XL－MINI型旋转式制粒机（常州市海江药化机械厂）。

1.2 试药

玄参（批号为20161115）、茜草（批号为20161012）、板蓝根（批号为20161013）、丹参（批号为20161022）、金银花（批号为20160906）、穿心莲（批号为20161207）均购自广州康圣药业有限公司；微晶纤维素（河南正弘药用辅料有限公司，批号为170803）；玉米淀粉（批号为170706）、麦芽糊精（批号为171106），均购自安徽山河药用辅料有限公司；乳糖（批号为161215）、糖粉（批号为171210）、羧甲基淀粉钠（批号为160922）、交联羧甲基纤维素钠（批号为170113），均购自湖州展望药业有限公司；滑石粉（南昌白云药业有限公司，批号为20161021）；乙醇（天津市永大化学试剂有限公司，批号为160625）；菌毒清胶囊（自制品，批号分别为20190706，20190713，20190720）；丹酚酸B对照品（中国食品药品检定研究院，批号为111562－201917，含量＞98%），甲醇、乙腈为色谱纯，甲酸为分析纯，水为双蒸水。

2 方法与结果

2.1 制备工艺

将玄参、穿心莲、茜草、板蓝根、丹参和金银花分别粉碎成粉末。穿心莲粉末用适量85%乙醇浸润、搅匀后浸泡24 h，再以15倍量的85%乙醇渗漉提取，收集合并渗漉液，减压回收乙醇至适量。其余5味药加8倍量水煎煮1.5 h，煎2次，滤过，合并煎液，浓缩成稠膏，与穿心莲浸膏充分混匀，置70℃烘箱内干燥0.5 h，称取处方量的浸膏和微晶纤维素混合后拌匀，以适量的90%乙醇溶液为润湿剂制软材，18目筛制粒，70℃热风干燥约1.5 h，测定含水量小于6%后冷却，加适量交联羧甲基纤维素钠及滑石粉后混匀，先过20目筛去除粗粉，再过80目筛去除细粉，以颗粒外观、吸湿率、休止角和胶囊的崩解时限为考察指标，进行工艺优选。

2.2 制剂工艺条件筛选

填充剂种类：通过查阅相关参考文献和预试验，选用微晶纤维素、玉米淀粉、麦芽糊精、糖粉和乳糖为填充剂，其余制备工艺不变，测定其吸湿率[16]。当选择玉米淀粉和微晶纤维素作为填充剂时，颗粒外观和吸湿性均符合要求，故选用玉米淀粉与微晶纤维素作为填充剂做进一步优化。详见表1。

表1 填充剂种类Tab.1 Selection of filler types

崩解剂种类：以交联羧甲基纤维素钠和羧甲基淀粉钠为崩解剂，其余制备工艺不变，测定其崩解时限[17]和吸湿率。结果可优选交联羧甲基纤维素钠崩解时限为320 s，吸湿率为5.19%，羧甲基淀粉钠崩解时限为440 s，吸湿率为9.71%。

崩解剂和填充剂用量：以微晶纤维素和浸膏用量的比值为因素A，以玉米淀粉和浸膏用量的比值为因素B，以交联羧甲基纤维素钠占处方百分率为因素C，因素水平见表2。以吸湿率为考察指标，采用L16（45）正交试验表进行试验，结果见表2及表4。可见，各因素对处方影响的大小顺序为A＞B＞C，其中A有显著性影响，结合生产实际情况最优配方选择A2B1C2，即微晶纤维素和浸膏用量的比值为3∶1，交联羧甲基纤维素钠占处方的5%。以微晶纤维素为填充剂，以交联羧甲基纤维素钠为崩解剂，用滑石粉为润滑剂，以90%乙醇为润湿剂制备3批颗粒，测定吸湿率和观察颗粒外观，结果批号为20190706，20190713，20190720的样品均为棕黄色颗粒，吸湿率分别为5.26%，5.28%，5.22%。

