血浆及红细胞中哌拉西林他唑巴坦钠及头孢哌酮钠舒巴坦钠相关药物抗体的检测

杨讯，郑章芳，韩海心，王波

（1.南阳市中心医院输血科，河南 南阳 473000；2.南阳市第一人民医院CCU，河南 南阳 473000）

抗生素在临床应用广泛，部分患者出现抗生素治疗的不良反应[1,2]。药物诱导的免疫性溶血性贫血（Drug-induced immune hemolytic anemia，DIHA）是部分患者在使用抗生素治疗过程中发生的一种疾病，该病具有起病急、进展快的特点，严重者可危及患者生命安全，需引起高度重视[3]。据关资料显示[4,5],DIHA的发生与药物抗体的产生密切相关，氟达拉滨、头孢替坦、头孢曲松钠、哌拉西林等药物均可导致DIHA的发生。本研究选取我院收治的1915例住院患者为研究对象，采取微柱凝胶法对哌拉西林他唑巴坦钠及头孢哌酮钠舒巴坦钠相关药物用药者进行相关药物抗体的检测，以便了解本院住院患者哌拉西林他唑巴坦钠及头孢哌酮钠舒巴坦钠相关药物抗体的产生情况及DIHA的发生情况，报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2019年12月-2020年9月本院收治的1915例住院患者为研究对象,男性655例,女性1260例,年龄为0～75岁,平均42.4±11.3岁,其中使用哌拉西林他唑巴坦钠相关药物静脉治疗患者487例,使用头孢哌酮钠舒巴坦钠相关药物静脉治疗患者436例,无哌拉西林他唑巴坦钠用药患者500例,无头孢哌酮钠舒巴坦钠相关药物用药患者492例。所有患者均符合纳入及排除标准，本次研究经过医院伦理委员会审批通过。

纳入标准：⑴有完整临床资料者；⑵无免疫缺陷者；⑶生命体征稳定者；⑷均自愿签署本研究知情同意书。

排除标准：⑴合并溶血相关的血液疾病者，如阵发性睡眠性血红蛋白尿、G6PD缺乏症等；⑵伴有肝胆疾病者；⑶伴有精神或认知障碍者；⑷转至上级医院治疗者；⑸依从性差者；⑹伴有药物过敏史者。

1.2 试剂与仪器 注射用哌拉西林他唑巴坦钠（批号：国药准字H20103062，生产企业：海南通用康力制药有限公司）、注射用头孢哌酮钠舒巴坦钠（批号：国药准字H20044493，生产企业：浙江永宁药业股份有限公司），哌拉西林他唑巴坦钠药物抗体检测微柱凝胶卡（批号：20192400556，生产企业：江苏中济万泰生物医药）、头孢哌酮钠舒巴坦钠微柱凝胶抗球蛋白检测卡（批号：50530.07.18，生产企业：瑞士达亚美）、哌拉西林他唑巴坦钠药物致敏红细胞及药物抗体（阳性、阴性）对照血清、直接抗人球蛋白试剂（批号：20165001，生产企业：上海血液生物医药）、不规则抗体检测试剂（批号：国药准字H20133401839，生产企业：长春博迅生物技术有限责任公司）、抗人球蛋白微柱凝胶检测卡（批号：国药准字H20143401152，生产企业：长春博迅生物技术有限责任公司）及专用孵育器，卡式离心机、血型血清学专用离心机(型号：KA-2200,生产企业：日本久保田公司)。

1.3 方法

1.3.1 样本采集 采EDTA抗凝样本5ml，其中红细胞样本进行直接抗人球蛋白试验检测，直抗阳性者进行酸放散试验（检测患者红细胞放散液中的抗体区分患者属于温自身免疫性溶血还是药物诱导型溶血反应）；血浆样本进行不规则抗体筛选及药物抗体检测，试验严格参照《输血技术操作规程》[6]标准操作。

1.3.2 哌拉西林他唑巴坦钠药物抗体检测方法：⑴哌拉西林他唑巴坦钠药物致敏红细胞和对照细胞制备方法[7]：称取600mg哌拉西林他唑巴坦钠药物,量取pH为9.6的0.1mol/L的巴比妥钠缓冲液15ml，并将药物溶解其中，另加入1ml健康人未使用任何药物的O型压积红细胞,室温不间断混匀孵育1h，孵育后用磷酸盐缓冲液（上海依赫生物科技有限公司提供）配成3%浓度红细胞悬液备用；对照细胞制备方法与致敏红细胞相同，不加药物，缓冲液种类与O型压积红细胞量与致敏红细胞相同。⑵药物抗体检测方法：将待检样本3400r/min离心1min，取上层血浆,生理盐水稀释20倍备用；取哌拉西林他唑巴坦钠药物抗体检测试剂卡，前3孔每孔加入2%～3%药物致敏红细胞悬液各25μl，第4孔加入2%～3%未致敏对照细胞作对照；1孔和4孔加入待检稀释样本血浆50μl，2孔和3孔分别加入阳性和阴性对照血清，混匀，置试剂卡孵育器（37±1）℃孵育1h，之后900r/min离心2min，1500r/min离心3min，30min内观察结果并记录；同时对阳性结果做效价测定，严格按照试剂说明书操作，观察结果并记录。

