HBV-DNA单独反应性献血者标本检测结果分析

李新建，武丽娟

（安阳市中心血站 1.质管办；2.检验科，河南 安阳 455000）

血液不能人工制造，且不能使用其他物品代替，因此外科手术、重大创伤、大出血等患者的治疗过程中需广大健康、适龄的人群献血，以确保治疗的正常进行[1]。乙型肝炎病毒（HBV）、丙肝病毒（HCV）、艾滋病毒（HIV）是血液传播疾病的中主要病毒，若无偿献血者存在HBV、HCV、HIV感染，则会对输血的安全性产生巨大威胁，既往研究中有学者指出我国HBV的感染率为10.3%，HCV感染率为1～3.1%，全球HIV感染人群中5～10%因血液感染，因此为保障输血安全有必要对献血者的HBV、HCV、HIV进行筛查，降低病毒经血液传播的风险[2-4]。目前酶联免疫吸附法（ELISA）2种试剂盒检查是筛查HBV、HCV、HIV的常用方式，但对于窗口期、隐匿期状态下献血者的血清标本却无法有效鉴别[5]。核苷酸检测（NAT）是一种具有高灵敏度及特异性的HBV、HCV、HIV筛查方式，对缩短窗口期，提高隐匿期病毒检出率具有重要意义[6]。考虑到我国血站NAT多为HBV-DNA单独反应性，而HBV-DNA单独反应性又与HBV、HCV、HIV关系密切，本次研究对本站无偿献血者的HBV-DNA单独反应性进行检测，旨在提高临床输血的安全性，报告如下。

1 资料与方法

1.1 标本来源 选取本站2017年1月-2019年12月309191人份无偿献血者的血液标本，所有献血者献血时采集血液标本5ml，分为3支试管，1支试管为EDTA-K2抗凝真空采血管，对血液标本行血清学、谷丙转氨酶（ALT）检测，另外2支试管为EDTA-K2抗凝带分离胶真空采血管，对血液标本行核苷酸检测。所有血液标本采集后3h内离心，于2～8℃环境下保存送检，所有血液标本于48h内完成检测。

1.2 试剂盒及检测仪器来源 血清检测中乙肝病毒表面抗原（HBsAg）、丙型肝炎病毒抗体（抗-HCV）、梅毒螺旋体抗体（抗TP）试剂盒均由上海科华和北京万泰提供，艾滋病毒抗体（抗-HIV）、ALT试剂盒分别由北京万泰和法国伯乐、贝克曼库尔特实验系统有限公司提供，核苷酸HBV、HCV、HIV检测试剂盒均由罗氏诊断公司提供。检测仪器分别为日本久保田提供的KUBOTA 8420型离心机、瑞士帝肯提供的TECAN型全自动样本处理系统、德国西门子提供的BEPⅢ型全自动酶免分析系统、日本奥林巴斯提供的AU-400型全自动生化分析仪、瑞士罗氏提供的Roche cobas s 201型核酸检测系统、济南鑫贝西提供的BSC-1500ⅡA2-X型生物安全柜。

1.3 血清学检测 血清检测过程中分别使用2种不同生产厂家提供的试剂盒进行检测，检测方法为ELISA，ALT检测使用仪器为全自动生化分析仪。检测结束后2种试剂盒均无反应性视为合格，若某一家试剂盒检测有反应性则对该试剂盒行双孔复试，结果显示双孔均无反应性视为合格；ALT检测ALT≤40U/L视为合格。

1.4 NAT检 测HBV、HCB、HIV核 苷 酸 检 测 为ELISA、ALT检测合格标本，检测时使用罗氏cobas’s 201核苷酸检测系统行6份标本混样检测及拆分检测，首先使用罗氏cobas MPX test 1、2代试剂盒进行检测，若1代试剂盒无法识别反应性病毒种类则送至国家卫生计生委临床检验中心进行鉴定，其中2代试剂盒可明确鉴定HBV、HCB、HIV病毒。检测结果判定时6份检测标本无反应性视为合格，若有反应性则行拆分检测。

1.5 观察指标

1.5.1 分析2017年-2019年无偿献血者NAT检测结果。

1.5.2 分析混样有反应性及拆分有反应性标本CT值分布。

1.5.3 分析175例HBV-DNA单独反应性献血者基础资料信息。

1.5.4 将175例HBV-DNA单独反应性献血者有差异信息纳入Logistic模型，行量化赋值，以是否存在HBV-DNA单独反应性为因变量（Y，是=1），以性别、献血次数、职业为自变量（X），明确发生HBV-DNA单独反应性的危险因素。