表2 因素水平表Tab.2 The levels of factors

表4 方差分析结果Tab.4 Results of the ANOVA

润湿剂：以体积分数为85%，90%，95%的乙醇作润湿剂，其余制备工艺不变，测定其崩解时限。结果，颗粒外观分别为长条状、棕黄色、棕黄色，崩解时限分别为284 s，320 s，356 s。故优选90%乙醇作润湿剂。

润滑剂：以4%，5%，6%的滑石粉作润滑剂，其余制备工艺不变，测定其休止角[18]。结果分别为35.1°，33.4°，31.2°，差异不大，故优选4%滑石粉作润滑剂。

胶囊壳型号：测定3批样品的平均堆密度为0.83 g/mL，每粒胶囊装0.40 g，所占体积约0.48 mL，与1号胶囊（0.50 mL）接近，故选用1号胶囊壳。

表3 正交试验设计及结果Tab.3 Design and results of the orthogonal test

2.3 处方工艺验证

基于上述筛选和优化，菌毒清胶囊的最优处方工艺为：以1 000粒投料量计算，菌毒清浸膏91 g，微晶纤维素273 g，交联羧甲基纤维素钠20 g，滑石粉16 g。浸膏在70℃条件下干燥0.5 h，与微晶纤维素混合，拌匀。以适量的90%乙醇为润湿剂制软材，18目筛制粒，70℃热风干燥约1.5 h，测定干颗粒含水量小于6%，冷却后加入交联羧甲基纤维素钠以及滑石粉混合均匀，先过20目筛除去粗粉，再过80目筛除去细粉，整粒，在相对湿度小于60%环境中装入1号胶囊。检测3批样品，结果各项指标均符合2015年版《中国药典（四部）》对胶囊剂的质量要求[19]，表明该工艺可行。详见表5。

表5 工艺验证试验结果Tab.5 Results of the validation test of the technology

2.4 丹酚酸B含量测定

色谱条件：色谱柱为Eclipse XDB－C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流动相为甲醇－乙腈－0.5%甲酸水溶液（28∶10∶62，V/V/V）；流速为1.0 mL/min；检测波长为286 nm；柱温为25℃；进样量为10μL。

样品处理：取样品内容物2.0 g，精密称定，置50 mL容量瓶中，加75%甲醇适量，超声（功率250 W，频率40 kHz）处理30 min，用75%甲醇定容，摇匀，滤过，即得。

方法学考察：精密度、稳定性、重复性试验的RSD均小于2.0%，符合规定。

样品含量测定：经测定，批号20190706，20190713，20190720的样品中丹酚酸B含量分别为0.213，0.186，0.203 mg/g，平均0.201 mg/g。

3 讨论

预试验中，曾采用正交试验法考察乙醇体积分数、乙醇用量、提取时间、浸泡时间对处方中丹酚酸B含量的影响，结果发现丹酚酸B含量均太低，其为丹参中主要水溶性活性成分[20]，且其含量较高，故选用正式研究中的提取工艺并以丹酚酸B为含量测定指标。以微晶纤维素和浸膏用量比值为3∶1，2∶1，1∶1，0进行考察，结果发现比值为3∶1时制备效果最好，于是加大微晶纤维素和浸膏用量比为4∶1时，发现仍然是3∶1时制备效果最佳，故选择微晶纤维素和浸膏用量比值为3∶1。同时发现，相对湿度超过60%时，颗粒含水量明显增多，因此胶囊应在相对湿度小于60%的环境中分装和保存。曾尝试以甲醇－乙腈－5%甲酸水（31∶10∶59，V/V/V）[21]为流动相，但分离效果欠佳，改用正交试验的流动相，结果较满意。

菌毒清颗粒是我院用量较大的验方制剂，但大量蔗糖的加入严重影响了该药的适用人群，菌毒清胶囊可有效避免上述缺点。本方法可行性较强，重复性较好，为菌毒清胶囊的进一步研究奠定了理论基础。