1.3.3 头孢哌酮钠舒巴坦钠药物抗体检测方法：孢哌酮钠舒巴坦钠药物溶液与待测标本以1:1比例混合均匀，取微柱凝胶广谱抗球蛋白检测卡（抗IgG＋C3d），添加3%浓度红细胞悬液25μl/孔，药物与待测血浆混合液50μl/孔,混匀,置试剂卡孵育器（37±1）℃孵育1h,之后900r/min离心2min,1500r/min离心3min，30min内观察结果并记录。

1.3.4 溶血反应诊断方法 对药物抗体阳性者，根据检验结果与临床特征，参照《药物诱发的免疫性溶血性贫血》[8]判断是否为DIHA。见表1。

表1 用药及未用药者药物抗体阳性检测结果（%）

1.4 统计学处理 采用SPSS19.0软件进行统计学分析，以“”表示计量资料，并t检验；以“例（%）”表示计数资料，并以检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 用药及未用药者药物抗体阳性检测情况 哌拉西林他唑巴坦钠及头孢哌酮钠舒巴坦钠用药者药物抗体阳性检出率分别为8.62%、3.90%，均高于未用药者药物抗体阳性检出率（P＜0.05），在哌拉西林他唑巴坦钠用药者中发现1例发生溶血反应。

2.2 哌拉西林他唑巴坦钠及头孢哌酮钠舒巴坦钠用药治疗者药物抗体阳性相关因素比较 用药天数为影响哌拉西林他唑巴坦钠及头孢哌酮钠舒巴坦钠用药治疗者药物抗体阳性检出率的因素（P＜0.05），见表2、表3。

表2 哌拉西林他唑巴坦钠用药治疗者药物抗体阳性相关因素比较结果

表3 头孢哌酮钠舒巴坦钠用药治疗者药物抗体阳性相关因素比较结果

3 讨论

哌拉西林他唑巴坦钠属于半合成青霉素类抗生素，具有抗菌活性强、疗效显著等特点；头孢哌酮钠舒巴坦钠是头孢菌素头孢哌酮钠与β-内酰胺酶抑制剂舒巴坦钠合成的复方制剂，该药具有灭菌效果强、毒性低的特点[9-11]。哌拉西林他唑巴坦钠与头孢哌酮钠舒巴坦钠在临床应用广泛，部分患者在用这2种药物治疗后出现DIHA等不良反应症状，严重者甚至威胁了患者生命安全，需高度重视，故积极探讨哌拉西林他唑巴坦钠及头孢哌酮钠舒巴坦钠相关药物抗体的产生情况及DIHA的发生情况十分重要。

本研究发现，在我院487例哌拉西林他唑巴坦钠用药治疗者中，42例为药物抗体阳性者，9例为DAT阳性者，并发现DIHA患者1例；436例头孢哌酮钠舒巴坦钠用药治疗者中，17例为药物抗体阳性者，3例为DAT阳性者,未发现DIHA患者；哌拉西林他唑巴坦钠及孢哌酮钠舒巴坦钠用药患者药物抗体阳性检出率均高于与未用药者，2种药物抗体阳性与患者用药天数相关。哌拉西林他唑巴坦钠作为广谱本合成青霉素,对多种革兰氏阳性、革兰氏阴性需氧及厌氧菌均具有明确抗菌效果；头孢哌酮钠舒巴坦钠作为广谱酶抑制，对金黄色葡萄球菌、阴性杆菌产生的β-内酰胺酶具有强烈的抑制效果,不仅可以有效抑制细菌细胞壁的合成，而且也可有效抑制细菌细胞的增殖，进而发挥杀菌作用[12-14]。随着患者使用哌拉西林他唑巴坦钠与头孢哌酮钠舒巴坦钠药物时间的延长,患者体内产生药物抗体的概率也随之增加，故在临床治疗中，患者需避免长期使用单一抗生素治疗，避免出现耐药、药物抗体。相关研究表明[15]，哌拉西林他唑巴坦钠药物可导致严重免疫溶血反应，而本研究中哌拉西林他唑巴坦钠药物造成的1例DIHA患者症状较轻，推测可能与个体体质、免疫能力、用药时间、药物抗体效价相关，若患者体内出现高效价药物抗体则出现严重溶血反应，具体原因仍需进一步探讨。本研究的体会：临床在应用此类药物治疗时，医护人员需密切关注患者可能存在的药物不良反应，避免长期、单一使用该类药物治疗，使用抗生素药物前应仔细核实药物使用史、药物过敏史、家族变态反应史、药物抗体等情况，同时密切监测血常规、尿常规、肝肾功能等指标，以便及时发现问题，进而确保用药安全。

综上，哌拉西林他唑巴坦钠及头孢哌酮钠舒巴坦钠药物治疗患者可产生药物抗体，用药天数影响其药物抗体检出率。