1.6 统计学方法 选用SPSS19.0统计学软件对数据进行处理，计量资料以（）表示，组间比较行t检验；计数资料以（%）表示，组间比较行χ2检验；多因素分析采取非条件Logistic逐步回归分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 2017年-2019年无偿献血者NAT检测结果分析2017年-2019年无偿献血者血液标本混样有反应性检出率、拆分有反应性检出率呈现出缓慢的增长趋势，309016人份血液标本中混样有反应检性出率0.07%、拆分有反应性检出率0.06%，其中拆分有反应性检出均为HBV-DNA，未见HCVRNA及HIV-RNA。见表1。

2.2 混样有反应性及拆分有反应性标本CT值分布分析2017年-2019年无偿献血者血液标本混样有反应性、拆分有反应性CT值多集中于＜35、35≤CT＜37、37≤CT＜39,占比分别为9.71%、37.38%、39.32%及17.15%、21.14%、48.57%。见表2。

表2 混样有反应性及拆分有反应性标本CT值分布分析[n，（%）]

2.3 175例HBV-DNA单独反应性献血者基础资料信息分析175例HBV-DNA单独反应性献血者男性明显多于女性、首次献血者明显多于献血次数≥2次者、农民明显多于工人、公务员及其它，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表3。

表3 175例HBV-DNA单独反应性献血者基础资料信息分析[n，（%）]

2.4 发生HBV-DNA单独反应性的多因素Logistic回归分析 将上述有差异信息纳入Logistic模型，行量化赋值，见表4，证实男性、首次献血、农民为发生HBV-DNA单独反应性的危险因素，均有P＜0.05。见表5。

表4 量化赋值表

表5 发生HBV-DNA单独反应性的多因素Logistic回归分析

3 讨论

临床输血导致的病毒感染多为病毒感染的窗口期与乙肝隐匿性感染引起，NAT筛查能够有效降低输血感染风险,在既往研究中已有相关学者证实[7,8]。同时国家卫计委与财政部也联合颁布了《关于做好血站核酸检测工作的通知》，为推进本站的NAT检测工作，响应NAT检测覆盖全国的文件精神,本站收集2017年1月-2019年12月309191人份无偿献血者的血液标本,对ELISA、ALT检测合格的血液标本行NAT检测,并对HBV-DNA单独反应性的检测结果进行分析，为降低HBV、HCV、HIV感染风险，提高临床输血安全性提供帮助。

本次研究结果显示，2017年-2019年无偿献血者血液标本混样有反应性检出率、拆分有反应性检出率呈现出缓慢的增长趋势，309016人份血液标本中混样有反应检性出率0.07%、拆分有反应性检出率0.06%，其中拆分有反应性检出均为HBV-DNA,未见HCV-RNA及HIV-RNA,提示ELISA及ALT检测合格后仍存在HBV漏检的现象,而NAT检测则能降低输血的导致的病毒感染风险[9]。至于本次研究中未检出HCV-RNA及HIV-RNA，分析原因可能与本次研究纳入样本量较少有关，因此后期仍需收集血液标本数据并加以分析,同时也有可能是运输过程中受到外界因素的影响HCV、HIV出现降解，影响了NAT检查结果[10]。另外在混样有反应性、拆分有反应性血液标本的CT值观察中发现，22017年-2019年无偿献血者血液标本混样有反应性、拆分有反应性CT值多集中于＜35、35≤CT＜37、37≤CT＜39,占比分别为9.71%、37.38%、39.32%及17.15%、21.14%、48.57%，表明混样有反应性、拆分有反应性血清标本的CT值分布存在一定差异，因此后续的血清标本NAT检测中或可结合CT值分布增强检测的灵敏度及特异度。

175例HBV-DNA单独反应性献血者男性明显多于女性、首次献血者明显多于献血次数≥2次者、农民明显多于工人、公务员及其它，提示上述因素可能是发生HBV-DNA单独反应性的危险因素。笔者分析具体原因如下：⑴男性的社交活动与生活习惯与女性存在较大的差异，导致男性会有更多的病毒源接触途径与机会，增加病毒感染的风险，同时农民所处的工作环境较差，再加上日常卫生习惯的影响，更容易出现病毒感染。⑵献血过程中献血者会接受一定程度的病感染预防知识宣教，有利于多次献血者熟悉献血相关知识及疾病的预防知识，从而降低≥2次献血者病毒感染的概率[11]。

为验证发生HBV-DNA单独反应性的危险因素，笔者借助Logistic模型进行分析，证实男性、首次献血、农民为发生HBV-DNA单独反应性的危险因素，因此在无偿献血者的HBV、筛查中可对上述因素给予关注，以提高筛查的准确率，降低临床输血的感染风险。与夏传友[12]等研究结果存在一定的相似之处。

综上，NAT检测是筛查HBV、HCV、HIV的有效方式，而混样有反应性、拆分有反应性CT值分布存在一定的差异，或可为NAT筛查提供帮助，同时HBV感染受到性别、献血次数、职业的影响，在NAT筛查中应当予以关注。